Usando Espalhamento Múltiplo de Luz para Examinar a Estabilidade de Extratos de Phyllanthus emblica L. Obtidos com Diferentes Métodos de Extração

Resumo

Aqui, apresentamos um método de avaliação da estabilidade baseado na tecnologia de espalhamento múltiplo de luz para avaliar a estabilidade de extratos da medicina tradicional chinesa.

Resumo

O intermediário de extração da medicina tradicional chinesa é o intermediário chave no processo de preparação, e sua estabilidade tem um impacto importante na eficácia e qualidade do produto final. No entanto, os métodos de avaliação de estabilidade existentes são frequentemente demorados e trabalhosos, exigindo observação de longo prazo e a operação de equipamentos complexos (como cromatografia líquida de alta eficiência), e é difícil obter mais informações físicas sobre a instabilidade do sistema. Portanto, há uma necessidade urgente de estabelecer uma tecnologia de análise de estabilidade rápida e precisa para a medicina tradicional chinesa. O espalhamento múltiplo de luz é um método analítico de ponta que pode avaliar com precisão e rapidez a estabilidade de medicamentos tradicionais chineses de uma maneira ambientalmente amigável sem alterar a natureza ou o estado da amostra ou usar reagentes orgânicos.

Neste trabalho, usando dados precisos de varredura de espalhamento múltiplo de luz, o presente protocolo adquiriu rapidamente as curvas de variação para espessura de camada, velocidade de migração de partículas e tamanho médio de partícula ao longo do tempo. Isso permitiu a identificação precisa do mecanismo e das características cruciais que causam a instabilidade do sistema em seus estágios iniciais. É importante ressaltar que o período de pesquisa para o processo de extração pode ser consideravelmente encurtado pela quantificação detalhada da estabilidade do sistema, o que também permite uma análise rápida, precisa e aprofundada dos efeitos de vários processos de extração na estabilidade de Phyllanthus emblica L.

Introdução

Na fabricação da medicina tradicional chinesa (MTC), a estabilidade dos intermediários de extração de MTC e preparações líquidas relacionadas sempre foi o foco da inspeção¹. A eficácia clínica dos medicamentos, especialmente com polifenóis como princípio ativo primário, sofre devido a problemas significativos de estabilidade ^2,3. Sanajon líquido oral e Nuodikang líquido oral são exemplos de casos típicos desta questão⁴. Portanto, é crucial aprender a usar ferramentas eficientes para avaliar e otimizar de forma rápida e precisa a estabilidade de intermediários líquidos no processo de produção de MTC. Acredita-se que Phyllanthus emblica L. (PE), uma planta medicinal amplamente difundida no Sudeste Asiático, tenha boas propriedades antioxidantes⁵, bem como ações anti-inflamatórias⁶, antibacterianas⁷ e antitumorais⁸. Durante o procedimento de extração térmica, os taninos em PE transformam-se violentamente⁹. Sob catálise com altas temperaturas, esses taninos hidrolisam-se rapidamente para produzir moléculas como o ácido gálico e o ácido elágico, que levam à instabilidade ou precipitação devido à sua baixa solubilidade¹. Os métodos atuais para avaliar a estabilidade da MTC, como testes acelerados ou centrifugação, são geralmente complicados 4, o que limita o desenvolvimento de processos de preparação^pertinentes.

Com base no princípio do espalhamento múltiplo de luz (MLS), estabelecemos um método rápido de avaliação da estabilidade de extratos de PFE e analisamos o mecanismo de instabilidade. MLS é um método de medição baseado na varredura de fontes de luz infravermelha próxima. Qualquer mudança no sistema de solução resulta em uma mudança na intensidade da luz. A luz incidente é espalhada quando é absorvida ou penetrada pelas partículas da amostra. O sistema registra o sinal luminoso de transmissão quando ele passa pela amostra; Se a transmitância da luz da amostra for fraca, o sistema regista o sinal luminoso de retroespalhamento. Em comparação com a observação visual, isso pode economizar muito tempo¹ e pode analisar o fenômeno de instabilidade de forma rápida e precisa em detalhes, fornecendo assim informações mais úteis para orientar a otimização do processo de extração.

