이 프로토콜은 열 스트레스 중 생리적 성능을 평가하기 위해 임피던스 공압의 사용을 입증하기 위해 모델로 청소년 미국 랍스터를 사용합니다. 이 기술은 심장 의 양쪽에 이식 된 두 개의 전극에 걸쳐 작은 진동 전류를 전달하고 근육이 수축하고 이완으로 전압의 변화를 측정합니다. 그런 다음 이 전압을 분당 박동으로 쉽게 변환하여 평가된 온도 범위에 걸쳐 심박수를 플롯하여 열 성능 창을 결정할 수 있습니다.
이 기술은 최소 침습적이며 심장 성능을 직접 관찰하기 어려울 수 있는 후기 단계 유기체에서 실시간 데이터 수집을 허용합니다. 이 방법은 또한 Arrhenius 브레이크 온도 또는 ABT를 계산하는 데 중점을 두고 열 제한을 결정하기 위해 비 치명적인 끝점으로 사용합니다. 직경 약 8~10cm의 열 교환 코일을 만들기 위해 투명한 가단 튜브를 감싸고 40~70cm 길이의 확장이 있습니다.
전기 테이프를 사용하여 코일을 고정합니다. 코일을 외부 공급에 교환하는 열을 부착하고 순환 하는 수조의 반환 피팅. 호스 클램프를 사용하여 연결이 안전한지 확인합니다.
순환하는 수조의 우물을 역삼투물로 채우고 전원 코드를 콘센트에 연결합니다. 수조를 켜고 코일을 교환하는 열과 관련하여 누출이 없는지 확인하십시오. 블랙 BNC 케이블을 장치의 AC 출력에 연결하고 채널 한 포트를 사용하여 전원 랩 데이터 로거에 연결하여 임피던스 컨버터를 설정합니다.
T 형 포드에 테미터를 연결한 다음 T 유형 포드를 전원 랩 데이터 로거의 채널 2 포트에 연결합니다. 전원 랩 데이터 로거의 전원 코드를 전원 공급 장치에 연결하고 USB 케이블 커넥터를 사용하여 데이터 로거를 PC 컴퓨터에 연결합니다. 실험 경기장의 적응 챔버를 7.5 리터의 인공 해수로 채웁니다.
랍스터를 플라스틱 그리드에 놓습니다. 작은 케이블 타이를 사용하여 랍스터 발톱과 복부를 플라스틱 그리드에 조심스럽게 고정하십시오. 종이 타월로 갑피를 말리고 70%에탄올에 담근 면봉으로 청소하십시오.
조심스럽게 심낭의 양쪽에 있는 갑피를 통해 두 개의 작은 구멍을 드릴. 멸균 해부 바늘을 부드럽게 삽입하여 각 구멍을 완료합니다. 면도날을 사용하여 전선 단열재의 작은 비트를 긁어.
각 와이어의 끝을 집게를 사용하여 조심스럽게 구부리고 새로 뚫은 각 구멍에 삽입합니다. 작은 수퍼접착제 한 방울을 사용하여 각 와이어 리드를 고정하고 5~10분 동안 건조시합니다. 접착제가 건조되면 와이어를 부착하여 임피던스 컨버터에 연결하여 켭니다.
랍스터를 적응챔버에 넣고 15~20분 동안 이식된 전극에 적응할 수 있도록 합니다. 전원 랩을 켜고 컴퓨터에서 랩 차트 소프트웨어를 엽니다. 새 실험을 클릭하고 차트 보기 화면을 열어 둡니다.
차트 뷰에서 채널 1의 채널 기능 메뉴를 찾습니다. 메뉴에서 입력 증폭기를 선택하고 AC 커플링을 선택합니다. 임피던스 컨버터에서는 파워 랩 출력에서 강한 신호가 관찰될 때까지 게인과 균형을 조정하여 균형을 0에 가깝게 유지합니다.
채널에서 두 개의 T형 포드를 선택하여 실시간 온도 데이터를 기록합니다. 시작 버튼을 클릭하면 전원 랩이 데이터 로깅을 시작합니다. 부착된 랍스터가 부착된 플라스틱 그리드를 실험 경기장에 조심스럽게 놓고 그리드 위에 코일을 교환하는 열을 설정합니다.
