The authors acknowledge the funding support from the Ministry of Education, Singapore, grant number MOE2010-IF-1-025.

모든 동물 실험은 응용 과학의 학교, 테마섹 폴리 테크닉의 동물 관리 및 사용위원회에 의해 승인되었습니다. DMN 1. 준비 <ol><li> 피펫 (200) DMN의 μL (1 ㎍ / ㎖ 원액)와 주입을위한 10 ㎎ / ㎖의 DMN 용액을 제조 PBS의 19.8 ml를 추가합니다. 참고 : DMN은 발암입니다. 동물의 주사를 DMN을 준비하고 수행하는 흄 후드를 사용합니다. </li></ol> DMN 2. 복강 내 주사 <ol><li> 200g - 150의 평균 무게 남성의 Wistar 쥐를 사용합니다. 실험의 시작 7 일 전 - 4 쥐를 적응. </li><li> 12 시간 빛과 12 시간 어두운 사이클, 22 ± 1 ℃의 실온에서 쥐를 유지한다. 쥐 Chow 및 임의 량의 물을 제공한다. </li><li> 매일 음식과 물 섭취량을 측정합니다. 체중 주간을 측정합니다. </li><li> 10 mg / kg 체중의 투여 량에 기초하여 각각의 래트에 대해 DMN의 양을 계산한다. 25 게이지 바늘 t으로 1 ML의 주사기를 사용하여오 주사기에 DMN 솔루션의 계산 된 볼륨을 그립니다. </li><li> 복강 내 주사 (21)의 쥐를 억제. </li><li> 쥐가 제대로 억제로, 복부의 오른쪽 아래 사분면에 바늘을 소개 복부 공간에 바늘의 정확한 위치를 확인하고 천천히 DMN 솔루션을 주입 (아무것도 흡입 될 수 없습니다) 주사기의 플런저에 다시 그립니다. </li><li> DMN의 용량이 투여되면, 천천히 바늘을 인출하고 샤프 함으로 처리. </li><li> 4 주간 일주일에 3 일 연속 DMN의 복강 내 주사를 수행합니다. 매일 같은 시간에 주사 투여. 주사 매주의 시작에서의 체중에 기초하여 용량을 다시 계산한다. </li><li> 생화학 적 매개 변수를 측정하기 위해 꼬리 정맥 주에서 혈액을 수집 : 알라닌 아미노 전이 효소 (ALT)와 아스 파르 테이트 아미노 전이 효소 (AST) 22. </li><li> 상업 수의사를 사용하여 측정 혈청 ALT 및 AST테스트 화학 분석기. </li></ol> 3. 총 검사 및 간 수확 <ol><li> 100 mg / kg 체중의 용량으로 복강 내 펜토 바르 비탈의 주사에 의해 래트를 안락사. 심장 박동의 부족을 확인하여 죽음을 확인합니다. </li><li> 사후 부검을 준비하고 복부 위쪽으로 향하게 지느러미 드러 누움의 해부 보드에 파킨슨 병 등. (23) 장소 죽은 쥐에 의해 설명 된대로 동물의 상태를 평가합니다. </li><li> 소독 및 70 % 에탄올로 피부를 적셔. </li><li> 가위를 사용하여 피부를 턱 항문에서 ventrum의 전체 길이를 절개하고, 피부를 반영한​​다. 가위로 복부 내장을 노출, 칼 모양의 연골에 항문에서 복벽을 절개. </li><li> 어떤 이상이 있는지 확인하기 위해 현장에서 복부 장기를 검사합니다. 색상, 크기 변화, 장기의 위치 및 복강 내의 액체의 존재를 참고. 검사기관의 일관성과 어떤 냄새의 존재를 확인합니다. </li><li> 가위와 집게를 사용하여, 그것의 인대 및 첨부 파일의 전체 간 무료 해부. <ol><li> 이 진동판에 부착 된 hilus에서 시작 및 첨부 파일의 모든 간 로브를 무료로 작동합니다. 조심스럽게 모든 인대, 혈관을 잘라. </li></ol></li><li> 배양 접시에 간 이동 및 간 무게. </li><li> 5mm 간 로브의 두께 섹션 - 메스를 사용하여, 2를 잘라. 일관성을 위해, 항상 같은 간 로브에서 샘플을 채취. 고정을 위해 오른쪽 측면 로브에서 두께에 쐐기를 10 % 포르말린에 lobe.Immediately 장소의 가장자리에서 약 24 1cm를 약 5 mm 직경을 가지고. 포르말린 볼륨 조직 1:10 이상인 것을 확인. </li><li> 다른 연구에 필요한 경우 수확은 바로이 시점에서 간 로브 (액체 질소를 사용하여) 부분을 고정. 일관성을 위해 같은 간 엽에서 (3.8), 샘플에 관해서. </li></ol><ol><li> 24 시간 이상 동안 10 % 완충 포르말린에서 간 샘플을 고정한다. </li><li> 고정 후, 간을 잘라 카세트에 배치하고 자동화 된 조직 프로세서의 바구니에로드. </li><li> 10 % 포르말린을 포함하는 제 1 스테이션에 카세트와 바구니를 놓습니다. 확인 카세트가 완전히 침수된다. 사이클이 시작될 때까지 그들은 최대 12 시간 동안이 방에서, 남아있을 수있다. </li><li> (50 %, 70 %, 90 %, 100 % (2 국), 크실렌 (2 연)과 유동 파라핀의 농도의 에탄올 : 다음 방법을 포함하는 연속 스테이션을 통해 1 시간마다 카세트 회전 티슈 프로세서 프로그램 2 연). </li><li> 매립 역 왁스 욕에 간 샘플을 옮긴다. 매립 기계는 적어도 한 시간 빠른 켜져 있는지 확인합니다. </li><li> 사용하여 미리 예열 집게는 (65 ° C)에서, w에서 각 카세트를 제거매립 기계의 따뜻한 판 (65 ° C) 상에 도끼 목욕 및 장소. 