1. Veia facial sangra em camundongos

1. Equipamento
   1. A coleta de sangue é de uma captura grátis em um tubo de sangue ou um tubo Eppendorf. Em alguns casos, é desejável coletar sangue diretamente em tubos hematócritos.
   2. As lancetas goldenrod serão selecionadas com base no tamanho apropriado para o animal de acordo com a idade e o sexo.
      1. As lancetas são selecionadas de acordo com a idade/tamanho dos ratos da seguinte forma:
         Lancet de 4mm: camundongos de 3-4 semanas de idade (menos de 15 gramas de peso corporal)
         Lancet de 5mm: camundongos fêmeas com menos de 10 semanas (menos de ~20 gramas de peso corporal)
         Lancet de 5mm: camundongos machos com menos de 6 semanas (menos de ~20 gramas de peso corporal)
         Lancet de 5mm: para amostras de gota única (para manchas de sangue)
         Lancet de 5,5 mm: camundongos fêmeas ao longo de 10 semanas (mais de ~20 gramas de peso corporal)
         Lancet de 5,5 mm: camundongos machos ao longo de 6 semanas (mais de ~20 gramas de peso corporal)
         Lancet de 5,5 mm: amostras grandes
2. Restrição
   1. Os ratos são contidos usando a técnica de scruffing.
   2. É importante que o movimento lado a lado da cabeça seja minimizado. Isso garante uma venipuntura precisa e segura com a lanceta.
3. Retirada de sangue
   1. A lanceta de tamanho adequado é mantida perpendicular à superfície da pele.
   2. O ponto lanceta é ligeiramente angular, com a ponta voltada para o nariz.
   3. A lâmina lanceta é melhor usada em uma posição vertical.
   4. Enquanto restringe o mouse, localize a área aproximada da veia facial medindo o comprimento do olho abaixo do canthus lateral e a largura do olho caudalmente.
   5. Com o ponto da lanceta, sinta suavemente o ponto em que a mandíbula termina.
   6. Para melhor precisão na pontuação do vaso, posicione o mouse em recumbência lateral.
   7. Fure a pele até o ombro da lanceta naquele momento. Isso é feito com um empurrão firme e não como jogar um dardo.
   8. Após a remoção da lança, o sangue começará a fluir.
   9. Para auxiliar o fluxo sanguíneo, posicione o rato com a cabeça mais baixa que o coração.
   10. Recolher o sangue no vaso de coleta desejado.
   11. Borrue o local da punção e solte pressão no scruff para hemostasia.

Figura 1. Veia facial sangra em camundongos.

2. Sangramento submandibular em camundongos: Embora muito semelhante à técnica para o sangramento da veia facial, há variações no equipamento e diferenças sutis neste procedimento de sangramento.

1. Equipamento
   1. A coleta do sangue é de uma captura gratuita em um tubo de sangue ou um tubo Eppendorf. Em alguns casos, é desejável coletar diretamente em tubos hematócritos.
   2. As agulhas de calibre 18-22 são selecionadas com base no tamanho adequado para o animal de acordo com a idade e o sexo.
      1. As agulhas são selecionadas de acordo com a idade/tamanho dos ratos da seguinte forma:
         22 medidor: camundongos de 3 a 4 semanas (menos de 15 gramas de peso corporal)
         20 medidor: camundongos fêmeas com menos de 10 semanas (menos de ~20 gramas de peso corporal)
         20 medidor: camundongos machos com menos de 6 semanas (abaixo de ~20 gramas de peso corporal)
         20 medidor: para amostras de gota única (para manchas de sangue)
         18 medidor: camundongos fêmeas ao longo de 10 semanas (mais de ~20 gramas de peso corporal)
         18 medidor: camundongos machos ao longo de 6 semanas (mais de ~20 gramas de peso corporal)
         18 medidor: amostras grandes
2. Restrição
   1. Os ratos são contidos usando a técnica de scruffing.
   2. É importante que o movimento lado a lado da cabeça seja minimizado. Isso garante uma venipuntura precisa e segura com a agulha.
3. Retirada de sangue
   1. A agulha é mantida perpendicular à superfície da pele.
   2. Enquanto restringe o rato, localize a área aproximada da veia submandibular pelo ponto onde uma linha do canto da boca cruza uma linha do canthus lateral do olho. Isso coincide com uma pequena covinha sem pelos encontrada caudal no canto da boca e ligeiramente abaixo da linha da mandíbula.
   3. Para melhor precisão na pontuação do vaso, posicione o mouse em recumbência lateral.
   4. Fure a pele com a ponta da agulha nesse ponto. Isso é feito com um empurrão firme e não como jogar um dardo.
   5. A agulha não está inserida além da ponta do bisel.
   6. Após a remoção da agulha, o sangue começará a fluir.
   7. Para auxiliar o fluxo sanguíneo, posicione o rato com a cabeça mais baixa que o coração.
   8. Recolher o sangue no vaso de coleta desejado.
   9. Limpe o local da punção e solte a pressão sobre o scruff para hemostasia.

Figura 2. Veia submandibular sangra em camundongos.