Protocolo

1. Preparação do extrato

1. Pese com precisão uma quantidade adequada de PE e adicione 10x (peso) de água deionizada para extração de refluxo.
2. Colocar cinco amostras para extração do refluxo por 0 h (E1), 0,5 h (E2), 1 h (E3), 1,5 h (E4) e 2 h (E5) após a pesagem.
3. Após a extração, resfriar as amostras à temperatura ambiente e pesar para compensar o peso perdido para garantir a consistência com os pesos pré-extração.
4. Centrifugar as amostras a 8.581 × g durante 10 min para garantir a remoção de material insolúvel e resíduos de ervas da solução da amostra.
5. Utilizar uma pipeta para adicionar 20 ml de solução de amostra ao frasco de amostra para garantir que a solução adicionada de cada vez se encontra à mesma altura.
   NOTA: Evite contaminação, como impressões digitais, na parte de digitalização do frasco de amostra, certifique-se de que o frasco de amostra esteja limpo e verifique se há arranhões visíveis na superfície do frasco. Ao adicionar a solução da amostra, tenha cuidado para não derramar ou espirrar no frasco da amostra e certifique-se de que o nível de líquido esteja na mesma altura em cada frasco.

2. Operação do instrumento

1. Ligue o instrumento de detecção MLS e aqueça-o por 30 minutos.
2. Clique no botão Criar arquivo no menu superior (ou clique no botão Arquivo | Nova função de arquivo) para criar um novo arquivo de teste.
3. Clique no botão Mostrar temperatura do laboratório Turbiscan no menu superior para definir a temperatura alvo do instrumento para 25 °C.
   NOTA: A temperatura definida do instrumento deve ser superior à temperatura ambiente; caso contrário, a temperatura da amostra será afetada pela temperatura ambiente.
4. Clique em Program Scan no menu superior para entrar no programa de análise de configuração . Adicione o programa à lista e, na barra de tarefas, adicione 5 min como um ciclo, digitalize por 48 h para a sequência de análise e defina o tempo de equilíbrio para 20 min. Selecione este programa de análise para todas as medições subsequentes.
5. Mova o frasco de amostra preparado para o sistema de detecção MLS. Depois de configurar o programa, clique em Iniciar para iniciar a medição.
   NOTA: Tenha cuidado para não agitar o frasco de vidro ao carregar a amostra. A medição só pode ser iniciada após o equilíbrio entre a temperatura da amostra e a temperatura de ajuste.

3. Configuração do programa de análise de espalhamento de luz múltipla

1. Após a coleta de dados, clique na lista de parâmetros de cálculo para definir os parâmetros ópticos para calcular o índice de estabilidade (IS), o tamanho das partículas e a velocidade de migração das partículas.
2. Defina os parâmetros ópticos da seguinte forma: a intensidade de transmissão de luz de fase contínua (T₀) como 99,99% (água), o índice de refração de fase dispersa (np) como 1,36 e o índice de refração de fase contínua (nf) como 1,33.

Resultados

A Figura 1 mostra o princípio da medida da luz múltipla e o significado dos resultados coletados. Nos resultados dos espectros de MLS (Figura 2), a abscissa foi a altura da célula da amostra, e a ordenada foi a intensidade de transmissão (T%) e retroespalhamento (BS%). Através do cálculo dos resultados dos espectros MLS, o sistema pode obter as mudanças nos principais parâmetros físicos da amostra durante o período de medição, inclu...

Discussão

A avaliação rápida e precisa da estabilidade da MTC sempre foi um foco da pesquisa da MTC. Para fornecer mais informações úteis para direcionar a melhoria do processo de extração, este estudo analisou os mecanismos de estabilidade e instabilidade de uma amostra usando uma tecnologia não destrutiva no infravermelho próximo.

Nesse protocolo, os parâmetros importantes de estabilidade são calculados com base em dados precisos da varredura da MLS. Os exames de MLS podem coletar a transm...

Materiais

Name	Company	Catalog Number	Comments
Adjustable electric heating jacket	Beijing Kewei Yongxing Instrument Co., Ltd	MH-1000	www.keweiyq.com
Analytical balance(1/10000)	Sartorious, Germany	BSA224S	www.sartorius.com.cn
CNC ultrasonic instrument	Kunshan Ultrasonic Instrument Co., Ltd	KQ-500DE	www.ks-csyq.com
GL-16 high-speed centrifuge	Sichuan Shuke Instrument Co., Ltd	18091403	www.sklxj.com
Phyllanthus emblica L.	Hehuachi medicinal materials market	YJL2004	Produced in Yunnan
Turbisoft Lab multiple light scattering instrument	French Formulaction Company	Turbisoft Lab 2.3.1.125 Fanalyser 1.3.5	www.formulaction.com
UPR-II-5T ultra-pure water device	Sichuan ULUPURE  Ultrapure Technology Co., Ltd	Z16030559	www.ccdup.com