스테인레스 강 기재 금형 내로 유동 파라핀의 충분한 양을 조제 전체의 절반까지 (65 ° C로 미리 예열). 금형에 카세트에서 간 부분을 전송합니다. 시험편의 절단면에 배치되어 있도록 상기 몰드의 바닥 평면 (현미경으로 검사한다). </li><li> 액체 파라핀 완전히 금형을 채우기 위에 빈 카세트를 장착하고 적어도 30 분 동안 냉각 매립 기계의 4 ° C를 판에 금형을 배치합니다. </li><li> 왁스가 냉각 및 응고 것을 확인하고, 몰드에서 파라핀 블록을 제거합니다. 블록은 쉽게 튀어과 스틱 또는 균열 안된다. 이 경우, 블록을 용융이 단계를 반복합니다. 이 응고 후 파라핀 블록을 절단 할 수있다. 블록은 수년 동안 실온에서 저장 될 수있다. </li><li> 왁스 층까지 10 μm의 두께로 마이크로톰 및 구역에 파라핀 블록을 배치내장 된 간 조직이 표시 될 때까지 충분히 제거된다. </li><li> 5 μm의 두께로 잘라 마이크로톰의 설정을 변경합니다. 집게를 사용하여, 모서리를 잡고 잘 절단 부분을 집어 조심스럽게 40 ℃에서 수조에서 섹션 로트. </li><li> 부드럽게 부동 섹션에서 깨끗한 유리 슬라이드를 배치하고 유리 슬라이드의 표면에 올립니다. 하룻밤 37 ° C에서 따뜻한 슬라이드에 슬라이드를 놓습니다. </li></ol> 5. 메이슨 트리 크롬 염색 <ol><li> 다음과 같이 얼룩을 적용하기 전에, 상기 왁스를 제거하고 조직을 재수 슬라이드 치료 : <ol><li> 5 분 동안 크실렌의 섹션을 담가. 배를 반복합니다. </li><li> 3 분 동안 100 % 에탄올 섹션을 담가. 1 배를 반복합니다. </li><li> 90 %, 80 % 및 70 % : 1 분 에탄올의 다음과 같은 솔루션의 각 섹션을 담가. </li></ol></li><li> 슬라이드에 기존의 에탄올을 제거하기 위해 수돗물에서 슬라이드를 씻어. </li><li> 핵을 염색하는 10 분 동안 철 헤 마톡 실린 슬라이드를 담가. </li><li> 슬라이드에서 여분의 얼룩을 제거하기 위해 물에 슬라이드를 씻어. </li><li> 세포질을 염색하는 데 2​​ 분 동안 Biebrich 스칼렛 - 산 푹신에서 슬라이드를 담가. </li><li> 물 슬라이드를 씻어. </li><li> 아닐린 블루의 흡수를 촉진하기 위해 10 분 동안 포스 / 몰리브덴 산 용액에 슬라이드를 놓습니다. 사용의 2 라운드 경기 인 텅스텐 / 몰리브덴 산 용액을 변경합니다. </li><li> 콜라겐 섬유를 염색하는 10 분 동안 아닐린 블루 솔루션에 슬라이드를 놓습니다. </li><li> 물을 초과 얼룩을 씻어 차별화 슬라이드의 색이 더 섬세하고 투명 렌더링하는 자리를 차지할 수 있도록 1 분 동안 1 % 아세트산 용액에 슬라이드를 배치합니다. </li><li> 물 슬라이드를 씻어 조직 섹션을 탈수로 진행합니다. 다음과 같이 탈수 단계는 다음과 같습니다 </li><li> 다음 conce에, 10 초 때마다 연속적으로 슬라이드를 빠져에탄올 ntrations : 70 %, 80 %, 95 % 및 100 %. </li><li> 100 % 에탄올에 30 초간 담가 슬라이드. 1 배를 반복합니다. </li><li> 5 분마다 제거하는 에탄올 자일 렌의 3 국을 통해 슬라이드를 씻어. </li><li> 설치 미디어 (예를 들어, DPX의 mountant)와 시편 위에 유리 커버 슬립을 마운트하고 건조 할 수 있습니다. 주 : DPX는 빨리 건조 얼룩을 보존하고 조직 절편 보호 합성수지이다. </li></ol> 간의 메이슨의 Trichome 스테인드 섹션 6. 섬유증 점수 <ol><li> 수의학 병리학이 25 개의 점수 섬유증에 따라 섬유화의 정도를 평가합니다. 섬유화 점수가 맹검 방식으로 독립적으로 두 개 또는 세 개의 병리학 자에 의해 수행되는 경우가 최적 일 것이다. 이러한 시나리오에서는 득점의 차이점을 제압 토론 및 그룹의 검토 후 최종 점수를 얻을 수 있습니다. </li></ol><table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody><tr><td> 점수 </td><td> 기술 </td></tr><tr><td> 0 </td><td> 어떤 섬유증 없습니다 </td></tr><tr><td> 1 </td><td> 또는 짧은 섬유 성 격막이없는 일부 포털 지역의 섬유 확장, </td></tr><tr><td> 이 </td><td> 또는 짧은 섬유 성 격막이없는 대부분의 포털 영역의 섬유 확장, </td></tr><tr><td> 삼 </td><td> 대부분의 포털 영역의 섬유 확장, 포털에 가끔 포털 (PP) 브리징 </td></tr><tr><td> 4 </td><td> 중앙 (PC에 표시 브리징 ((PP를 포털에 포털)뿐만 아니라 포털과 포털 지역의 섬유 확장) </td></tr><tr><td> (5) </td><td> 가끔 결절 (불완전 간경변)와 (PP 및 / 또는 PC)를 브리징 표시 </td></tr><tr><td> 6 </td><td> 간경변, 가능성 또는 확정 </td></tr></tbody></table> 표 1 : 섬유증은 메이슨의 Trichome 스테인드 간 섹션 (25) 읽기에 사용 점수.

