우리의 접근 방식은 미래의 불임 치료를 위해 복강경 질 성형술과 난 모세포 검색을 결합하여 Mayer-Rokitansky-Kuster-Hauser 증후군 치료에서 침습성 질병을 최소화 할 수 있습니다. 우리의 접근법의 주요 장점은 단일 마취에 대한 요구 사항과 젊은 Rokitansky 환자에서 질식 난 모세포 검색의 불가능 성을 극복하는 것입니다. 이 절차는 불임 병동의 선임 산부인과 의사 인 Diana Delprato와 보조 생식 실험실의 두 명의 수석 임상 발생학자 인 Alessandra Alteri와 Greta Cermisoni가 시연 할 것입니다.
수술 당일부터 14 일째에 조절 된 난소 자극을 시작하십시오. 연속적인 복부 초음파와 에스트라 디올과 프로게스테론의 수반되는 측정에 의한 난소 반응을 모니터링하십시오. 개방형 기술로 폐복막을 설치하십시오.
복강경 삽입을 위해 10mm 배꼽 투관침 1개와 중앙, 오른쪽 및 왼쪽 하단 사분면에 5mm 투관침 3개를 배치합니다. 복강경 시력에서 흡인 펌프에 연결된 17 게이지 단일 루멘 바늘을 사용하며, 일반적으로 오른쪽 및 왼쪽 난소의 천자를 위해 중앙 및 왼쪽 투관침을 통한 질식 검색에 사용됩니다. 모낭의 노출을 용이하게하기 위해 복강경 집게로 난소를 들어 올리고 잡습니다.
서로 가까운 여러 난포를 흡인 할 때 난소에 바늘 끝을 유지하여 난소 피질이 고정되는 횟수와 출혈의 고유 한 위험을 줄입니다. 두 개의 기초적인 자궁 뿔 사이에서 복막 가닥을 들어 올려 횡단으로 절개한 다음 절개를 측면, 전방 및 후방으로 확장하여 복막을 해부합니다. 회음부 접근에 질 보조개를 노출시키고 H 자형 절개를 수행하고 방광 직장 공간을 날카 롭고 무딘 해부로 신 질 공간을 만듭니다.
그런 다음 해부 된 복막 가장자리를 질 전정의 가장자리로 당깁니다. 복막 전정 문합에 대한 폴리 디 옥사 논 합성 흡수성 3-0에서 봉합사를 중단시켰다. 둥근 인대, 난관 협부, 자궁 난소 인대 및 측면 복막 잎의 결합 고정으로 방광 위의 동원 된 복막에서 각 반골반의 폴리 디 옥사 논 합성 흡수성 2-0 모노 필라멘트의 지갑 끈 봉합을 시작하십시오.
그런 다음 두 봉합사에 중직근의 측면과 직장 상 장막의 앞쪽 측면을 직장 S 자 접합부 바로 아래에 포함시킵니다. 마지막으로 복막으로 코팅된 신생질에 파라핀 코팅 거즈를 놓습니다. 휴대용 인큐베이터에서 따뜻하게 유지 된 10mm 둥근 바닥 튜브에 모낭 흡인물을 수집하고 약 10 분의 운송 시간으로 즉시 발생학 실험실로 운반하십시오.
모든 적운 난 모세포 복합체가 수집되면 수정 배지가 들어있는 4 웰 접시에 넣고 뚜껑과 바닥에 환자의 신원과 관련된 데이터를 표시합니다. 6 % 이산화탄소와 5 % 산소를 포함하는 통제 된 분위기에서 섭씨 37도에서 배양하십시오. 실험실 직원의 두 번째 구성원이 절차를 다시 확인하는지 확인하십시오.
배란 후 38시간 이내에 적운 코로나 세포 제거를 수행합니다. 효소가 들어 있는 중앙 웰에 적운 난모세포 복합체를 배치하여 유리 파스퇴르 피펫으로 적운 세포를 분산시키고, 적운 난모세포 복합체가 포함된 용액을 최대 30초 동안 위아래로 부드럽게 피펫팅합니다. 난모세포를 hepes 완충 배지만 포함된 두 번째 중앙 웰 접시로 옮기고 최소량의 효소를 대체해야 합니다.