시험 대상자의 시각적 스트레스를 줄이기 위해 실험 경기장에 뚜껑을 놓기 전에 랍스터 근처에 테미터를 놓습니다. 필요에 따라 잔액을 조정하고 평가판이 시작되었다는 내용의 출력에 대한 의견을 배치합니다. 출력은 실험 전체에서 주기적으로 저장되어야 합니다.
파일을 클릭하고 처음에 컴퓨터에 출력을 저장하려면 As 저장을 선택합니다. 실험경기장의 수온을 15분마다 약 1.5도의 속도로 늘려 2시간 30분 동안 경사로를 달성하여 재순환 수조의 온도를 조절한다. 경사로가 완료되면 실험 경기장에서 랍스터를 제거하고 약 20 분 동안 복구 욕조에 넣습니다.
20분 후 전원 실험실 출력의 정지 버튼을 누르고 파일을 저장합니다. 테스트 대상을 홀딩 탱크로 되돌리기 전에 조심스럽게 전극을 제거하고 케이블 타이를 잘라냅니다. 창 메뉴를 클릭하고 데이터 패드를 선택하여 데이터 패드를 엽니다.
열 A를 두 번 클릭하고 선택 및 활성 점을 클릭하고, 시간을 선택하고, 확인을 클릭하여 창을 닫음으로써 시간이 될 수 있습니다. 열 B를 열 B를 두 번 클릭하고 통계를 선택하여 선택한 데이터 부분에 대한 평균 온도로 설정합니다. 메뉴의 오른쪽에서 평균을 선택하고 메뉴 창 하단의 계산 소스로 2를 채널합니다. 열 C를 두 번 클릭하고 선택 및 활성 점을 선택합니다.
선택 기간을 선택하고 확인을 클릭하여 창을 닫습니다. 열 D를 두 번 클릭하고 순환 측정을 선택합니다. 이벤트 수를 선택하고, 채널 하나를 계산 소스로 선택하고, 확인을 클릭하여 창을 닫습니다.
이렇게 하면 데이터의 피크가 계산되어 선택한 데이터 부분에서 심박수를 결정합니다. 열 E를 두 번 클릭하고 순환 측정을 선택합니다. 평균 순환 속도를 선택하고 메뉴 창 하단의 계산 소스로 채널 하나를 선택합니다.
확인을 클릭하여 창을 닫고 선택한 데이터 부분에 비해 분당 비트로 심박수의 최종 추정을 제공합니다. 데이터 파일로 돌아가출력의 원하는 부분을 강조 표시합니다. 데이터 패드에 명령과 여러 추가를 선택합니다.
모든 상자를 확인하고 선택 메뉴에서 30을 입력하여 30초마다 시간을 선택하고 데이터를 가져옵니다. 현재 선택 영역을 클릭하고 추가를 클릭합니다. 데이터 패드 화면으로 돌아가기 및 파일을 선택하고 As를 저장하여 출력을 Excel 파일로 저장합니다.
Excel에서 데이터 파일을 엽니다. 섭씨에서 켈빈의 역으로 온도를 변환합니다. 심박수의 자연 로그를 가지고, 온도의 함수로 심박수를 플로팅하여 Arrhenius 플롯을 생성합니다.
이러한 데이터를 부분적으로 회귀하여 일치시키고 교차점을 결정합니다. 이것은 아레니우스 브레이크 온도 또는 ABT입니다. 이는 전원 랩 데이터 로거를 사용하여 예상되는 출력의 예입니다.
전압은 빨간색으로 표시되고 경기장 온도가 파란색으로 표시됩니다. 이러한 데이터는 온도 경사로 의 과정을 통해 심박수의 예상 분포를 보여줍니다. 마지막으로, 이 패널은 실험동물로부터 예상되는 아레니우스 플롯을 보여줍니다.
붉은 별은 아레니우스 브레이크 온도인 교차점을 강조합니다. 이 기술을 사용하는 경우 테스트 대상에게 적절한 평가 및 복구 기간을 허용하여 심장 성능을 정확하게 기록하는 것이 중요합니다. 또한 테스트 대상에서 이를 실행하기 전에 실험에 적합한 온난화 속도를 결정하는 것도 중요합니다.
우리는이 비디오에서 온도에 전적으로 초점을 맞추고 있지만,이 기술은 광범위하게 해양 산성화와 같은 추가 스트레스에 테스트 대상자를 노출하여 유기체 생리학에 대한 환경 적 영향을 이해하기 위해 적용 할 수있다, 또는 온도 램프를 통해 실행하기 전에 산소 가용성을 감소.
