본 연구는 적운 난모세포의 즉각적인 부분 제거가 압박을 억제하고 수정을 향상시키는지 여부를 평가하여 IVF 결과를 개선하는 데 중점을 둡니다. 관찰 효율성은 수정 경쟁 및 배아의 질에 영향을 미치고 실험실 절차를 최적화합니다. 우리는 더 나은 임상 결과를 위해 IVF 기술을 개선하는 것을 목표로 합니다.
우리는 내측에서 적운의 부분적 제거가 난모세포를 크게 압축하고 IVF에서 수정 관찰의 효율성을 향상시킨다는 것을 확인했습니다. 이는 수정 사건을 평가하는 타이밍을 개선하고 잠재적으로 배아의 질과 IVF 결과를 최적화할 수 있습니다. 당사의 프로토콜은 시간을 줄이고 환경 노출을 최소화하며 잠재적으로 배아의 품질을 개선함으로써 IVF 효율성을 향상시킵니다.
기존 기술에 비해 간소화되고 효과적인 접근 방식을 제공합니다. 먼저 난모세포 채취 접시를 섭씨 37도의 인큐베이터에 밤새 넣습니다. 14ml의 둥근 바닥 시험관에 12ml의 여포 조작 배지 12ml를 섭씨 37도에서 밤새 배양합니다.
그런 다음 난모세포를 채취하기 30분 전에 튜브를 예열된 시험관 랙으로 옮깁니다. 다음으로, 14 밀리리터의 둥근 바닥 시험관에 9 밀리리터의 여포 조작 배지를 넣고 섭씨 37도에서 밤새 배양합니다. 난모세포 채취 당일, 배지 4.5ml를 100% 파라핀 오일 2ml로 덮인 사전 배양된 난모세포 픽업 접시에 옮깁니다.
그런 다음 난모세포 픽업 접시에 4.5ml의 수정 배지를 추가하고 섭씨 37도에서 밤새 배양합니다. 그런 다음 100% 파라핀 오일로 덮인 6cm 접시에 1ml의 수정 배지를 추가합니다. 유리 파스퇴르 피펫의 끝을 무디게 하고 둥글게 만들려면 알코올 램프에 약 5초 동안 굽습니다.
파스퇴르 피펫 끝에 흡입 헤드를 부착하여 긁히지 않고 접시 바닥에 닿을 수 있도록 합니다. 난포 조작 배지를 사용하여 10cm 접시에 피펫을 지나 유리를 헹굽니다. 간단히 말해서, 17 게이지 바늘을 사용하여 경질 초음파 안내에 따라 난모세포를 회수합니다.
14 밀리리터의 둥근 바닥 시험관에 모인 여포액을 10cm 접시에 붓습니다. 접시를 일정한 온도의 플랫폼에 놓습니다. 실체 현미경으로 OCCC를 관찰하여 난모세포의 존재를 확인하고 성숙도를 평가합니다.
OCCC에 난모세포가 있는지 확인하고 난모세포 성숙도에 대한 예비 평가를 수행합니다. 둥근 화염 광택 파스퇴르 피펫으로 실리콘 흡인 피펫을 미리 준비합니다. 왼쪽 약지로 9시에서 10:00 위치에 있는 배양 접시를 부드럽게 올리고 왼쪽으로 약 15도 기울이면서 OCCC를 흡입합니다.
접시의 11:00 위치에서 흡인 OCCC를 뱉어내면서 오른쪽으로 수평으로 부드럽게 늘립니다. 그런 다음 확장된 OCCC 주변의 과립층 세포의 크기를 관찰합니다. 이제 파스퇴르 피펫을 사용하여 길쭉한 OCCC의 적절한 위치에서 빠르게 아래쪽으로 절개하여 과도한 과립층 세포를 부드럽게 제거합니다.
자른 OCCC를 OCCC 세척 용액이 들어 있는 수집 접시에 옮깁니다. 남은 난포액을 멸균 샘플 용기에 붓습니다. 먼저 광학 현미경으로 수집된 정액 샘플의 정자 농도, 운동성 및 형태를 평가합니다.
그런 다음 정자 펠릿을 새 원심분리기 튜브로 옮기고 수정 배지에서 두 번 씻습니다. 필요할 때까지 6%의 이산화탄소와 섭씨 37도에서 배양합니다. 과도한 과립층 세포를 제거한 후 6-8개의 OCCC와 1ml의 수정 배지를 수정 접시에 추가합니다.
수정 접시에서 회수한 후 약 2-3시간 후에 단일 방울에 모달 정자동물(modal spermatozoa)로 OCCC를 수정하십시오. 단기 수정을 위해 OCCC를 정자와 함께 4-6시간 동안 함께 배양합니다. 배양 후 난모세포를 둘러싼 적운 세포를 기계적으로 제거합니다.
세포가 완전히 제거되도록 난모세포보다 내경이 약간 작은 피펫을 사용하여 난모세포를 흡인합니다. 수정을 확인하려면 두 개의 극체의 존재를 관찰하십시오. 두 번째 극체를 보여주는 난모세포는 수정된 것으로 간주됩니다.
정기적인 수정을 위해 수정 평가를 위해 18-20시간의 공동 배양 후 피펫을 사용하여 적운 세포를 제거합니다. 수정된 난모세포를 난모세포 채취 후 3-5일 동안 배양합니다. 전핵의 수를 결정하기 위해 수정 후 20시간에 수정을 평가합니다.
그 후, 각 접합자를 중간 액적에서 개별적으로 배양하고 수정 후 배아를 절단 배지로 전달합니다. 3일차 배아를 배반포 배지로 이식하고 5일차에 평가합니다. 연속형 데이터를 평균과 표준편차로 보고하고, 순서형 데이터를 비율로 표현합니다.
단기 수정을 받은 47명의 환자 중에서, 환자의 연령과 채취된 난모세포의 수에 있어서는 유의한 차이가 관찰되지 않았다. OCC군의 부분적 제거군의 평균 시술 시간은 대조군에 비해 현저히 짧았으나, 분열률, 최적 배아율 및 최적 배반포 비율에서는 유의미한 차이가 발견되지 않았다. 전통적인 IVF를 받은 환자에서는 환자의 연령과 두 그룹 간에 채취된 난모세포 수에서 유사성이 관찰되었습니다.
OCCC 그룹의 부분적 제거에서 평균 작동 시간이 약간 더 짧아진 것이 관찰되었지만, 통계적으로 유의미한 차이는 나타나지 않았다. 이전 그룹과 마찬가지로, 분열 속도(cleavage rate), 최적 배아 속도(optimal embryo rate) 및 최적 배반포 속도(optimal blastocyte rate)에서 유의미한 불일치는 확인되지 않았다.
