Caracterização espectroscópica UV-Vis de nanomateriais na mídia aquosa

Resumo

Este estudo apresenta os resultados de benchmarking para uma comparação interlaboratória (ILC) projetada para testar o procedimento operacional padrão (SOP) desenvolvido para dispersões coloidas de ouro (Au) caracterizadas por Espectroscopia ultravioleta-visível (UV-Vis), entre seis parceiros do projeto H2020 ACEnano para preparação, medição e análise dos resultados.

Resumo

A caracterização físico-química de nanomateriais (NMs) é frequentemente um desafio analítico, devido ao seu pequeno tamanho (pelo menos uma dimensão na nanoescala, ou seja, 1-100 nm), natureza dinâmica e propriedades diversas. Ao mesmo tempo, a caracterização confiável e repetível é primordial para garantir a segurança e a qualidade na fabricação de produtos portadores de NM. Existem vários métodos disponíveis para monitorar e obter uma medição confiável de propriedades relacionadas à nanoescala, um exemplo disso é espectroscopia Ultravioleta-Visível (UV-Vis). Trata-se de uma técnica bem estabelecida, simples e barata que fornece avaliação de triagem não invasiva e rápida em tempo real do estado de tamanho, concentração e agregação de NM. Tais características tornam o UV-Vis uma metodologia ideal para avaliar os esquemas de teste de proficiência (PTS) de um procedimento operacional padrão validado (SOP) destinado a avaliar o desempenho e a reprodutibilidade de um método de caracterização. Neste artigo, o PTS de seis laboratórios parceiros do projeto H2020 ACEnano foi avaliado por meio de uma comparação interlaboratorial (ILC). As suspensões coloides padrão (Au) de diferentes tamanhos (variando de 5 a 100 nm) foram caracterizadas por UV-Vis nas diferentes instituições para desenvolver um protocolo implementável e robusto para caracterização do tamanho de NM.

Introdução

Os nanomateriais (NMs) tornaram-se populares devido às suas propriedades únicas na nanoescala (1 a 100 nm), que diferem das propriedades de suas contrapartes a granel, seja devido a efeitos relacionados ao tamanho ou quânticos (por exemplo, aumento da área de superfície específica por volume) juntamente com reatividade distinta, propriedades ópticas, térmicas, elétricas e ^{magnéticas1,2} . As aplicações potenciais de NMs na sociedade são diversas e amplamente relacionadas a áreas como saúde, indústria alimentícia, cosméticos, tintas, revestimentos e ^{eletrônica3,4,5}. As nanopartículas de ouro (AuNPs) são amplamente aplicadas na nanotecnologia (por exemplo, em cuidados de saúde, cosméticos e aplicações eletrônicas), principalmente devido à sua simples fabricação, características ópticas dependentes de tamanho, potencial de funcionalização de superfície e propriedades físico-químicas, que podem ser adequadas para muitas ^{aplicações-chave6,7}.