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저자는 더 경쟁 재정적 이해 관계가 없음을 선언합니다.

우리는 간 섬유화 동물 모델을 만들기 위해, 간 섬유증의 정도를 평가하는 방법을 설명 하였다. DMN의 정확한 용량을 제공하고 주간 복강 내 주사의 일정을 준수하는 것이 중요합니다. 실험이 진행되는 동안, 래트 체중 및 DMN 주사의 매주의 시작시에 용량을 다시 계산하는 것이 중요하다. DMN은 독성과 연기 캐비닛에서 처리 될 필요가 명심하십시오. 우리는뿐만 아니라 연기 캐비닛에 복강 주사를 ?...

DMN은 강력한 간 특정 독소이다. 래트의 간 부상을 야기하기 위해 대사 조직 분포 및 능력 매기 1로보고하고, 아폽토시스에 의한 간세포 손상과 세포 사멸의 메카니즘은 프리 차드 및 버틀러 (2)에 의해 설명되었다. 이 화합물의 간헐적 투여 개와 쥐 3,4에서 간 섬유증을 유발하는 것으로보고되었다. 메커니즘과 간 섬유증의 형태 학적 변화는 광범위하게이 모델을 사용하여 조사되었다. 래트를 사용하는 초기 연구에서, DMN 3 주간의 치료 지방증 5없이 micronodular 간경변 뒤에 중심 소엽 출혈성 괴사를 일으켰다. 그것은 초기 섬유화에 그를 줬습니다 형성 콜라겐 더 크로스 타입 I (6)보다 더 눈에 띄는되는 유형 III와 연결했다. 다른 원인에 대해 공통적으로, DMN 유발 섬유증 변화는 쿠퍼 ​​세포에서의 증가와 관련되었다; 내가 상주 간 대 식세포n은 사인 곡선. 이 세포는 근육 섬유 모세포로 변신하고 섬유증 7의 기본 문제가 세포 외 기질의 과도한 양을 생산하고 있습니다. 세포 신호 전달의 측면에서, 나카무라 등. TGF-β는 간 섬유증 (8)의 진행에 중요한 역할을한다는 것을 입증 하였다. 그들은 특히 TGF-β 신호를 억제하기 위해, 절단 II 형 TGF-β 수용체를 발현하는 아데노 바이러스를 사용했다. 대조군에 비해 이들 쥐의 간 섬유증은 눈부시게 DMN 처리 동안 중단 하였다. 다른 연구는 TGF-β의 억제가 간 섬유증 개발 9,10의 완화로 연결 것으로 확인되었습니다. 이 모델은 또한 항 섬유증 치료 11 약물 표적으로 사용할 수있는 다른 섬유증 마커 단백질을 식별하기위한 글로벌 유전자 프로파일 링 연구에서 사용 하였다. 기타 화학 물질을 포함 티오 아세트 아미드 (TAA)와 C를 간 섬유화를 유도하는 데 사용ARBON 테트라 클로라이드 (사염화탄소). TAA는 쥐에서 이상 마우스 (12)에서 처음 사용되었다. 이 모델의 장점은 다음과 같습니다 : 화학 물질 관리의 용이성을 물, 특성 micronodular 간경변 및 생화학 적 변화 모델의 재현성을 마시는. 단점은 다음을 포함한다 : 간 섬유증 3 개월 장기간 개발 및 간 섬유증의 유도 분자 메카니즘에 대한 이해의 부족. 사염화탄소에 관해서는, 그것의 사용은 다음과 같은 이유로 거절했다 : 그것은 인간의 간 질환을 모방하지 않습니다, 오존층에 해로운 영향이 동물에게 고통과 고통의 원인, 인간에게 매우 독성 및 취급에 제공되는 추가주의 사항 및 필요합니다 처분 13, 14. 간경변에 대한 실험 모델로 (수술 적 치료에 의해) 장기간 담관 폐쇄가 먼저 Kountouras 등. (15)에 의해보고되었다. 이 방법은 인간과 동물에 독성이있다. However 개발하는 간 섬유증에 필요한 시간은 변한다. 마르케스 등. (16) 30 보고서의 검토, 간 섬유증 개발하는 것이 수술 후 4 주 7 일간 갔다 것으로 나타났습니다. 설명 병리학 적 변화는 인간의 만성 담즙 성 섬유증의 사람들을 모방하고 모델이 분야에 관심있는 연구자에 대한 더 적합 할 것이다. 요약하면 4 주 동안 쥐에 DMN의 일정한 용량의 간헐적 투여은 인간의 질병을 모방 간 섬유증을 생산하고 있습니다. 투여 된 쥐 간 손상 및 실질 섬유화 4,17의 진보적 인 발전을 보여줍니다. 질병의 진행 정도와 특정 시점에서 혈액 샘플 또는 동물의 희생을 통해 감시 할 수 있으며, 그 효과는 18 재현성이다. 따라서이 모델은 광범위 간 섬유화 및 간경변의 메커니즘을 연구뿐만 아니라 잠재적 인 항 섬유증 제제 10,19,20 스크리닝하기 위해 사용되어왔다.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Dimethylnitrosamine</td>
			<td>Wako</td>
			<td>147-03781</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Formalin</td>
			<td>Sinopharm chemicals</td>
