엑소좀 기반 도파민 운반체 시스템의 공식화 및 특성화

엑소좀은 크기가 14나노미터에서 200나노미터 사이의 세포에서 분비되는 소포에 반응할 수 있으며, 세포 내 화물과 통신에서 분리되어 세포외 소포체의 가장 작은 하위 그룹에 도달합니다. 엔도솜의 분화로 형성되는 엑소좀은 세포막에서 유래합니다. 줄기 세포는 골수 또는 지방 조직과 같은 다양한 출처에서 분리할 수 있습니다.

하지만 성체 조직 건조 줄기세포는 면역원성 잠재력이 더 높다 단점 엑소좀의 크기로 혈액뇌장벽을 통과할 수 있기 때문에 중추신경계 질환에 중요한 역할을 한다고 한다. 먼저 씨를 뿌린 Wharton의 젤리 중간엽 줄기 세포를 5ml의 PBS로 씻습니다. 그런 다음 플라스크를 인큐베이터에 넣기 전에 5ml의 트립신 EDTA 용액을 추가합니다.

배양 후에, 세포를 모으고 1, 5 분 동안 500 G에 분리한다. 그런 다음 상층액을 제거하고 12% FBS가 포함된 DMEM-F10 밀리리터를 튜브에 추가합니다. 배양된 세포를 PBS로 세척합니다.

세척 후 혈청이 없는 DMEM-F12 배지를 세포에 추가하고 인큐베이터에 넣습니다. 엑소좀을 분리하기 위해 혈청이 없는 배지를 채취하고 섭씨 4도에서 300G에서 10분 동안 원심분리합니다. 상층액을 다른 튜브로 옮기고 더 빠른 속도로 연속 원심분리하여 처리합니다.

최종 원심 분리 후 상층액을 천천히 제거하고 펠릿을 1 밀리리터 PBS에 용해시킵니다. 소용돌이에 의하여 섞고 110에 ultracentrifugation, 4 섭씨 온도에 70 분 동안 000 G로 진행하십시오. 초원심분리로 먼저 채취한 엑소좀 현탁액에 PBS 3mL를 첨가하고 0.22미크론 필터를 이용한 여과로 희석된 현탁액을 멸균한다.

그런 다음 멸균된 엑소좀 현탁액 500마이크로리터를 다른 튜브로 옮깁니다. 다음으로 순차적으로 500 마이크로 리터의 0.5 밀리리터 도파민 용액과 사포닌을 멸균 된 현탁액에 첨가합니다. 배양 후 현탁액을 초원심 분리하십시오.

이 샘플은 도파민이 함유된 엑소좀의 특성을 분석하기 위한 NTA 및 DLS 분석에 사용되거나 나중에 사용할 때까지 섭씨 영하 20도에서 보관할 수 있습니다. NTA 분석에서 와튼 젤리 유래 엑소좀의 평균 크기는 98나노미터, 도파민이 함유된 엑소좀은 110나노미터로 확인됐다. NTA와 DLS 분석에서 밝혀진 나노 입자의 수는 서로 일치했습니다.

와튼 젤리 유래 엑소좀의 제타 전위는 마이너스 15.7, 도파민이 함유된 엑소좀은 마이너스 17.6밀리볼트로 측정되었습니다. 도파민이 함유된 엑소좀의 HPLC 분석 결과 도파민의 피크가 6.45분에 검출되었습니다. 누적 약물 방출 프로파일에 따르면 캡슐화된 도파민의 74.8%가 첫 8시간 이내에 엑소좀에서 방출되었습니다.

섬유아세포에 있는 도파민이 적재되고 유리된 엑소좀의 세포독성을 조사했습니다. 도파민이 함유된 엑소좀은 세포독성 효과를 나타내지 않았지만, 사포닌은 섬유아세포의 생존력을 감소시켰습니다. MTT 분석은 섬유아세포를 도파민이 함유된 엑소좀으로 처리했을 때 세포 생존율이 증가했음을 보여주었습니다.

결과의 통계적 유의성은 일원 분산 분석을 수행하여 평가되었습니다. 또한 섬유아세포에 대한 다양한 농도의 유리 엑소좀의 세포독성 효과를 조사했습니다. 섬유아세포 생존율은 유리 엑소좀이 밀리리터당 25마이크로리터 농도에서 더 높았습니다.

중추 신경계에 정말 중요한 것은 환자의 크기, 가소성, 신경 반응, 좌우 의사 소통 및 뇌의 신경 발생과 같은 과정에서 역할을 한다는 것입니다. 또한, 엑소좀의 표면 덕분에 표적세포와 상호작용할 수 있는 것으로 관찰되었으며, 약물 투여 시 전달된 활성이 완성되는 것으로 나타났다. 이번 연구에서 처음으로 줄기세포 유래 엑소좀에 도파민을 캡슐화한 신약 제형을 개발했다.

그는 이 제형이 파킨슨병 치료에 매우 유망할 것이라고 제안했습니다.