3. Sangrous de Saphenous

1. Equipamento
   1. Cones de contenção flexíveis e de plástico transparente podem ser usados tanto para o rato quanto para o rato. Para camundongos, tubos cônicos plásticos modificados de 50 mililitros podem ser usados para contenção. Para ratos, tubos de contenção plexiglas modificados - com uma ranhura larga o suficiente para estender a perna traseira - pode ser usado.
   2. Ao utilizar o cone plástico, ele é medido contra o comprimento do corpo do animal, e um orifício oval é cortado ao nível da coxa.
   3. Um tubo cônico pode ser modificado para um rato para este método de coleta de sangue cortando a extremidade do tubo para permitir um orifício respiratório. Uma ranhura é cortada da extremidade da tampa do tubo com cerca de 1/2 polegada de largura e 2 polegadas de comprimento. As bordas são cobertas em fita adesiva ou suavizadas para a segurança animal.
   4. Um torniquete é fabricado usando uma seringa de 3 cc e um comprimento de sutura nãoabsorbável de 2-0. ³
   5. A pomada de antibiótico triplo ou geleia de petróleo branca é usada como uma barreira à prova de umidade na pele.
   6. Uma agulha de calibre 22 é o tamanho preferido para a venipunctura.
   7. O sangue é coletado diretamente nos tubos hematócritos.
2. Restrição
   1. Cones plásticos flexíveis
      1. O rato ou rato é colocado no nariz do cone primeiro.
      2. A extremidade do cone é dobrada e fechada usando um pequeno clipe de aglutinante para evitar que o animal saia do cone de contenção.
      3. A perna traseira é puxada suavemente através da abertura oval para a virilha.
   2. Tubo cônico para ratos
      1. O rato é colocado no tubo primeiro.
      2. A perna traseira é guiada suavemente para dentro da fenda.
      3. O dedo médio é colocado sobre a extremidade do tubo para evitar que o rato saia do tubo.
      4. O dedo indicador e o polegar estabilizam a perna do rato.
   3. Tubo de contenção plexiglas para ratos
      1. O rato é colocado no tubo primeiro.
      2. A perna traseira é guiada suavemente para dentro da fenda.
      3. A extremidade do tubo é fixada para evitar que o rato se levante e saia do tubo.
      4. O dedo indicador e o polegar estabilizam a perna do rato.
3. Retirada de sangue
   1. O cabelo é removido do aspecto lateral da perna do hock para o sufoco. Isso pode ser feito arrancando, barbeando ou usando um creme depilatório.
   2. Uma vez que o cabelo tenha sido removido, uma pequena quantidade de pomada é aplicada e espalhada em uma camada muito fina na área sem pelos.
   3. O torniquete é aplicado o mais rápido possível e apertado.
   4. O vaso safeno que atravessa a superfície externa da perna do joelho até o tornozelo começará a encher e será levantado e fácil de visualizar.
   5. A agulha é mantida perpendicular à superfície da pele diretamente sobre o vaso sanguíneo. Perfure o vaso. Tenha cuidado para não inserir a agulha profundamente na perna, para evitar perfurar o músculo ou bater osso.
   6. O sangue subirá na superfície da perna para coleta com o tubo hematócrito.
   7. Uma vez coletado o sangue, solte o torniquete e aplique pressão sobre a punção para hemostasia.
   8. Uma vez que o sangramento tenha parado, remova o animal da contenção e devolva-o para a gaiola.

Figura 3. Veia safena sangra em camundongos.

4. Veia femoral para ratos

1. Equipamento
   1. O sangue é coletado em um tubo hematócrito.
   2. A pomada antibiótica tripla é necessária para criar uma barreira entre a pele/cabelo e a gota de sangue.
   3. Uma agulha calibre 22 é usada para perfurar a veia.
   4. Um cortador de cabelo pequeno e portátil com aproximadamente uma lâmina de largura de 1" é usado para cortar o cabelo da perna.
2. Restrição
   1. Os ratos são contidos usando um cone de contenção de plástico transparente e flexível.
   2. Os cones plásticos são medidos contra o comprimento do corpo e um orifício oval cortado no nível da coxa. O cone é cortado de tal forma que a perna traseira pode ser exteriorizada com acesso à veia.
3. Retirada de sangue
   1. O cabelo é raspado da superfície interna da perna da virilha até o joelho.
   2. A pomada antibiótica tripla é aplicada em uma camada fina no local da punção.
   3. A pessoa de contenção oclui a veia e segura o rato com a superfície interna da perna voltada para o flebotomista.
   4. Use a agulha para perfurar a veia. A agulha é mantida perpendicular ao vaso sanguíneo e a punção é feita diretamente na veia.
   5. A punção é feita o mais próximo possível do joelho, permitindo uma amostragem adicional anterior ao primeiro local de coleta de sangue.
   6. A nave é superficial. Portanto, a profundidade da punção não deve ser mais profunda do que o comprimento do bisel da agulha.
   7. Para auxiliar o fluxo sanguíneo, posicione o rato com a perna mais baixa que o coração.
   8. Colete o sangue nos tubos hematócritos enquanto ele se encolhia na superfície da pele.
   9. Solte a pressão na perna e aplique pressão no local da punção para alcançar hemostasia.

Figura 4. Veia femoral sangra em ratos.