이 절차의 전반적인 목표는 생체 내 마우스에서 지주 막 증 후 뇌 혈관 경련을 모니터링 하는 것입니다. 이것은 이소플루란과 마취 하에 고주파 색으로 구분된 이중 음모의 적용에 의해 달성된다. 이미징 데이터는 내외 및 외두개 내 경동맥의 혈류 속도를 결정하기 위해 처리됩니다.
가속화된 두개내 혈류 속도는 뇌혈관경련을 나타낸다. 이 연구에서는, 우리는 11에서 12 주 세 여성, C57BL/6N 마우스에 있는 두개 내 및 외두개 동맥의 혈류 속도의 측정을 능력을 발휘했습니다. 마우스는 다른 곳에서 상세히 기술된 SAH 유도 또는 가짜 수술을 실시하였다.
초음파 기계에 초음파 검사 스위치를 준비하고 동물 ID를 입력하려면 초음파 시스템의 가열 판을 섭씨 37도로 따뜻하게하십시오. 직장 온도 프로브를 사용할 준비가 되었는지 확인합니다. 따뜻한 수조를 사용하여 초음파 젤을 섭씨 37도까지 가열하십시오.
제모 크림, 전극과 눈 연고에 대한 접촉 크림을 준비합니다. 트랜스듀서가 기계식 팔에 제대로 장착되어 있는지 확인하고 마취 유도챔버가 4%이소플루란과 40%의 산소로 플러시되도록 하십시오. 1 분 동안 챔버에 마우스를 넣어 마취를 유도.
연고로 눈을 보호하십시오. 충분히 깊은 마취에 도달 한 후에만 계속하십시오. 전체 절차 전반에 걸쳐 마취 마스크를 사용하여 1.5 %의 이소플루란과 40 %의 산소로 마취를 유지하십시오.
첫 번째 단계에서, 두개 내 내 경동맥의 혈류 속도는 경두개 고주파 이중 음모로 결정된다. 체온 37도를 유지하기 위해 초음파 시스템의 가열 판에 마우스를 놓습니다. 양쪽에 눈 연고를 바르습니다.
첫 번째 시험 전에 전기 면도기로 occiput의 털을 줄입니다. 그런 다음 제모 크림을 사용하여 화학적으로 남은 모발을 제거합니다. 면봉을 사용하여 모발이 빠지기 시작할 때까지 크림을 2분 간 문질러 보냅니다.
추가 2 분 후 주걱으로 크림과 머리를 제거하고 알코올 피부 방부제로 피부를 소독. 전도성 페이스트로 동물의 네 가지 사지를 코팅하고 보드에 내장 된 심전도 전극에 테이프로 고정합니다. 직장 온도 프로브에 윤활유를 놓고 필요한 경우 추가 온난화 램프를 사용하여 체온을 모니터링하기 위해 조심스럽게 삽입하십시오.
생리학적 매개 변수, 심전도 및 호흡 신호가 초음파 시스템의 화면에 올바르게 표시되는지 확인하십시오. 필요한 경우, 마취의 수준은 분당 4 ~ 500 비트의 목표 심박수를 얻기 위해 조정 될 수있다. 초음파 젤로 코팅하십시오.
선형 어레이 트랜스듀서와 초당 200프레임 이상의 프레임 속도를 사용하여 초음파 이미지를 획득하고 기계식 암에 장착합니다. 트랜스듀서를 30도 뒤로 기울인 occiput에 놓습니다. B 모드와 CW-도플러 모드를 사용하여 오른쪽 두개 내 내부 경동맥을 시각화하고 동맥의 최대 흐름을 찾을 때까지 제어 장치로 트랜스듀서를 앞뒤로 이동합니다.
해부학 정보를 수집하려면 기존의 B 모드 와 CW-도플러 모드를 사용하고 획득 버튼을 클릭하여 수집을 시작합니다. 두개내 선박의 유동 특성에 대한 정보를 기록하려면 펄스 파 도플러 버튼을 클릭하고, 시료 부피를 용기 중앙에 놓고 3초 이상 시네 루프를 획득한다. 왼쪽과 동일하게 진행합니다.
다음 단계에서 초두개 내부 경동맥의 혈류 속도는 고주파 이중 음모로 결정된다. 37°C의 체온을 유지하기 위해 초음파 시스템의 가열 판에 마우스를 배치합니다. 첫 번째 시험 전에 전기 면도기와 목 앞의 머리카락을 제거합니다.
그런 다음 이전에 설명한 바와 같이 제모 크림을 사용하여 화학적으로 남은 모발을 제거하십시오. 전도성 페이스트로 동물의 네 가지 사지를 코팅하고 보드에 내장 된 심전도 전극에 테이프로 고정합니다. 직장 온도 프로브에 윤활유를 놓고 조심스럽게 삽입하여 체온을 모니터링합니다.
필요한 경우 추가 온난화 램프를 사용하십시오. 화면에 생리 적 매개 변수의 올바른 디스플레이를 다시 확인합니다. 37°C까지 따뜻하게 데운 초음파 젤로 목 앞쪽을 코팅합니다.