			<td>F63257009</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>64-17-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylene</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>1330-20-7</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Masson trichome stains</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Aniline Blue</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>#42755</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acid Fuschin</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>RT42685</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scarlet Red</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>#26905</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphotungstic Acid Hydrate</td>
			<td>ALFA AESAR</td>
			<td>ALFA40116.4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphomolybdic Acid Hydrate</td>
			<td>Sigma SG</td>
			<td>221856-25G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Weigert&#39;s Iron Hematoxilyn</td>
			<td>Merck</td>
			<td>1.15973.0002</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DPX Mounting Medium</td>
			<td>Merck</td>
			<td>HX066873</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue processor</td>
			<td>Leica</td>
			<td>Leica TP 1020</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Embedding machine</td>
			<td>Sakura</td>
			<td>&#160;Sakura Tissue Tek TEC5 Embedding System</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microtome</td>
			<td>Leica</td>
			<td>Leica RM 2235</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vet Test Analyzer</td>
			<td>Idexx</td>
			<td>Vet Test 8008</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

the dimethylnitrosamine induced liver fibrosis model in the rat

세 개의 주에서 6 수컷 위 스타 래트 간 섬유화 동물 모델을 제조 하였다. 이 과정은 일주일에 세 가지 일 연속 복강 주어진 10 ㎎ / ㎏이 dimethylnitrosamine (DMN)의 투여 4 주 필요합니다. DMN이 알려진 hepatoxin과 발암 물질로 복강 주사는 흄 후드에서 수행 하였다. 이 모델은 몇 가지 장점이 있습니다. 첫째, 간 변경은 순차적으로 또는 관심의 특정 단계에서 공부하실 수 있습니다. 둘째, 간 질환의 단계 혈청와 ALT 및 아스 파르 테이트 아미노 트랜스퍼 라 아제 (AST) 효소의 측정에 의해 모니터링 될 수있다. 셋째, 다른 단계에서 간 손상의 정도는 메이슨의 Trichome 염색 간 조직의 조직 학적 검사 한 후, 지정된 시점에서 동물을 희생하여 확인할 수있다. DMN 투여 4 주 후, 전형적인 섬유화 점수는 5 Ishak 규모 6이다. 이 모델은 일관되게 재생 될 수있다널리 전위 항 섬유증 제제의 효능을 평가하기 위해 사용된다.

