광학 간섭 단층 촬영은 다양한 망막 질환의 임상 진단에 널리 사용되지만 마우스 모델에 적용하는 것은 여전히 어렵습니다. 이 프로토콜은 동물에서 OCT 기술을 관리하는 방법을 설명합니다. 이 기술은 안구 크기가 다른 동물에게 적용 할 수 있습니다.
비침습적, 고분해능 및 실시간 망막 단면 이미징과 함께 망막 두께의 정량적 측정이 가능합니다. OCT는 병변의 위치, 범위, 모양 및 크기와 같은 병변 특징과 망막 신생혈관과 같은 의심되는 모든 망막 이상을 식별하여 망막병증 진단을 돕습니다. 이 프로토콜은 망막 질환을 포함한 동물 연구 또는 안저 질환에 적용 할 수 있습니다.
절차를 시작하기 전에 준비하고 프로토콜을 단계별로 따르십시오. 동물이 마취되면 실험을 수행하십시오. 약간의 연습 후에 좋은 품질의 OCT 이미지를 얻을 수 있어야합니다.
시작하려면 컴퓨터를 켜고 소프트웨어를 시작하십시오. 테스트 프로그램 버튼을 클릭하여 테스트 프로그램을 완료합니다. 그런 다음 온도 조절기를 켜고 섭씨 37도로 예열하십시오.
프로그램 테스트 후 OCT 모듈 프로시저를 시작합니다. 새 제목을 만들고 마우스 정보를 입력합니다. 그런 다음 전기 담요를 예열하고 수술 용 수건으로 덮으십시오.
마취 된 마우스를 전기 담요 플랫폼에 놓고 즉시 의료용 히알루 론산 나트륨 젤로 두 눈을 코팅하십시오. 다음으로, 오목한 면이 각막 표면의 히알루론산 나트륨 젤에 닿도록 마우스 각막에 100D 콘택트렌즈를 놓습니다. 그런 다음 마우스를 cSLO 장치의 작은 항온 동물 플랫폼에 놓습니다.
눈동자가 렌즈 중앙에 있도록 집게로 콘택트 렌즈의 각도를 조정하십시오. 눈을 똑바로 향하도록 머리에 맞게 조정을 미세 조정합니다. OCT 단추를 클릭하고 마우스 모듈을 선택한 다음 cSLO 프로그램을 시작합니다.
그런 다음 작동 레버를 사용하여 사전 설정 렌즈를 콘택트 렌즈 쪽으로 천천히 움직입니다. 전후 극의 이미지를 시신경 머리를 중심으로 정렬하도록 추가로 조정하십시오. 그런 다음 OCT 프로그램을 시작하고 OCT 이미지가 나타날 때까지 진행률 표시줄을 위아래로 클릭합니다.
최소 범위는 0에서 20까지, 최대 범위는 40에서 60 사이로 조정합니다. 그런 다음 이상적인 OCT 이미지를 얻을 때까지 사전 설정된 렌즈 거리와 위치 방향을 조정합니다. cSLO에서 표준 라인을 이동하여 스캔 위치를 선택합니다.
그런 다음 평균을 클릭하여 cSLO 및 OCT 이미지 신호를 오버레이하고 샷 버튼을 클릭하여 SLO OCT 이미지를 가져옵니다. 실험 후 100D 콘택트 렌즈를 제거하고 각막을 보호하기 위해 레보플록사신 아이 젤을 바르십시오. 망막 층화 보정의 경우 OCT 인터페이스에서 부하 검사를 클릭하고 팝업 창에서 OCT 이미지를 호출합니다.
그런 다음 미디어 컨테이너에서 이미지를 두 번 클릭하여 화면에 표시합니다. 다음으로 층 감지를 클릭하여 망막의 자동 레이어링을 완료합니다. 분석을 위해 준비된 레이어의 양쪽에서 구분선을 선택한 후 레이어 편집을 클릭하여 간격과 제한 범위를 조정합니다.
그런 다음 빨간색 원을 이동하여 선을 수정합니다. 망막 적층 두께를 측정하려면 측정 마커 버튼을 클릭하고 분석할 레이어의 구분선을 선택하여 OCT 이미지에 레이어의 경계를 표시합니다. 그런 다음 레이어와 연결을 선택하고 이동 중에 연결 상태를 유지합니다.
그런 다음 결과를 표시할 영역을 선택하고 OCT 이미지에서 분석할 위치를 클릭하여 측정 라인을 표시합니다. 다음 열을 클릭하여 후속 측정을 수행하고 이전 데이터를 표시합니다. 전체 망막 두께를 측정하려면 오른쪽 상단 모서리에 있는 목록에서 라인 1과 라인 7을 선택합니다.
그런 다음 시신경 유두 가장자리의 망막 구조 모양에서 수평 눈금자의 200 마이크로 미터 간격 간격으로 4 개의 값을 측정합니다. C57BL/6 마우스의 OCT 이미지는 명확한 경계를 가진 다양한 망막층을 보여주었습니다. 대조적으로, Vldlr 녹아웃 마우스는 비정상적인 과반사성 병변을 보였다.
OCT 이미지는 Vldlr 녹아웃 마우스의 망막 표면에 일부 중간 반사 밴드를 보여주었습니다. 이 밴드는 망막 혈관에 부착되어 불완전한 유리체 박리의 OCT 특성과 일치합니다. 하나의 과반사 병변이 망막 하 공간에 나타나 외부 핵층으로 퍼졌지만 외부 플렉시 폼 층을 뚫지 못했습니다.
이 병변의 OCT 출현은 병리학 적 소견과 일치했다. 병리학 적 절편은 신생 혈관이 망막 색소 상피층, 광 수용체 내부 - 외부 세그먼트 및 외부 제한막을 뚫고 외부 핵층을 침범했지만 외부 플렉시 폼 층은 침범하지 않았 음을 보여 주었다. 망막 하 공간에 위치한 과반사 병변의 또 다른 밴드는 외부 핵층을 포함하지 않았습니다.
병리학 적 소견과 일치하게,이 망막 하 신생 혈관은 외부 제한막을 뚫지 않았다. 두 그룹 사이의 후극의 측두, 비강, 상하 방향에서 오른쪽 눈의 망막 두께를 비교한 결과, Vldlr 녹아웃 마우스의 망막 두께가 C57BL/6J 마우스의 망막 두께보다 현저히 낮다는 것이 밝혀졌습니다. 프로토콜을 수행 할 때 각막에 100D 콘택트 렌즈를 올바르게 배치 한 다음 이미지 위치를 조정하십시오.
촬영 전에 스캔 위치를 선택하고 이미지를 오버레이하십시오. 이 절차에 따라 전방 세그먼트 OCT가 가능하며 사전 설정된 렌즈와 각막 사이의 거리를 변경해야합니다. 각막, 전방, 홍채, 모양체 및 수정체를 보여줄 수 있습니다.
이 기술은 작은 동물 모델에서 망막증 연구에 중요한 도구를 제공하여 기초 연구에서 망막증의 비침습적 검출 및 측정을 촉진합니다.