Qualidade e reprodutibilidade na síntese e caracterização de NMs são extremamente importantes para a garantia da qualidade, mas também para a fabricação segura de produtos nano-baseados, especialmente devido à reatividade de NMs, notadamente em ambientes complexos, onde propriedades de NM, como distribuição de tamanho e morfologia, podem sofrer mudanças rápidas^8,9. Inúmeros métodos estão disponíveis para monitorar propriedades relacionadas à nanoescala. Por exemplo, microscopia eletrônica de varredura/transmissão (SEM/TEM) são técnicas utilizadas para obter informações ópticas e composicionais de alta resolução (até subnômetros) de NMs; a microscopia de força atômica (AFM) fornece resolução nanoescala na dimensão vertical (eixo z); e difração de raios-X (XRD) fornece informações sobre a estrutura atômica dos NMs; todos esses métodos só podem ser usados em amostras secas (pós)^10,11. Técnicas adequadas para a caracterização de NMs em mídia líquida incluem fracionamento de fluxo de campo (FFF), que permite a separação de grandes moléculas, agregados e partículas com base em seu tamanho; dispersão dinâmica de luz (DLS); e análise de rastreamento de nanopartículas (NTA) — dois métodos amplamente utilizados para determinar o perfil de distribuição de tamanho das partículas usando movimento browniano — e espectrofotometria ultravioleta visível (UV-Vis), que permite a avaliação de características de NM, como tamanho, estado de agregação e índice de refração por uma simples medição de absorção^11,12,13. Embora todas essas técnicas permitam a caracterização do NM, seu desempenho depende da configuração do instrumento, diferenças relacionadas ao instrumento, metodologia complexa para preparação da amostra e nível de experiência do usuário. Além disso, a maioria das técnicas não permite o monitoramento em tempo real do tamanho do NM, integridade da amostra ou diferenciação entre partículas dispersas ou agregadas⁶. A espectroscopia UV-Vis é uma técnica amplamente utilizada que fornece avaliação não invasiva e rápida em tempo real do estado de tamanho, concentração e agregação de NM. Além disso, é um processo simples e barato com preparação mínima de amostras, o que torna essa técnica uma ferramenta essencial que é amplamente utilizada em inúmeros laboratórios dentro de muitas disciplinas e mercados^6,12,14. UV-Vis funciona medindo a transmissão da radiação eletromagnética de um comprimento de onda entre 180 e 1100 nm através de uma amostra líquida. As faixas espectrais UV e VIS cobrem a faixa de comprimento de onda para o ultravioleta (170 nm a 380 nm), visível (380 nm a 780 nm) e infravermelho próximo (780 nm a 3300 nm)^4,14. O comprimento de onda da luz que passa pela célula amostral é medido; a intensidade da luz entrando na amostra é referida como eu₀, ea intensidade da luz emergindo do outro lado é designada como eu₁¹⁴. A lei Beer-Lambert reflete a relação entre A (absorvância) em função da concentração amostral C, o coeficiente de extinção amostral ε e as duas intensidades¹⁴. As medidas de absorção podem ser coletadas em um único comprimento de onda ou em uma faixa espectral estendida; a transmissão de luz medida é transformada em uma medição de absorvência seguindo a equação da lei Beer-Lambert. A equação padrão para a absorção é A = ɛlc, onde (A) é a quantidade de luz absorvida pela amostra para um determinado comprimento de onda (ɛ) é o coeficiente de atenuação molar (absorvência/(g/dm³) (l) é a distância que a luz percorre através da solução (cm), e (c) é a concentração por volume unitário (g/dm³). A absorvância é calculada como a razão entre a intensidade de uma amostra de referência (I₀) e a amostra desconhecida (I), conforme descrito na equação a seguir¹⁴:

A simplicidade do UV-Vis torna-se uma técnica ideal para comparar o PTS de um protocolo de medição estabelecido6,12,15. O objetivo de um ILC ou PTS é verificar o desempenho e a reprodutibilidade de um método usando um ^SOP15. Isso, por sua vez, fornece uma abordagem padronizada para caracterização rápida de suspensões de nanopartículas para outros usuários.

Para avaliar a proficiência, consistência e confiabilidade do método aqui apresentado, seis laboratórios participaram de um ILC como membros do projeto Horizon 2020 ACEnano (https://cordis.europa.eu/project/id/720952). O ILC envolveu a caracterização UV-Vis de dispersões coloidas padrão Au de diferentes tamanhos de partículas (5-100 nm). Um SOP foi fornecido a todos os laboratórios envolvidos para garantir a preparação idêntica das suspensões, avaliação e relatórios de resultados da AuNP para contribuir para o desenvolvimento de uma abordagem hierárquica implementável e robusta na caracterização física, interpretação de dados e melhoria dos protocolos de boas práticas para necessidades industriais e ^{regulatórias8}.

Protocolo

1. Entrega das amostras de AuNP:

1. Prepare alíquotas de 5 mL de dispersões coloides de Au com tamanhos de 5, 20, 40, 60 e 100 nm, incluindo uma amostra de 50 μg/mL de 'tamanho desconhecido' (Veja tabela de materiais para obter detalhes mais específicos sobre os nanomateriais utilizados).
2. Envie as amostras em recipientes de poliestireno de 7 mL com embalagens de gel para cada laboratório participante para manter uma temperatura adequada durante o transporte. Armazene as amostras a 4 °C imediatamente.
   NOTA: A amostra de 'tamanho desconhecido' deve apresentar um tamanho de 80 nm; essas informações devem ser conhecidas pelo parceiro que distribui o material, mas não divulgadas aos demais parceiros.