DMN 처리 된 쥐들은 체중을 잃고 주름 장식 헤어 코트 덜 활발한된다. DMN 처리 된 쥐의 평균 체중에 상당한 손실이; 제 2 검출 후의 DMN 처리 주,이 차이는 DMN 처리 (도 1a) 후 3 주와 4를 통해 유지된다. 쥐가 연속 주간 DMN을받을 때, 간 손상은 작아됩니다. 간 지수; 이는 최종 체중의 간 중량의 비율이 DMN 처리 된 쥐들 (도 1b)에 대한 낮았다이다. <p clas...

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The Dimethylnitrosamine Induced Liver Fibrosis Model in the Rat

We describe a method to produce an animal model of liver fibrosis in the rat, and assess the degree of fibrosis by histological examination of the liver. The model can be used to study the development of liver disease as well as to test the efficacy of potential anti-fibrotic agents.

쥐에이 dimethylnitrosamine 유도 된 간 섬유화 모델

Four to six week old, male Wistar rats were used to produce animal models of liver fibrosis. The process requires four weeks of administration of 10 mg/kg ...

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Research

JoVE Journal

Medicine

11.9K 조회수.  Temasek Polytechnic. We describe a method to produce an animal model of liver fibrosis in the rat, and assess the degree of fibrosis by histological examination of the liver. The model can be used to study the development of liver disease as well as to test the efficacy of potential anti-fibrotic agents.

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A Model of Chronic Nutrient Infusion in the Rat

Chronic exposure to excessive levels of nutrients is postulated to affect the function of several organs and tissues and to contribute to the development of the many complications associated with obesity and the metabolic syndrome, including type 2 diabetes. To study the mechanisms by which excessive levels of glucose and fatty acids affect the pancreatic beta-cell and the secretion of insulin, we have established a chronic nutrient infusion model in the rat. The procedure consists of catheterizing the right jugular vein and left carotid artery under general anesthesia; allowing a 7-day recuperation period; connecting the catheters to the pumps using a swivel and counterweight system that enables the animal to move freely in the cage; and infusing glucose and/or Intralipid (a soybean oil emulsion which generates a mixture of approximately 80% unsaturated/20% saturated fatty acids when infused with heparin) for 72 hr. This model offers several advantages, including the possibility to finely modulate the target levels of circulating glucose and fatty acids; the option to co-infuse pharmacological compounds; and the relatively short time frame as opposed to dietary models. It can be used to examine the mechanisms of nutrient-induced dysfunction in a variety of organs and to test the effectiveness of drugs in this context.

A protocol for chronic infusions of glucose and Intralipid in rats is described. This model can be used to study the impact of nutrient excess on organ function and physiological parameters.

쥐의 만성 영양 주입의 모델

Chronic exposure to excessive levels of nutrients is postulated to  affect the function of several organs and tissues and to contribute to the  ...

연구

의학

Tibial Nerve Transection - A Standardized Model for Denervation-induced Skeletal Muscle Atrophy in Mice

The tibial nerve transection model is a well-tolerated, validated, and reproducible model of denervation-induced skeletal muscle atrophy in rodents. Although originally developed and used extensively in the rat due to its larger size, the tibial nerve in mice is big enough that it can be easily manipulated with either crush or transection, leaving the peroneal and sural nerve branches of the sciatic nerve intact and thereby preserving their target muscles. Thus, this model offers the advantages of inducing less morbidity and impediment of ambulation than the sciatic nerve transection model and also allows investigators to study the physiologic, cellular and molecular biologic mechanisms regulating the process of muscle atrophy in genetically engineered mice. The tibial nerve supplies the gastrocnemius, soleus and plantaris muscles, so its transection permits the study of denervated skeletal muscle composed of fast twitch type II fibers and/or slow twitch type I fibers. Here we demonstrate the tibial nerve transection model in the C57Black6 mouse. We assess the atrophy of the gastrocnemius muscle, as a representative muscle, at 1, 2, and 4 weeks post-denervation by measuring muscle weights and fiber type specific cross-sectional area on paraffin-embedded histologic sections immunostained for fast twitch myosin.

