가스 수화물 형태와 압력 온도 안정성에 대한 다양한 첨가제의 효과를 테스트할 수 있습니다. 그러나 주요 관심사는 생체 분자가 어떻게 상호 작용하고 그 중심에 있는 가스 수화물에 영향을 미칠 수 있는지 알아내는 것입니다. 이 프로토콜의 주요 장점은 세실 액적에 수화물 쉘을 안전하게 형성할 수 있다는 것입니다.
방울 스테이지를 평준화하는 것은 어렵고, 물방울이 고르지 않은 무대에서 미끄러지기 때문에 연습이 필요합니다. 또한, 고압 인화성 가스에 대한 Swagelok 연결 및 안전에 익숙합니다. 먼저 메탄 실린더 레귤레이터를 펌프에 새로운 너트 및 ferrule 세트를 사용하여 1-4인치 구리 파이프를 연결합니다.
IV 튜브의 유연한 팁을 접착제, 각도를 잘라, 사파이어 창쪽으로 방울을 지시하는 데 도움이 캐뉼라의 끝에. 캐뉼라에 밀리리터 주사기를 1밀리리터 주사기를 부착하고 원하는 양의 탈온화된 물을 가져옵니다. 바늘 밸브 나 사파이어 창이 부착되지 않고, 상단 보드에 캐뉼라의 끝을 삽입하고 중앙 단계에 방울을 추방 연습.
Sapphire 창과 와셔를 M8 나사로 다시 연결하고 최고 압력 셀 밸브를 부착합니다. 압력 펌프에서 압력 셀에 편조 된 스테인레스 스틸 호스를 연결합니다. 그리고 가스 실린더에서 압력 셀에 이르는 모든 연결이 타이트하다는 것을 다시 확인하십시오.
압력 셀 입구 밸브를 열고 수족관에 압력 셀을 설정합니다. 그런 다음 광섬유 광원 케이블을 압력 셀 조명 포트에 삽입합니다. 에탄올과 물의 50/50 비율로 채워진 수족관에서, 다음 주에 용액 레벨이 떨어지면 광원 연결 바로 아래 압력 셀의 상단과 레벨이 될 때까지 에탄올을 더 추가합니다.
냉각기를 셀 내부의 섭씨 약 0~3도까지 달성하고 코일을 통해 순환하기 시작하는 온도로 설정합니다. 수족관 표면의 응축을 방지하기 위해 수족관 의 전면에 공기 흐름을 켭니다. 데이터 로거 소프트웨어에서 온도 로그를 시작합니다.
스캐닝 간격을 30초로 설정하고 압력 셀 내부의 온도가 섭씨 2도에서 안정될 때까지 기다립니다. 카메라를 놓은 후 광원을 약 80%로 켜고 카메라 소프트웨어를 엽니다. Live View에서 카메라 렌즈를 셀 내부 챔버에 집중하고 광원을 조정하여 최상의 이미징을 제공합니다.
1초 스캔 간격으로 새 온도 로그를 시작합니다. 부착된 경우 압력 셀의 상단 포트에 콘센트 바늘 밸브를 분리합니다. 캐뉼라에 밀리리터 주사기를 1밀리리터 주사기를 부착하고 원하는 양의 탈온화된 물을 가져옵니다.
라이브 뷰 모드에서 카메라 소프트웨어에 팁이 표시될 때까지 상단 보드를 통해 캐뉼라를 삽입합니다. 주사기에서 중앙 열전대 위로 유체 방울을 배출합니다. 그런 다음 바늘 밸브를 다시 부착합니다.
압력 셀의 액적에 카메라를 집중합니다. 60초마다 시간 경과 이미징을 시작합니다. 노트북에서 압력 변환기 소프트웨어를 엽니다.
차트에서 데이터 수집을 시작하고 1초의 스캔 간격으로 데이터 로그를 수집하고 물방울 온도가 섭씨 0~3도 사이에 안정될 때까지 기다립니다. 펌프와 컨트롤러를 켭니다. 압력 펌프의 입구 밸브를 닫습니다.
펌프의 콘센트 밸브와 압력 셀의 밸브를 엽니다. 압력 펌프 컨트롤러에 0을 눌러 펌프 압력을 타수하십시오. 압력 펌프 컨트롤러에서 펌프 A를 선택하여 압력을 모니터링합니다.
메탄 가스 이외의 다른 유체가 펌프에 존재하는 경우 압력 펌프가 비어 있는지 확인합니다. 최대 흐름과 일정한 흐름을 분당 100 밀리리터로 설정하고 Run을 눌러 이 작업을 수행합니다. 펌프가 비어 있는 때까지 실행 상태로 둡니다.
