급성 간 부전 또는 ALF는 일반적으로 건강 한 간 에서 간 손상의 급속 한 개발으로 정의 하 고 그것의 주요 기능의 심각한 장애를 동반. 정형소 간 이식은 대부분의 경우에 사용할 수있는 유일한 치료법입니다. 그러나 간 기증자의 부족으로 인해 ALF 환자의 사망률은 매우 높습니다.
대체 치료 접근법의 잠재력을 연구하고 ALF의 병리생리학을 더 잘 이해하기 위해 질병의 동물 모델이 사용됩니다. ALF 모델의 대부분은 아세트아미노펜, 탄소 테트라클로라이드, 콩카바레닌 A, 리포폴리사카라이드, D-갈라토사민 및 티오아세타미드의 간독성 효과를 기반으로 합니다. 그러나, 이들은 가난한 재현성과 가역성, 그밖 중요한 기관에 독성, 인간 적인 질병 병리학 및 종 변이의 나쁜 반사와 같은 몇몇 단점이 있습니다.
따라서, 재현 할 수 있고 치료 개입의 효과를 연구하기에 충분한 시간 간격을 허용하는 더 나은 모델 시스템에 대한 필요성이있다. 현재 연구에서, 쥐에 있는 ALF 모형은 부분 적인 간 절제술과 아세트아미노펜 간독성의 효력을 결합하여 만들어졌습니다. 간의 중앙분리대 및 좌측 측엽은 70%의 간 질량을 소비하기 위해 제거되고, 아세트아미노펜은 ALF를 유발하도록 주어집니다.
모델에서 ALF의 개발은 생화학적 및 조직학적 분석및 간 손상의 가역성을 특징으로 하며, 시너지 건강 쥐 간세포의 이식에 의해 확인되었다. Wistar 쥐의 범위 내에서 체중을 갖는 180 받는 것 250 그램 현재 연구에서 사용 되었다. 다음 단계는 쥐에 있는 ALF의 유도를 위한 외과 절차를 기술합니다.
이 동물은 케타민-자일라진 혼합물을 인트라바이트로 주입하여 마취된다. 완전한 마취는 동물의 발가락을 꼬집는 것으로 확인되며 페달 반사가없는 경우에만 추가 절차가 수행됩니다. 각막 건조를 방지하기 위해, 카박스 메틸 셀룰로오스 기반의 안약이 양쪽 눈에 적용됩니다.
동물은 흰색 테이프를 사용하여 수술 보드에 구속됩니다. 모발은 전기 클리퍼를 사용하여 오른쪽 상부 복부 수술 부위에서 제거됩니다. 70%에탄올과 포비단 요오드의 3개의 교대스크로 수술 부위를 소독하여 서식하는 면 패드를 사용하여 순환 동작으로 소독합니다.
절단할 피부는 시포이드와 흉곽에 수직이고 흉곽과 평행한 흉골 바로 아래에 표시됩니다. 1센티미터 정도 3센티미터의 개구부를 갖는 멸균 드레이프 시트가 표시된 피부에 배치됩니다. 약 2~3센티미터의 횡절개는 메스의 도움으로 표시된 선을 따라 만들어집니다.
절개 부위 부근에 근본적인 근육층이 있는 피부 부착물은 멸균 촉촉한 면 팁에 의해 부드럽게 제거됩니다. 다음으로, 횡단 절개는 xiphoid 프로세스 바로 아래에 있는 수막 층을 통해 이루어집니다. 간의 왼쪽 엽은 두 개의 식염수 모이스텐 코튼 팁의 도움으로 흉부에 부드러운 압력을 제공함으로써 노출됩니다.
멸균 나일론 실 루프는 노출된 간 엽 주위에 미끄러져 있습니다. 루프는 마이크로 해부 집게 또는 면 봉오리의 도움으로 조심스럽게 로브의 기지로 이동합니다. 미세 수술 바늘 홀더와 마이크로 집게의 도움으로 루프의 두 끝이 묶여 매듭을 가능한 한 엽의 바닥에 가깝게 배치합니다.
이것은 혈관을 수축시키고 간 엽이 제거 된 후 출혈을 줄이는 것입니다. 두 개의 추가 매듭이 다른 쪽에 묶여 있습니다. 묶인 엽은 허혈성 그루터기를 남기는 미세 수술 가위를 사용하여 매듭 바로 위에 절단됩니다.