The tibial nerve transection model is a well-tolerated, validated, and reproducible model of skeletal muscle atrophy. The model surgical protocol is described and demonstrated in C57Black6 mice. &#160;

경골 신경 절개 - 마우스의 탈 신경에 의한 골격근의 위축에 대한 표준 모델

The tibial nerve transection model is a well-tolerated, validated, and reproducible model of denervation-induced skeletal muscle atrophy in rodents. ...

Method of Direct Segmental Intra-hepatic Delivery Using a Rat Liver Hilar Clamp Model

Major hepatic surgery with inflow occlusion, and liver transplantation, necessitate a period of warm ischemia, and a period of reperfusion leading to ischemia/reperfusion (I/R) injury with myriad negative consequences. Potential I/R injury in marginal organs destined for liver transplantation contributes to the current donor shortage secondary to a decreased organ utilization rate. A significant need exists to explore hepatic I/R injury in order to mediate its impact on graft function in transplantation. Rat liver hilar clamp models are used to investigate the impact of different molecules on hepatic I/R injury. Depending on the model, these molecules have been delivered using inhalation, epidural infusion, intraperitoneal injection, intravenous administration or injection into the peripheral superior mesenteric vein. A rat liver hilar clamp model has been developed for use in studying the impact of pharmacologic molecules in ameliorating I/R injury. The described model for rat liver hilar clamp includes direct cannulation of the portal supply to the ischemic hepatic segment via a side branch of the portal vein, allowing for direct segmental hepatic delivery. Our approach is to induce ischemia in the left lateral and median lobes for 60 min, during which time the substance under study is infused. In this case, pegylated-superoxide dismutase (PEG-SOD), a free radical scavenger, is infused directly into the ischemic segment. This series of experiments demonstrates that infusion of PEG-SOD is protective against hepatic I/R injury. Advantages of this approach include direct injection of the molecule into the ischemic segment with consequent decrease in volume of distribution and reduction in systemic side effects.

A unique rat liver hilar clamp model was developed for studying the impact of pharmacologic molecules in ameliorating ischemia-reperfusion injury. This model includes direct cannulation of the portal supply to the ischemic liver segment via a branch of the portal vein, allowing for direct hepatic delivery.

쥐 간 문부 클램프 모델을 사용하여 직접 분절 인트라 간 납품 방법

Major hepatic surgery with inflow occlusion, and liver transplantation, necessitate a period of warm ischemia, and a period of reperfusion leading to ...

Rat Model of the Associating Liver Partition and Portal Vein Ligation for Staged Hepatectomy (ALPPS) Procedure

Recent clinical data support an aggressive surgical approach to both primary and metastatic liver tumors. For some indications, like colorectal liver metastases, the amount of liver tissue left behind after liver resection has become the main limiting factor of resectability of large or multiple liver tumors. A minimal amount of functional tissue is required to avoid the severe complication of post-hepatectomy liver failure, which has high morbidity and mortality. Inducing liver growth of the prospective remnant prior to resection has become more established in liver surgery, either in the form of portal vein embolization by interventional radiologists or in the form of portal vein ligation several weeks prior to resection. Recently, it was shown that liver regeneration is more extensive and rapid, when the parenchymal transection is added to portal vein ligation in a first stage and then, after only one week of waiting, resection performed in a second stage (Associating Liver Partition and Portal vein ligation for Staged hepatectomy = ALPPS). ALPPS has rapidly become popular across the world, but has been criticized for its high perioperative mortality. The mechanism of accelerated and extensive growth induced by this procedure has not been well understood. Animal models have been developed to explore both the physiological and molecular mechanisms of accelerated liver regeneration in ALPPS. This protocol presents a rat model that allows mechanistic exploration of accelerated regeneration.

Rat Model of the Associating Liver Partition and Portal Vein Ligation for Staged Hepatectomy ALPPS Procedure

Inducing rapid liver hypertrophy using Associating Liver Partition and Portal vein ligation for a Staged hepatectomy (ALPPS) has been proposed for resection of borderline resectable liver tumors. This model may elucidate mechanisms involved in rapid hypertrophy and allows testing of drugs that promote or block the acceleration of regeneration.

연결 간 파티션과 무대 Hepatectomy (ALPPS) 절차에 대 한 포털 정 맥 결 찰의 쥐 모델

Recent clinical data support an aggressive surgical approach to both primary and metastatic liver tumors. For some indications, like colorectal liver ...