펌프 콘센트 밸브를 닫고 펌프 입구 밸브를 엽니다. 가스 실린더를 열고 가스 실린더 레귤레이터를 1, 000 킬로파스칼으로 설정합니다. 압력 펌프 컨트롤러에 리필을 누릅니다.
펌프가 가득 차면 1, 000 킬로파스칼 근처에 펌프 입구 밸브와 가스 실린더를 닫습니다. 펌프 콘센트 밸브를 셀에 약간 엽니다. 압력 전지의 상대적으로 낮은 온도로 인해 감소될 수 있으므로 압력 트랜스듀서 소프트웨어에서 압력 셀 압력을 모니터링합니다.
최대 흐름을 분당 10밀리리터로 설정하고 최대 압력은 5, 000 킬로파스칼으로 설정하고 텍스트 원고에 설명된 압력 펌프 컨트롤러에 1, 000 킬로파스칼으로 일정한 압력을 설정합니다. 실행 을 누릅니다. 1, 000 킬로파스칼에 도달하면 펌프 컨트롤러에서 중지를 누르고 펌프의 콘센트 밸브를 닫습니다.
압력 셀의 압력을 모니터링하여 누출이 없는지 확인합니다. 압력이 떨어지면 액체 누출 감지기를 사용하여 연결에서 누출을 발견하고 누출 성분을 조심스럽게 조입니다. 셀이 안정되면 펌프 콘센트를 열고 일정한 압력을 2, 000, 3, 000, 4, 000 및 5, 000 킬로파스칼로 점진적으로 설정하여 각 설정 후 정지를 눌러 셀 안정성을 모니터링합니다.
압력이 안정되면 펌프 콘센트를 닫고 가스가 물방울에 침투할 때까지 약 12~24시간 기다립니다. 시간 경과를 전환하여 2~5초마다 이미지를 찍습니다. 수화물 껍질이 시간 경과에 보일 때까지 셀 상단에 드라이 아이스를 추가합니다.
드라이 아이스가 미끄러지면 셀 상단 주위에 테이프를 부착합니다. 시간 경과 사진을 통해 메탄 수화물 형성의 진행 상황을 관찰하여 2~6시간 동안 관찰한다. 펌프 콘센트를 열고 일정한 압력을 2, 000 킬로파스칼으로 설정하여 세포를 2, 000 킬로파스칼으로 우울하게 하여 용융시 주목하십시오.
30분 후 압력 셀을 5, 000 킬로파스칼으로 억압하여 메모리 효과를 관찰합니다. 수화물 쉘이 개혁하기 시작하고 쉘이 30분에서 2시간 동안 형성되도록 할 때 유의하십시오. 펌프 콘센트를 열고 일정한 압력을 100 킬로파스칼로 설정하여 셀을 우울하게 합니다.
압력 셀에 잔류 압력이 있는 경우 압력 셀 상단 밸브를 1/16 인치 로 약간 엽니다. 압력 및 온도 데이터를 CSV 파일로 저장합니다. 상단 압력 세포 밸브를 제거하고 주사기, 캐뉼라 또는 IV 튜브로 액적을 추출하여 액적을 제거합니다.
시험 간 오염에 대한 우려가 있는 경우 텍스트 원고의 지침을 따르십시오. 드라이 아이스강제 수화물 껍질 형성시 명확한 형태적 차이가 있는데, 물방울은 부드러운 반사 표면에서 약간의 수지상 표면을 가진 불투명한 수화물 쉘로 전환합니다. 1형 부동액 단백질에 밀리리터당 100마이크로그램을 첨가하여 액적 상단의 물방울과 돌출부를 따라 능선 가장자리를 유도하여 수화물 형태를 변화시켰습니다.
수화물 껍질이 1시간 동안 개발된 후, 세포는 2개의 메가파스칼로 우울하여 P/T 안정성 곡선 근처의 온도에서 섭씨 2~5도 하락했습니다. 수화 절제로 인해 수화해리는 온도 가의 초기에 타임랩스 이미징을 통해 시각적으로 녹는 것으로 확인되었다. 물방울이 없고 수화물 껍질을 형성하지 않은 액적으로 음의 대조군으로 우울화 시 온도가 감소하지 않았습니다.
각 온도도의 정점은 이전에 확립된 P/T 안정성 곡선보다 높았기 때문에 이러한 시험의 정점 P/T를 기준으로 회귀 곡선을 계산했습니다. 이 프로토콜을 수행할 때 두 가지 를 염두에 두는 것이 중요합니다. 하나는 가압하기 전에 모든 연결이 안전한지 확인하고 두 개는 사파이어 창을 부착하기 전에 물방울을 추방하는 연습을 합니다.
이 프로토콜에 따라, 하나는 가스 소비를 계산하고 형성 된 수화물의 양을 결정하기 위해 수화물 쉘 두께를 계산하기 위해 이미지를 분석 할 수 있습니다.