내경이 감소하는 탈질 피펫을 사용하여 나머지 코로나 세포를 제거합니다. 난 모세포 성숙 단계를 평가하여 중기 II 난 모세포를 분리합니다. 중기 II 난 모세포를 6 밀리미터의 미네랄 오일로 덮인 연속 단일 배양 배지 9 방울을 함유하는 IVF 배양 60 밀리미터 페트리 접시에 옮깁니다.
6 % 이산화탄소와 5 % 산소를 포함하는 통제 된 분위기에서 섭씨 37도에서 배양하십시오. 냉각 상자를 상단까지 신선한 액체 질소로 채우고 분산 및 증발을 최소화하기 위해 사용될 때까지 덮습니다. 조작 중에 난 모세포 손상을 피하기 위해 내경이 170 마이크로 미터 인 스트리퍼 피펫을 사용하십시오.
평형 용액, 유리화 용액 및 세척 용액의 각 바이알을 부드럽게 흔들어 내용물을 혼합한 후 사용합니다. 60 밀리리터 페트리 접시의 뚜껑을 50 마이크로 리터의 세척액 한 방울로 준비하십시오. 배지 증발을 제한하기 위해 사용 직전에 방울을 떨어 뜨립니다.
인큐베이터에서 난 모세포 접시를 가져 와서 배양 접시에서 최소 부피의 배지로 중기 II 난 모세포를 50 마이크로 리터의 세척 용액으로 옮깁니다. 세척액 2, 평형화 용액 1, 평형화 용액 2를 50마이크로리터 방울에 가깝게 분배하고 난모세포를 드롭 세척액 1에서 드롭 세척액 2로 옮깁니다. 평형 용액 1을 세척 용액 2에 병합하고 두 용액이 자발적으로 혼합 될 때까지 2 분 동안 기다립니다.
그런 다음 평형 용액 2 방울을 이전에 병합 된 방울에 병합하고 2 분 동안 그대로 두십시오. 마지막으로, 새로운 100 마이크로 리터 방울의 평형 용액 3을 이전에 병합 된 방울에 병합하고 1 분 동안 추가로 두십시오. 난모세포를 100-마이크로리터 한 방울의 평형 용액 4방울에 넣고 10분 동안 떨어뜨린다.
50마이크로리터 유리화 용액 2방울과 100마이크로리터의 유리화 용액 1개를 분배합니다. 난모세포를 유리화 용액 3방울에 순차적으로 넣고 60초 동안 움직여 난모세포가 약 20초 동안 각 방울에 남아 있도록 합니다. 60 초의 배양이 끝나기 전에 약 10 초가 남았을 때 냉동 장치를 현미경 아래에 놓습니다.
피펫 끝에서 난 모세포를 운반하고 최소량의 유리화 용액으로 냉동 장치에 놓습니다. 과도한 유리화 용액을 흡인하여 난 모세포를 유리화 용액의 얇은 층으로 덮습니다. 냉동 장치를 액체 질소에 직접 넣고 빠르게 움직입니다.
장치를 액체 질소에 보관하고 보호 뚜껑으로 덮으십시오. 난 모세포 회수 및 질 성형술의 수반되는 복강경 절차는 모든 환자에서 성공적으로 결합되었습니다. 평균 11.4 5.4 개의 난 모세포가 회수되었고 9.6 개의 4.3 M2 난 모세포가 냉동 보존되었습니다.
총 평균 수술 시간은 114 17 분이었다. 수술 중 출혈은 모든 환자에서 유의하지 않았으며 수술 중 부작용은 관찰되지 않았습니다. 수술 후 3일째에, 환자들은 매일 확장기 사용을 시작하였고, 6.0 1.0일째에 퇴원하였다.
난소 내 난포의 신중한 흡인이 권장되며, 최적의 접근과 회수를 보장하기 위해 난소의 자동 동원에주의를 기울입니다.