Re-Arterialized Rat Partial Liver Transplantation with an in vivo Vessel-Oriented 70% Hepatectomy

Split liver transplantation and living liver donor liver transplantation were developed in the clinic to utilize liver organs in a more efficient manner. To better understand the mechanism behind these surgical procedures, a rat partial liver transplantation (PLTx) model was established for relevant surgical studies. Because of the complexity of the rat PLTx model, a protocol with detailed descriptions is required. An article published previously reported a protocol in which ex vivo hepatectomy was used to achieve 50% rat PLTx. In contrast to this protocol, we introduced a re-arterialized PLTx with an in vivo 70% hepatectomy. An updated vessel-oriented hepatectomy was incorporated into the rat PLTx to refine the microsurgical procedure. The portal veins and hepatic arteries of the left lateral lobe and the median lobe were individually dissected and ligated before removal of the liver parenchyma, thereby decreasing the probability of bleeding in the remnant liver stump. Furthermore, an end-to-side vessel anastomosis between the common hepatic artery and the enlarged proper hepatic artery was introduced to re-arterialize the hepatic artery. By using this end-to-side vessel anastomosis technique, the diameter of the anastomosis was enlarged, thereby decreasing the difficulty of hand suture and maintaining a high rate of anastomotic patency. Moreover, the cuff anastomosis of the infrahepatic vena cava was slightly modified. A section of circumferential liver parenchyma around the vena cava of a recipient was preserved during cuff anastomosis to maintain the three-dimensional shape of the vascular lumen. This section of liver parenchyma was removed after completing the anastomosis. With this modification, the step involving placement of stay sutures was omitted, thereby further shortening the cuff anastomosis time. By using this protocol of rat PLTx, a low liver enzyme level, an intact liver lobular architecture and a high survival rate were achieved after microsurgery.

Re-Arterialized Rat Partial Liver Transplantation with an in vivo Vessel-Oriented 70% Hepatectomy

Here, a protocol involving re-arterialized rat partial liver transplantation is presented. Specifically, 70% liver was resected in vivo by using an updated technique of vessel-oriented hepatectomy. The hepatic artery was reconstructed in an end-to-side manner. The cuff technique was modified to shorten the anastomosis time of the infrahepatic vena cava.

다시는 vivo에서 선박 지향 70% 쥐 부분 간 이식 Arterialized Hepatectomy

Split liver transplantation and living liver donor liver transplantation were developed in the clinic to utilize liver organs in a more efficient manner. ...

Isometric Contractility Measurement of the Mouse Mesenteric Artery Using Wire Myography

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and drugs. It is widely used in many studies on the physiological functions of vascular smooth muscle, the pathogenesis of vascular diseases such as hypertension, and the development of smooth muscle relaxant drugs. The mouse is a widely used model animal with a large pool of disease models and genetically modified strains. We introduced this method to measure the isometric contraction of mouse mesenteric artery in detail. A 1.4-mm segment of mouse mesenteric resistance artery was isolated and mounted on a myograph chamber by passing two steel wires through its lumen. After equilibration and normalization steps, the vessel segment was potentiated by a high-K+ solution twice prior to the contraction assay. As an example of the application of this method in drug development, we measured the relaxant effect of a novel natural substance, neoliensinine, isolated from a Chinese herb, embryos of the lotus seed (Nelumbo nucifera Gaertn.) on mouse mesenteric arteries. The vessel segments mounted on the myograph chamber were stimulated with a high-K+ solution. When the force tension reached a stable sustained phase, cumulative doses of neoliensinine were added to the chamber. We found that neoliensinine had a dose-dependent relaxant effect on smooth muscle contraction, thus suggesting that it bears potential activity against hypertension. In addition, as the vessel segment can survive at least 4 hours after mounting and maintain contractility induced by the high-K+ solution for many times, we suggest that the wire myograph system may be used for the time-consuming process of drug screening.

The wire myograph technique is used to investigate vascular smooth muscle functions and screen new drugs. We report a detailed protocol for measuring the isometric contractility of the mouse mesenteric artery and for screening new relaxants of vascular smooth muscle.

Myography 와이어를 사용 하 여 마우스 Mesenteric 동맥의 isometric 수축 측정

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and ...

Left Atrial Stenosis Induced Pulmonary Venous Arterialization and Group 2 Pulmonary Hypertension in Rat

The mechanism of mitral stenosis-induced pulmonary venous arterialization and group 2 pulmonary hypertension (PH) is unclear. There is no rodent model of group 2 PH, due to mitral stenosis (MS), to facilitate the investigation of disease mechanisms and potential therapeutic strategies. We present a novel rat model of pulmonary venous congestion-induced pulmonary venous arterialization and group 2 PH caused by left atrial stenosis (LAS). LAS is achieved by constricting the left atrium using a half-closed titanium clip. After the LAS surgery, a rat model with a transmitral inflow velocity greater than or equal to 2.0 m/s on echocardiography gradually develops pulmonary venous arterialization and group 2 PH over an 8- to 10-week period. In this protocol, we provide the step-by-step procedure of how to perform the LAS surgery. The presented LAS rat model mimics MS in humans and is useful for studying the underlying molecular mechanism of pulmonary venous arterialization and for the preclinical evaluation of therapies for group 2 PH.

