쥐에 있는 세포탈구형 신장 비계의 준비

이 프로토콜은 쥐 모형에 있는 신장을 사용하여 혈관 비계를 개발하는 가능하게 합니다. 신장은 분화한 줄기 세포의 비계에 가장 적합한 기관입니다. 이것은 신장의 탈세포화를 위한 매우 성공적인 프로토콜입니다.

ECM 초구조의 최소한의 파괴로 핵을 효과적으로 제거합니다. 이 기술은 이식 의학 및 조직 공학에 적용될 수 있습니다. 수술을 시연하는 것은 실험실에서 성형외과 의학과 김주형 교수입니다.

먼저 8주된 스프라그 Dawley 쥐를 온난화 패드에 놓고 직장 온도계 프로브를 직장 에 배치하여 코어 온도를 모니터링합니다. 쥐를 마취한 후, 쥐를 척추 위치에 놓고 테이프로 4개의 팔다리를 테이블에 고정시하십시오. 세균성 비누로 복부를 면도하고 청소하십시오.

2% 베타딘을 1~2분 이상 바르고 70%에탄올 용액으로 닦아냅니다. 이 시퀀스를 세 번 반복합니다. 멸균, 회향 드레이프로 수술 필드를 덮어.

수직 복부 절개를 하고 왼쪽 신장, 요관, 복부 대어타 및 열등한 베나 카바를 노출시하십시오. 페디클을 자르기 직전에 조직을 해부합니다. PBS를 밀리리터 헤파린당 약 10단위로 혼합하여 쥐당 50밀리리터의 관류 용액을 준비합니다.

PBS와 동일한 볼륨 8%PFA를 혼합하여 4%의 PFA 솔루션을 만듭니다. 수직 복부 절개를 미친 듯이 확장하여 손상을 피하기 위해 절단 할 때 가위를 장기에서 멀리 끌어 낼 수 있습니다. 흉곽을 통해 절개를 계속 한 다음 흉골을 들어 올려 다이어프램을 잘라냅니다.

알리스 클램프로 피부의 느슨한 플랩을 철회하고, 집게로 결합 조직을 찢어 서 심장을 해방. PBS 라인을 열고 바늘을 왼쪽 심실에 넣기 전에 흐르는지 확인합니다. 무딘 집게로 심장을 부드럽게 잡고, 바늘을 제어하는 hemostat을 사용합니다.

바늘은 분기 인치 이하를 삽입해야합니다. 바늘과 헤모스타트로 심장을 지탱하는 동안, 오른쪽 아트리움을 찾아, iridectomy 가위로 그것을 잘라. 쥐의 몸에 hemostat을 휴식, 바늘은 여전히 심장 내부에 위치 되어 있는지 확인.

신장과 간에서 아직도 보이는 혈액이 있는 경우에 4 분 이상 PBS를 퍼플 계속합니다. 복부 대오르타와 열등한 베나 카바를 곁들인 왼쪽 신장을 수확하십시오. 요관, 흉부 대어타, 우수한 베나 카바 및 복부 대어타 가지를 리게이트하십시오.

10센티미터 페트리 접시에 DPBS에 수화 된 장기를 유지합니다. 23 게이지 카테터와 복부 대자와 열등한 베나 카바를 수있습니다. 잔류 혈액을 제거하려면 캐뉼라를 연동 펌프와 연결하고 5 rpm및 섭씨 37도에서 90 분 동안 DPBS 500 밀리리터와 밀리리터 헤파린 당 16 단위로 장기를 씻으시게하십시오.

신장을 탈세포화하기 위해 3 시간 동안 1 % Triton X-100으로 인퓨전한 다음 0.75 % SDS 용액을 수은 40 밀리리터의 일정한 압력으로 6 시간 동안 함유하십시오. 잔류 SDS를 제거하려면 18시간 동안 증류수에 1%페니실린을 사용한 다음 멸균 DPBS와 밀리리터 헤파린 당 16단위로 90분간 샘플을 인퓨즈합니다. 쥐 신장의 총 형태는 어두운 빨간색이었다.

탈세포화 후 신장은 창백하고 반투명해졌습니다. 잔류 게놈 DNA는 탈세포 신장 비계에서 정량화되고 네이티브 신장에서 그와 비교하여 조직 게놈 DNA가 탈세포화 후에 거의 제거되었다는 것을 확인했습니다. 14건에서, 평균 DNA 함량은 대조군을 위한 마이크로리터당 115.05 나노그램, 탈세포화된 스캐폴드를 위한 마이크로리터당 1.96 나노그램이었다.

총 98.3%의 DNA가 제거되었습니다. 3차원 구조는 유지되었고, 세포세포 사구는 피질 적당종에서 보존되었다. 왼쪽 심실에 바늘을 삽입 할 때, 그것은 분기 인치 이상 삽입해야합니다.

추가 삽입은 다른 쪽으로 나올 수 있다. 우리는 이 기술이 조직 공학 분야에서 새로운 전망을 열 것이라는 확신을 가지고 있습니다.