2. Calibração do espectrômetro:

1. Ligue o espectrômetro UV-Vis por pelo menos 20 minutos para permitir que a lâmpada aqueça.
   NOTA: Consulte a Tabela de Materiais para o modelo e marca do espectrômetro utilizado.
2. No software, selecione a opção Varredura de espectro na janela de modo, que exibe os modos operacionais.
3. Ajuste as configurações do parâmetro em | de instrumentos Configurações e parâmetros no software antes de prosseguir com as medições: Modo de medição | Varredura de espectro, modo de dados | ABS, Comprimento de onda Start de 680 nm, comprimento de onda final de 380 nm, Velocidade de Varredura de 400 nm/min, intervalo de amostragem de 0,5, Largura de Fenda de 1,5 e Comprimento do Caminho de 10.
4. Após os parâmetros definidos, encha duas cucas (3 mL; poliestireno) com 1 mL de água ultrapura (UPW) (18,2 M·Ω·cm). Coloque as cuvetas no suporte celular de referência (traseira) e no suporte de célula de amostra (frente) para cobrir o caminho da luz (Veja Tabela de Materiais para a marca específica e modelo das cuvetas utilizadas).
   NOTA: Certifique-se de que as cuvetas estão posicionadas e alinhadas corretamente para cancelar o efeito de ruído e outros efeitos ambientais que não estejam relacionados à amostra.
5. Feche a tampa do instrumento UV-Vis e continue com a calibração em branco selecionando Blank na barra de comando. A correção da linha de base é realizada executando uma referência com as duas cuvetas preenchidas com 1 mL de UPW colocadas nos suportes de amostra. Para protocolos alternativos utilizados por outros parceiros, consulte Informações Complementares (SI).

3. Preparação das amostras

1. Pegue uma subsample de 500 μL para cada AuNP de 5, 20, 40, 60, 100 nm, e o tamanho desconhecido, e prepare uma diluição com 500 μL de UPW.
2. Coloque as suspensões diluídas em cuvetas de 1 mL; a taxa de diluição total deve ser de 1:1 e concentração final 25 μg/mL.
   NOTA: A amostra diluída deve ser preparada imediatamente antes da medição UV-Vis.

4. Medição das dispersões de nanopartículas

1. Após a calibração em branco ter sido realizada, e uma nova amostra foi preparada, substitua um dos cuvetas em branco no suporte da célula amostra (frontal) pela amostra de dispersão AuNP; a outra cuvette de referência preenchida com 1 mL de UPW deve ser deixada intocada.
   NOTA: Use um novo cuvette descartável para diferentes amostras para evitar a contaminação cruzada entre as amostras. Ao usar cuvetas de quartzo, enxágue a colher de sopa com UPW entre as amostras.
2. Selecione a opção Medir/Iniciar na barra de comando para executar as varreduras de espectro para cada dispersão AuNP diluída. Três varreduras de espectro devem ser obtidas para cada amostra de AuNP, incluindo a amostra de tamanho desconhecido.
   NOTA: Certifique-se de que o cuvette em branco permanece no suporte da célula de referência ao executar uma medição.

5. Relatórios de resultados

1. Extrair os dados experimentais brutos para cada medição em um arquivo compatível com planilhas selecionando o menu arquivo e clicando no relatório de exportação (*.csv) arquivo.
2. Observe o comprimento de onda de absorção máxima (_Absmax) e lambda (_λmax) para cada uma das leituras UV-Vis e grave-as no modelo fornecido.
   NOTA: O modelo pré-assinado foi fornecido aos parceiros ACEnano para calcular automaticamente os desvios padrão médios dos comprimentos de onda, definindo a fórmula de cálculo apropriada na pasta de trabalho. Para obter mais detalhes e acesso ao modelo, consulte Informações Complementares (SI).
3. Na pasta de trabalho, plote uma curva de calibração com a média do _λmax (eixo y) contra o tamanho conhecido da nanopartícula (nm) (5, 20, 40, 60 e 100 nm). Por exemplo, na planilha, crie a curva de calibração selecionando na barra de comando Data | Inserir | de gráficos | de parcela de dispersão Adicionar | de linha de tendência Curva polinomial (Potência 2).
4. Inclua a equação polinomial para a curva de calibração: selecione Opções de linha de tendência | Equação de exibição no gráfico da barra de comando (Figura 1).
5. Finalmente, para calcular o tamanho desconhecido da amostra de AuNP, isole a equação polinomial da curva de calibração para se encaixar no valor médio do _λmax desconhecido, utilizando uma derivação da fórmula quadrática (Figura 1). O tamanho calculado pode ser incluído no modelo para completar um resumo completo dos dados para consistência, interpretação mais rápida e avaliação dos resultados (ver SI).

Figura 1: Curva de calibração para calcular o tamanho da amostra desconhecida. O enredo representa os comprimentos de onda (_λmax) e o tamanho dos AuNPs usados para traçar a calibração. A trama mostra apenas uma curva de calibração de um parceiro. Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.