마찬가지로, 간의 중앙엽은 면 팁을 사용하여 들어 올려줍니다. 간의 중앙엽의 독특한 모양을 인식합니다. 나일론 스레드 루프를 로브 위에 놓고 끝을 단단히 묶습니다.
두 개의 추가 매듭은 다른 쪽에 묶여 로브를 절제합니다. 로브를 제거한 후, 복막은 흡수가능한 catgut chromic 4/0 흡수성 봉합사를 사용하여 봉합되며, 간편한 방해 봉합사로 피부 봉합이 뒤따릅니다. 피부 가결 후, 포비도요오드 용액은 수술 부위 주변에 적용됩니다.
커튼 시트가 제거되고 동물이 수술 장에서 이륙합니다. 5%의 포도당 용액 1ml에 12 밀리그램 cefotaxime의 항생제 복용량은 수술 후 감염의 위험으로부터 보호하기 위해 동물에게 내과간으로 주어집니다. 수술 후 통증 완화를 위해, 진통 멜록시캄, 일반적으로 1 kg 체중 당 mg은 동물에게 피하로 주어지며, 이틀 동안 매일 복용량을 복용합니다.
동물은 따뜻한 회복 케이지로 이동됩니다. 동물은 30~40분 이내에 의식이 생기고 움직이기 시작합니다. 수술된 동물은 수술 상처가 완전히 치유될 때까지 격리되어 있으며, 3~4일이 걸릴 수 있습니다.
ALF유도를 위해, 아세트아미노펜의 kg 체중당 750밀리그램과 멜록시캄의 두 번째 투여량은 부분 적인 간절제술 시술 후 24시간 동안 인과단위로 주입된다. 이 복용량 처방 후 반복 24 시간. ALF의 유도 후, 동물의 생존이 심각하게 감소된 것으로 나타났다.
ALF의 발달을 특성화하기 위해, 수술된 동물은 아세트아미노펜의 두 번째 투여 후 안락사되었고, 다양한 생화학적 및 조직학적 연구가 이루어졌다. 결과는 비디오에서 앞서 설명됩니다. ALF 유도군에서 생존율은 아세트아미노펜의 24시간 이내에 심각하게 감소하고 최대 80%의 사망률이 관찰된 것으로 나타났다.
간 손상은 ALF 유도 단에 있는 형태학 수준에서 명백하고 단지 70% 부분 간 절제술 단. 대조군과 아세트아미노펜 치료군만이 건강한 모습을 보였습니다. 알라닌 아미노 트랜스퍼라제의 효소 수준, 아파르타테 아미노 트랜스포아제 및 알칼리성 인산염은 다른 그룹에 비해 ALF 유도 군에서 높은 상승된 것으로 나타났다.
qPCR에 의한 유전자 발현 프로파일의 분석은 세포사멸, 염증 및 간 상해의 진행에 관여하는 유전자의 높은 발현을 보여주었습니다. 간 조직 섹션의 헤마톡시린과 에신 염색은 대조군에서 주로 정상적인 간세포가 나타났다. ALF 그룹에서, 대부분 적당한 매크로 정맥지방변성을 관찰하였다.
Prothrombin 시간 및 국제 정규화 비율은 ALF 유도단에서 상승되는 것을 발견되었습니다, 방해한 혈액 응고 과정을 나타내는. 생존율은 합성 건강한 쥐 간세포의 이식 후 ALF 유도 군에서 회복되는 것으로 나타났다. 효소 알라닌 아미노 트랜스퍼라제, 아파르타테 아미노 트랜스포아제 및 알칼리성 인산파아제의 혈청 수준은 세포 이식 후 ALF 유도 동물에서 회복되는 것으로 밝혀졌다.
쥐에서 ALF를 유도하는이 방법은 재현 할 수 있습니다, 좋은 가역성을 보여주고 새로운 치료를 테스트하는 적절한 시간 창을 제공합니다. 따라서,이 모델은 ALF를 치료하는 잠재적 인 치료 접근 방식의 평가를위한 효율적인 질병 모델역할을 할 수 있습니다.
