이 절차의 전반적인 목표는 자유롭게 마모셋을 면도하는 만성 전기 생리학적 기록을 위한 미세 전극 어레이의 이식에 관여하는 수술 단계를 설명하는 것입니다. 마모셋은 신경 과학 연구에서 점점 더 사용되고있는 작은 영장류입니다. 이 동물들은 설치류의 실용적이고 물류적인 이점을 많이 공유합니다.
젊은 나이에 트위닝과 높은 fecundity에 대한 그들의 성향은 크고 유전적으로 유사한 집단에 대한 준비가 된 접근을 의미합니다. 또한, 그들의 작은 몸 크기는 그들을 쉽게 하 고 상대적으로 저렴 한 배려. 영장류로서, 마모셋은 설치류보다 인간과 훨씬 더 유사한 중추 신경계를 가지고 있습니다.
여기에는 고도로 발달된 전두엽 피질과 시각 시스템이 포함됩니다. 그러나 마모셋이 영장류의 다른 많은 종보다 더 많은 장점이 있지만, 유전적으로 수정하는 데 진전이 있습니다. 깊게 시퀀싱된 게놈과 성공으로 창립자 노크인과 노크아웃 동물을 발생시키는 것은 마모셋이 건강과 질병에서 뇌 기능을 연구하는 강력한 모델이 될 준비가 되어 있음이 분명합니다.
연구 두뇌 기능을 위한 일반적인 방법은 해부학적으로 특정 위치에 전극을 이식하는 관련시킵니다. 이것은 만성적으로 깨어 있고 자유롭게 행동하는 동물에 있는 다른 표적 지역에 있는 신경 활동을 기록하는 것을 허용합니다. 수술 전에 모든 임플란트 및 가이드에 대한 내장 제로 좌표를 결정합니다.
이렇게 하려면 전극 홀더에 이식될 각 전극 어레이를 부착하고 하나의 마이크로 와이어를 내성 0으로 설정합니다. 이어바가 만나는 곳입니다. 필요한 경우 추가 전극 배열 및 홀더에 대해 이 작업을 반복합니다.
또한, 24 게이지 바늘이 유사하게 스테레오탁스 프로브 홀더에 부착되어 이 것을 반복한다. 전기 생리학적 배열의 경우 접지 와이어가 사용될 다른 모든 나사로 납땜되어야 합니다. 마지막으로, 수술 절차에 대비하여 모든 기기, 장비 및 일회용을 구성하고 살균합니다.
수술 당일 동물은 마취를 시작하기 전에 6 시간 동안 먹지 않았습니다. Atropine및 케타민순에 의해 마취를 유도 하는 데 사용 됩니다., 근육 주사. 다음으로, 이발소 클리퍼를 사용하여 동물 머리를 면도합니다.
수술 중에 동물을 삽관하는 것이 중요합니다. 우리의 바람직한 방법은 우리가 supine 위치에있는 동안 우리가 동물 개 뒤에 삽입 수술 테이블에 탄성 밴드를 부착하는 것을 포함한다. 다음으로 면 기울어진 프로브를 사용하여 마모셋의 혀를 말리고 한 손으로 잡습니다.
이를 통해 기술자는 한 손으로입과 기도를 열 수 있습니다. 내막튜브를 삽입한 후, 인공 인공 인공 호흡기를 분당 40호흡으로 설정하여 마취 어셈블리에 부착하십시오. 필요에 따라 테이프로 튜브와 조립을 보호합니다.
마모셋이 이제 경향이 있는 위치에 있는 동물의 머리를 스테레오탁스 프레임으로 고정시합니다. 이렇게하려면 먼저 오른쪽 이어 바의 끝을 동물의 오른쪽 청각 운하에 삽입하십시오. 왼쪽 이어 바가 왼쪽 청각 운하로 들어갔다.
다음으로, 전방/후방 평면이 가운데있는 동안 수평 평면이 프레임과 평행할 수 있도록 헤드를 수평해야합니다. 이는 동등한 거리에서 고정된 이어바 측정값을 사용하여 동물의 머리를 먼저 중심으로 합니다. 이에 따라, 입 조각은 동물의 입에 삽입하고, 그것은 동물의 팔레트에 닿을 때까지 조정, 궤도 바는 궤도 뼈의 낮은 마진을 만지고있는 동안.
수평 평면은 궤도 뼈의 낮은 여백과 외부 청각 메디우스의 중심을 통과하는 평면으로 정의되기 때문에 궤도 뼈의 아래 표면이 이제 진행하기 전에 이어 바의 중앙과 수평으로 정렬되어 있는지 확인해야 합니다. 절차 도중, 모든 생명 표시를 유지하는 것이 중요합니다. 따라서 휴대용 펄스 산소계를 마모셋의 손에 연결하여 심박수와 산소 포화도가 허용 가능한 범위 내에 있는지 확인해야 합니다.
또한 37도 의 섭씨에 대한 설정 홈더믹 가열 패드에 연결된 직장 온도 프로브, 꼬리에 테이프, 마모셋의 체온이 마취에 의해 부정적인 영향을받지 않도록합니다. 마지막 수술 전 단계는 동물의 면도머리를 클로르헨시딘과 요오드로 청소하고 소독한 후 동물을 살균 수술장으로 덮는 것입니다. 이 부위에 국소 진통제를 적용한 후 두피의 중간선에서 절개를 수행합니다.
두개골 의 표면을 준비하려면 먼저 두개골에서 측두근을 조심스럽게 분리하십시오. 이것은 메스로 두개골에 삽입된 포사를 절단하여 수행됩니다. 그 후, 측두근은 부드럽게 두개골에서 분리되어야한다, 페리오스텔스 raspatory를 사용하여.