Resultados

UV-Vis é uma das técnicas mais populares para caracterização de nanopartículas, pois permite ao usuário obter análise precisa de propriedades de NMs como _Absmax e _λmax6,12. Os resultados do presente estudo representam a caracterização UV-Vis das dispersões AuNP por meio de um ILC entre seis laboratórios participantes.

Figura 2: Lambda e resultados de absortância. Os números mostram as parcelas dos resultados relatados por cada laboratório para diferentes tamanhos de AuNP. A) Resultados máximos da Lambda. B) Resultados máximos de absorvência. O Laboratório 5 não foi capaz de relatar dados de 100 nm devido à contaminação da amostra. Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.

Os resultados dos comprimentos de onda _λmax mostraram uma repetibilidade próxima entre os parceiros (Figura 2A). Este também foi o caso da faixa calculada, que foi utilizada para avaliar a diferença entre os valores, e que apresentou pequenas diferenças variando entre 1,00 e 2,40 (_λmax) para a maioria dos tamanhos de AuNP (Tabela 1). A média geral _λmax , calculada usando a média registrada para cada laboratório para cada tamanho AuNP, apresentou desvios padrão similarmente baixos para a maioria dos tamanhos. O tamanho de 100 nm foi a única isenção, pois exibia uma faixa de variação elevada (4,66 _λmax) entre os parceiros, levando a um maior desvio padrão (572 ± 2,00 nm) em comparação com outros tamanhos de AuNP (Tabela 1). É importante mencionar que o laboratório 5 não foi capaz de realizar quaisquer medições para as partículas de tamanho de 100 nm, devido a problemas de contaminação que poderiam ter comprometido a repetibilidade dos resultados.

Em contraste, os resultados de absorção (_Absmax) apresentaram uma gama mais dispersa de valores de dados (Figura 2B) em comparação com os resultados _λmax . Apesar da variabilidade aparentemente maior desses resultados entre laboratórios, a análise apresentou meios gerais com desvios padrão mais baixos e variações inferiores inesperadas (0,11-0,21 _Absmax) entre laboratórios em comparação com os resultados _λmax (Tabela 1).

Valor	AuNP (nm)
	5	20	40	60	100	Desconhecido
Alcance λmax	1.45	1.00	3.00	2.00	4.66	2.40
Alcance Aumax	0.12	0.11	0.13	0.13	0.12	0.21
Λmax médio	517,7 ± 0,59	524,6 ± 0,45	527,8 ± 1.13	535,3 ± 0,74	572 ± 2.00	549,7 ± 0,85
Aumax médio	0.395 ± 0,048	0.497 ± 0,050	0,509 ± 0,057	0,689 ± 0,055	0,472 ± 0,051	0,661 ± 0.101

Tabela 1: Lambda e Absorbance calculam faixa e meios. A faixa e o desvio médio e padrão geral para cada tamanho AuNP são mostrados. Os resultados foram calculados utilizando-se a média relatada para lambda e absorvência para cada laboratório (seis medidas), com exceção do tamanho de 100 nm para o qual apenas 5 medidas foram utilizadas para calcular os valores devido a uma contaminação amostral relatada pelo laboratório 5.

Os valores de pontuação Z também foram calculados para observar a distância dos valores individuais da média geral. A análise dos escores Z forneceu informações sobre a confiança dos resultados do ILC, uma vez que os escores estão diretamente relacionados à distribuição populacional, exibindo, em uma série de desvios padrão, o quão longe um ponto de dados está da ^média16. Nos resultados, a maioria dos laboratórios apresentou valores positivos de pontuação Z de 0,01-1,93 para _λmax, indicando que a maioria dos resultados foram próximos da média e apresentaram uma curva de distribuição normal, pois os escores Z maiores que o valor absoluto de 2 e -2 são considerados valores distantes da média e não possuem uma distribuição ^normal16. A maior pontuação Z para _Absmax foi registrada para o tamanho de 40 nm relatado pelo laboratório 1, com um valor de 1,93 e uma média _Absmax de 530 ± 0, em comparação com a média geral de 527,82 ± 1,13 (Figura 3A). O valor máximo de pontuação Z de 1,23 para _λmax foi relatado pelo laboratório 3, juntamente com um _λmax relatado de 0,454 ± 0 para 5 nm tamanho AuNP em comparação com a média geral de 0,395 ± 0,04. Isso foi seguido pelo AuNP de 60 nm com pontuação Z de 1,18 e média _λmax de 0,754 ± 0 em comparação com a média geral de 0,689 ± 0,05. Os demais tamanhos apresentaram valores de pontuação Z de -0,04 a -1,23 (Figura 3B).