트랜스듀서를 동물과 평행하게 배치하고 올바른 경동맥의 세로 이미지를 얻기 위해 위치를 조정한다. B 모드 CW-도플러 모드를 사용하여 올바른 경동맥을 시각화합니다. 이미지에는 올바른 일반적인 경동맥, 올바른 내부 경동맥 및 올바른 외부 경동맥이 포함되어야 합니다.
해부학 정보를 수집하려면 기존의 B 모드 와 CW-도플러 모드를 사용하고 획득 버튼을 클릭하여 수집을 시작합니다. 초두개 동맥의 흐름 특성에 대한 정보를 기록하려면 맥박파 도플러 버튼을 클릭하고, 내부 경동맥 과 외부 경동맥을 공통 경동맥의 중앙에 시료 부피를 놓고 3초 이상 시네 루프를 획득한다. 왼쪽과 동일하게 진행합니다.
마취를 종료하고 온난화 플레이트에서 동물을 제거하고 저체온증을 방지하고 완전한 회복을 확인하기 위해 1 시간 동안 섭씨 36도로 가열 된 인큐베이터에 넣은 케이지에 넣습니다. 다음 단계는 초음파 데이터를 처리하는 것입니다. 고주파 초음파 데이터의 후처리를 위해 외부 워크스테이션을 사용하는 경우.
B 모드, CW-도플러 모드 및 PW-도플러 모드 이미지와 시네 루프를 베보 LAB 소프트웨어로 내보세요. 수출 된 초음파 연구를 엽니 다. 한 동물을 선택하고 두개 내 경동맥의 PW-도플러 시네 루프를 엽니다.
이 프로토콜에서는 일반적으로 해당 흐름 속도 곡선에서 7~8개의 하트비트가 기록됩니다. 시네 루프를 일시 중지하고 측정 버튼을 클릭합니다. 혈관 패키지를 선택하고 RICA PSV를 클릭하여 오른쪽 두개내 경동맥의 피크 수축기 압력을 측정합니다.
이제 속도 곡선의 피크를 왼쪽으로 클릭하고 직선을 0 선으로 당깁니다. 오른쪽 마우스 버튼을 클릭하여 측정을 결정합니다. 이제 RICA EDV를 선택하여 최종 확장기 속도를 측정합니다.
디아스톨 끝에 있는 속도 곡선의 최소한의 발진을 왼쪽으로 클릭합니다. 선을 0선으로 바로 당기고 오른쪽 마우스 버튼을 클릭하여 측정을 결정합니다. RICA VTI를 선택하여 속도 시간을 일체측정합니다.
속도 곡선의 시작 부분에 왼쪽을 클릭하고 확장기 고원의 끝까지 마우스와 곡선을 따릅니다. 그런 다음 마우스를 다시 클릭하여 측정을 결정합니다. 보고서 버튼을 사용하여 인트레이스 내경 동맥의 데이터를 내보냅니다.
내보내기를 누르고 데이터를 VSI 보고서 파일로 저장합니다. 오른쪽 두개골 내부 경동맥의 PSV, EDV 및 VTI를 측정하고 그에 따라 데이터를 내보낼 수 있는 동일한 접근 방식을 사용합니다. 왼쪽과 동일하게 진행하고 LICA PSV, EDV 및 VTI를 사용합니다.
5마리의 마우스와 3마리의 마우스에서 2마리가 가짜 수술을 받는 동안 유도되었고, 두개내 내동맥의 혈류 속도와 자궁 내경동맥의 혈류 속도는 수술 1일 전, 수술 후 1일, 3일, 7일 후에 결정되었다. 수술 전, 추가 및 두개 내 혈류 속도뿐만 아니라 내외 및 외두개 혈류의 비율은 SAH와 가짜 동물 사이에 유사했습니다. SAH 유도 후 첫날에는 내외 또는 두개 폐혈 속도 또는 인트라 및 외두개 혈류 사이의 비율에 큰 변화가 없었습니다.
3일과 7일에 내부 경동맥의 두개내 혈류 속도가 현저하게 증가했으며 SAH 후 뇌 혈관 경련을 나타내는 SAH 동물 중 두 마리가 현저하게 증가했습니다. 두개골 혈류 속도가 거의 변하지 않았기 때문에 뇌 혈관 경련을 나타내는 SAH 동물의 7 일째에 내장 및 두개골 혈류 속도의 비율도 크게 증가했습니다. 결론적으로 고주파 색으로 구분된 경두개 이중 초음파 초음파 초음파 는 마우스에서 두개 내 혈류의 속도의 생체 측정을 수행하는 데 사용될 수 있다.
혈관 경련을 나타내는 SAH 후 마우스에서 두개 내 혈류 속도가 가속화되는 인간 환자의 상황과 유사합니다. 여기에 표시된 매우 초음파 학적 방법은 빠르고 침략성이 거의 없습니다. 그것은 뮤린 SAH 모델에서 혈관 경련의 세로 연구를 허용합니다.