Left atrial stenosis (LAS) is a novel surgical technique used for studying group 2 pulmonary hypertension (PH) and mechanisms underlying pulmonary venous arterialization. Here, we present a protocol to constrict the left atrium using a titanium clip to cause pulmonary venous arterialization and moderate PH in a rat.

왼쪽된 심 방 협 유발 쥐에서 그룹 2 폐 동맥 고혈압과 폐 정 맥 Arterialization

The mechanism of mitral stenosis-induced pulmonary venous arterialization and group 2 pulmonary hypertension (PH) is unclear. There is no rodent model of ...

Reduced Complications after Arterial Reconnection in a Rat Model of Orthotopic Liver Transplantation

The rat orthotopic liver transplantation (OLT) model is a powerful tool to study acute and chronic rejection. However, it is not a complete representation of human liver transplantation due to the absence of arterial reconnection. Described here is a modified transplantation procedure that includes the incorporation of hepatic artery (HA) reconnection, leading to a marked improvement in transplant outcomes. With a mean anhepatic time of 12 min and 14 s, HA reconnection results in improved perfusion of the transplanted liver and an increase in long-term recipient survival from 37.5% to 88.2%. This protocol includes the use of 3D-printed cuffs and holders to connect the portal vein and infrahepatic inferior vena cava. It can be implemented for studying multiple aspects of liver transplantation, from immune response and infection to technical aspects of the procedure. By incorporating a simple and practical method for arterial reconnection using a microvascular technique, this modified rat OLT protocol closely mimics aspects of human liver transplantation and will serve as a valuable and clinically relevant research model.

The goal of this study is to modify the rat orthotopic liver transplant model to better represent human liver transplantation and improve recipient survival. The presented method reestablishes hepatic arterial inflow by connecting the donor liver&#39;s common hepatic artery to the recipient liver&#39;s proper hepatic artery.

직교 간 이식의 쥐 모형에 있는 동맥 재연결 후에 감소된 합병증

The rat orthotopic liver transplantation (OLT) model is a powerful tool to study acute and chronic rejection. However, it is not a complete representation ...

Murine Precision-Cut Liver Slices as an Ex Vivo Model of Liver Biology

Understanding the mechanisms of liver injury, hepatic fibrosis, and cirrhosis that underlie chronic liver diseases (i.e., viral hepatitis, non-alcoholic fatty liver disease, metabolic liver disease, and liver cancer) requires experimental manipulation of animal models and in vitro cell cultures. Both techniques have limitations, such as the requirement of large numbers of animals for in vivo manipulation. However, in vitro cell cultures do not reproduce the structure and function of the multicellular hepatic environment. The use of precision-cut liver slices is a technique in which uniform slices of viable mouse liver are maintained in laboratory tissue culture for experimental manipulation. This technique occupies an experimental niche that exists between animal studies and in vitro cell culture methods. The presented protocol describes a straightforward and reliable method to isolate and culture precision-cut liver slices from mice. As an application of this technique, ex vivo liver slices are treated with bile acids to simulate cholestatic liver injury and ultimately assess the mechanisms of hepatic fibrogenesis.

This protocol provides a simple and reliable method for the production of viable precision-cut liver slices from mice. The ex vivo tissue samples can be maintained under laboratory tissue culture conditions for multiple days, providing a flexible model to examine liver pathobiology.

뮤린 정밀 절단 간 슬라이스 간 생물학의 Ex Vivo 모델로

Understanding the mechanisms of liver injury, hepatic fibrosis, and cirrhosis that underlie chronic liver diseases (i.e., viral hepatitis, non-alcoholic ...

Organ Ischemia-Reperfusion Injury by Simulating Hemodynamic Changes in Rat Liver Transplant Model

Orthotopic liver transplantation (OLT) in rats is a tried and proven animal model used for preoperative, intraoperative, and postoperative studies, including ischemia-reperfusion injury (IRI) of extrahepatic organs. This model requires numerous experiments and devices. The duration of anhepatic phase is closely related to the time to develop IRI after transplantation. In this experiment, we used hemodynamic changes to induce extrahepatic organ damage in rats and determined the maximum tolerance time. The time until the most severe organ injury varied for different organs. This method can easily be replicated and can also be used to study IRI of the extrahepatic organs after liver transplantation.

This paper provides a detailed description of how to build an animal model of the anhepatic phase (liver ischemia) in rats to facilitate basic research into ischemia-reperfusion injury after liver transplantation.

쥐 간 이식 모형에 있는 혈역학적인 변경을 시뮬레이션하여 기관 허혈-재관류 상해

Orthotopic liver transplantation (OLT) in rats is a tried and proven animal model used for preoperative, intraoperative, and postoperative studies, ...