페리오스텔스 광유를 계속 하면 긁어내어 노출된 모든 두개골에서 골막분리가 제거됩니다. 다음으로, 뼈 표면에 얕은 버 구멍을 만들고 두개골 절제술의 둘레를 드릴아웃하여 두개골 절제술의 위치를 표시합니다. 필요에 따라 6~8개의 나사 구멍을 두개골에 넣고 나사를 이식합니다.
이 때, 접지 전선이 인접한 납땜 나사 주변의 주어진 나사로 납땜된 바람을 맞춥시다. McPherson 집게를 사용하여 두개골 의 중심에 있는 뼈를 제거합니다. 뇌와 듀라 메이트가 발견되는 동안 멸균 식염수로 수분을 유지합니다.
두라 마더를 제거하려면 25 또는 26 게이지 바늘을 약 90도구부려 뇌 표면에서 두라 마터의 표면을 구멍을 뚫고 들어 올려야합니다. 이 시점에서, 마이크로 가위는 듀라 마터를 소비하는 데 사용됩니다. 전극을 스테레오탁마이크로조작기에 부착하여 전극이 원하는 전방/후방 및 내측/측면 좌표에 배치합니다.
이제 뇌 표면에 닿을 때까지 전극 의 끝을 낮춥습니다. 원하는 등대/복부 좌표에 도달할 때까지 배열을 뇌에 천천히 삽입합니다. 전기 연결을 보장하기 위해 접지 와이어와 각 나사 사이에 은 페인트 한 방울을 추가합니다.
노출된 두개골, 나사 및 전극 배열에 치과 아크릴을 적용하여 두개골에 전극을 고정하십시오. 추가 어레이로 이 이식 절차를 반복합니다. 마지막으로, 치과 아크릴을 사용하여 배열의 측면 범위 주위에 튼튼한 헤드 캡을 만들고 지상 전선과 노출된 두개골이나 나사를 완전히 시상하십시오.
필요한 경우 헤드 캡에 지지 바를 삽입하여 치과 아크릴로 밀봉할 수 있습니다. 머리 모자의 생성에 따라 근육이나 뼈 조직이 노출되는 경우 피부를 봉합합니다. 방부제 용액은 이 때 상처에도 적용되어야 합니다.
수술이 완료되면 회복을 시작할 때입니다. 첫째, 산소가 아닌 이소플루란 공급을 끄고, 스테레오탁스 프레임에서 동물을 제거한다. 내트라큐리 튜브를 통해 산소가 유지되는 가열 페이지에 동물을 놓습니다.
후두 경련과 같은 신경 성 반사 신경의 첫 징후가 시작되면 내막 튜브를 제거하십시오. 동물은 보호 반사 신경, 자세 톤 및 앰플 시도와 같은 마취 회복의 명확한 징후를 제시 할 때까지 산소는 이제 마스크와 함께 공급되어야한다. 마모셋은 개별적으로 보관되어야하며, 24 ~48 시간 동안 깨끗한 케이지와 방에서 회복하기 위해 방치한 후 홈 케이지로 돌아갑니다.
이식된 동물은 별도의 케이지에 보관해야 합니다. 수술 후 적어도 한 시간 동안 동물을 관찰하여 고통의 징후와 특히 조정되지 않은 움직임을 관찰하는 것이 중요합니다. 항생제와 진통제 및 항염증제는 통증을 조절하고 감염을 예방하기 위해 수술 후 며칠 동안 투여되어야 합니다.
성공적인 수술에서, 동물은 3 ~ 5 일 이내에 완전히 복구해야합니다. 우리는 전기 생리학 기록 세션이 수술 후 적어도 1 주일 시작하는 것이 좋습니다. 각 기록 세션의 시작 부분에서 가볍게 이소플루란을 사용하여 동물을 마취하고 신경 기록 시스템에 전극 배열 커넥터를 연결합니다.
실험 챔버 내부에 동물을 배치하고 녹음을 시작하기 전에 전체 마취 회복을 기다립니다. 성공적인 수술 후, 몇 주 동안 이식 된 전극에서 스파이크 와 지역 필드 잠재력을 기록 할 수 있습니다. 궁극적으로 전극 어레이가 성공적으로 표적 구조물에 이식되었다는 최종 확인은 사후 형성되어야 한다.
전기 트랙을 포함하는 Nissl 스테인드 섹션은 각 이식 된 마이크로 와이어의 위치를 결정하는 데 사용할 수 있습니다. 깨어 있는 행동 동물에 있는 만성 전기 생리학 기록은 신경 과학 연구의 많은 선에서 이용된 강력한 기술입니다. 일반적인 마모셋은 역사적으로 인기있는 모델에 비해 많은 장점을 제공하므로이 비디오의 목적은 다른 신경 과학자들이 연구를 위해 일반적인 마모셋을 채택할 수 있도록 돕는 것입니다.
이 비디오에 자세히 설명된 바와 같이 만성 기록 전극의 이식 외에도 동일한 스테레오탁스 수술 프로토콜은 자극 전극의 이식, 가이드 카눌라 및 미세 주입의 이식을 포함하여 많은 다른 실험 적 끝에 적응 될 수 있습니다. 전술한 기술 중 하나에 대해 이 프로토콜을 조정할 때, 외과 의사는 주로 원하는 임플란트의 크기를 준수하도록 드릴링 절차를 수정합니다. 또한, 지상 절차는 이러한 기술의 많은 필요하지 않으며, 따라서 생략 될 수있다.
실험 목표에 관계없이이 비디오를 시청 한 후에는 일반적인 마모셋에서 입체 신경 외과를 성공적으로 수행하는 방법에 대한 이해가 있어야합니다.