Figura 3: Lambda e Absorbance Z-scores. Os escores Z foram calculados utilizando-se os resultados relatados por cada laboratório em relação à média geral. A) Calculado Lambda max Z-scores. B) Absorvância calculada máxima de pontuação Z. Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.

Os resultados da amostra desconhecida mostraram que a maioria dos parceiros calculou o tamanho de 76-80 nm. A média dos laboratórios 1-4 e 6 foi registrada como 78,02 ± 1,36 nm. O Laboratório 5 relatou um tamanho maior de 109 nm, ampliando a média geral e o desvio padrão para 83,18 ± 12,70 nm, sugerindo que esse valor era um outlier (Figura 4A). Os escores Z foram calculados entre -0,25 e -0,56 para todos os laboratórios; a única exceção foi para o tamanho desconhecido relatado pelo laboratório 6, que apresentou o maior escore Z positivo (2,03) em comparação com todas as medidas, que podem ser consideradas como um valor distante da média (Figura 4B).

Figura 4: Tamanho amostral desconhecido e escores Z. A) Tamanho relatado para cada laboratório para a amostra desconhecida fornecida. B) Pontuação calculada para cada resultado individual contra a média geral de 83,18 ± 12,70 nm. Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.

Informações Complementares (SI): Clique aqui para baixar este Arquivo.

Discussão

Vários métodos estão disponíveis para a caracterização de propriedades relacionadas à nanoescala (por exemplo, ultracentrifugação analítica (AUC), Microscopia eletrônica de varredura/Microscopia eletrônica de transmissão (SEM/TEM) e Dispersão dinâmica de luz (DLS)^10,11). No entanto, essas técnicas carecem da simplicidade dos UV-Vis para obter resultados primários na caracterização das ^NMs12,13. O UV-Vis é um instrumento comum mesmo em laboratórios não tão bem equipados, tornando-o uma ferramenta imbatível para a caracterização de NMs6. Ao caracterizar NMs, é importante considerar as limitações, pontos fortes e fracos das técnicas a serem aplicadas. No espectrômetro UV-Vis, o feixe de luz passa pelo compartimento da amostra resultando em valores de absorção; como resultado, vibrações externas, luz externa, contaminantes e o desempenho do usuário podem interferir na medição e ^{resultados4,12}. Da mesma forma, ao traçar uma curva de calibração para determinar o tamanho de uma amostra desconhecida, é importante registrar todas as medidas necessárias para construir a calibração, pois fatores ausentes podem contribuir para variações entre medições e usuários.

Por exemplo, a alta variação na média geral do _Absmax da amostra desconhecida pode estar ligada a diferenças entre os laboratórios devido à dependência entre a intensidade do feixe, a posição e o próprio ^{instrumento17,18}. Além disso, os dados perdidos para o tamanho de 100 nm do laboratório 5, devido a um problema de contaminação, também podem contribuir para as altas diferenças entre os resultados, uma vez que os dados perdidos podem ter afetado a curva de calibração e a equação polinomial plotada usada para calcular o tamanho da suspensão AuNP desconhecida. Certamente, a reprodutibilidade entre protocolos e laboratórios pode ser complicada, pois muitos fatores podem contribuir para a falta de consistência nas atividades laboratoriais, resultando em pesquisadores ocasionalmente incapazes de reproduzir descobertas de outros laboratórios, o que pode levar a progressos científicos mais lentos, tempo desperdiçado, dinheiro e ^recursos19. A caracterização bem-sucedida das propriedades físico-químicas dos NMs, particularmente o tamanho, requer um método fácil de executar por todos os laboratórios participantes, que pode ser abordado principalmente seguindo uma replicação sistemática e conceitual, como a criação de um SOP, treinamento de instrumentos e evitando o uso de amostras mal identificadas ou contaminadas ^15,19.

Da mesma forma, a qualidade e estabilidade da suspensão coloide também são fatores importantes a serem considerados, pois mudanças em suas propriedades físico-químicas podem levar a diferentes desfechos. Portanto, para garantir sua estabilidade por períodos mais longos, as suspensões de nanopartículas devem ser armazenadas no escuro a 4 °C. Da mesma forma, durante o processo de envio, as amostras aliquoted devem ser mantidas frias, uma vez que longos períodos à temperatura ambiente podem levar a agregação ^{significativa20}. Além disso, para superar falhas na caracterização do NM, é necessário fornecer acesso aos dados originais, protocolos e materiais de pesquisa importantes entre laboratórios colaboradores, especialmente, ao avaliar a proficiência, consistência e confiabilidade através de um ^ILC15. Tornar esses fatores claros e acessíveis é fundamental para alcançar uma caracterização de NM bem sucedida por qualquer laboratório ou equipamento. Desconsiderar esses aspectos pode resultar em falta de reprodutibilidade, precisão e resultados enganosos ou errôneos15. Embora a espectroscopia UV-Vis tenha sido demonstrada como o padrão-ouro na caracterização NM, ela pode ser explorada em muitos outros campos, pois permite a determinação quantitativa de uma ampla gama dinâmica de soluções em compostos inorgânicos e ^{orgânicos6,21}.

Além disso, o UV-Vis pode ser facilmente combinado com outras ferramentas para medir uma grande variedade de atributos, melhorando assim a qualidade de qualquer ^análise22. Com base nessas características, o UV-Vis é amplamente utilizado em muitas áreas, como no campo biofarmacêutico, medindo espectros UV-Vis em soluções proteicas de alta concentração, no controle ambiental ao comparar semelhanças entre contaminantes e suas impurezas relacionadas ao produto em tempo real, em estações de tratamento de águas residuais industriais como parte das regulamentações para determinação de cor de esgoto e nível de aceitabilidade ^{de águas residuais22, Dia 23}. Certamente, à medida que a tecnologia progride e recursos e experiência mais avançados se tornam disponíveis na espectrofotometria, a ampliação ainda maior das aplicações e parâmetros que podem ser medidos usando essa técnica ^ocorrerá22. Por exemplo, em aplicações de campo, a espectrometria UV-Vis on-line é uma ferramenta valiosa para monitorar inúmeros parâmetros em tempo real e em vários tipos de líquidos, o que é uma característica excepcional entre os sistemas de sensores ^on-line22.

O ILC descrito aqui foi projetado como um teste do SOP desenvolvido para UV-Vis entre seis laboratórios participantes envolvidos no projeto H2020 ACEnano. A análise dos resultados demonstrou que um ILC fornece informações valiosas para permitir a confiança técnica em um método interno de caracterização de NM por cada laboratório participante. A coleta de dados em um modelo estabelecido confirmou a consistência e a interpretação mais rápida dos resultados e forneceu um modelo para a estimativa do tamanho de uma amostra AuNP desconhecida, que também apresentou repetibilidade entre os resultados quando foram incluídos pontos suficientes na curva de calibração. Além disso, os resultados validaram a eficácia do UV-Vis para a caracterização de NM, bem como a importância da criação de protocolos de boas práticas. Tal abordagem ainda proporciona uma oportunidade para que o procedimento implementado contribua para o desenvolvimento de um quadro legislativo por meio de protocolos reprodutíveis de caracterização de NM baseados na seleção de métodos e interpretação de dados relevantes para reguladores de acreditação e órgãos de gestão de pesquisa.

Materiais

Name	Company	Catalog Number	Comments
Absorption Ultra-Micro-cuvette, 200 µL	Hellma	105.201-QS
Cary 5000 spectrophotometer (Spectrophotometer C)	Agilent	Cary 5000
Gold nanoparticles 5 nm	BBI solutions	EM.GC5
Gold nanoparticles 20 nm	BBI solutions	EM.GC20
Gold nanoparticles 40 nm	BBI solutions	EM.GC40
Gold nanoparticles 60 nm	BBI solutions	EM.GC60
Gold nanoparticles 80 nm	BBI solutions	EM.GC80
Gold nanoparticles 100 nm	BBI solutions	EM.GC100
Agilent / HP 8453 (Spectrophotometer E)
Jenway 6800 spectrophotometer (Spectrophotometer A)	Jenway	UV6800
Polystyrene cuvette, 1.5 mL, micro 10 mm pathlength	Sigma	759015
Polystyrene cuvette, 3 mL (10 mm x 10 mm x 45 mm)	Sarstedt Inc	67.742
Semi-micro quartz cuvette, 1mL (1 mm x 10 mm x 45 mm)	Agilent	6610001
Ultrapure water (UPW) (18.2 MΩcm).	/	/
UV-1800 spectrophotometer (Spectrophotometer B)	Shimadzu	UV1800
Varian Cary 50 spectrophotometer (Spectrophotometer D)	Agilent	Cary 50