Inicie o protocolo preparando o ensaio de cisalhamento do meio de fluxo viscoso. Para fazer isso, pré-aqueça o meio de cultura base por cerca de 10 a 20 minutos a 60 a 70 graus Celsius usando uma agitação magnética ou placa quente. Ao agitar continuamente o meio, adicione suavemente metilcelulose para ajudar as partículas de metilcelulose a se dispersarem rapidamente sem coagular.
Permita que esse processo continue por aproximadamente 15 a 24 horas para garantir uma mistura homogênea clara de meios e celulose. Para configurar o aparelho de cisalhamento, conecte uma junta de borracha ao caminho de fluxo para fixar a conexão entre a câmara de fluxo e a placa de Petri e garantir um fluxo uniforme controlado de células individuais. A junta de borracha vem em diferentes tamanhos, dependendo do perfil de fluxo desejado e da área de observação.
Em seguida, monta-se o sistema de ensaio de cisalhamento composto por seringas duplas de 60 ou 100 mililitros conectadas a uma bomba de seringa programável para infusão e retirada do meio de cultura viscoso. Encha uma seringa com o meio de fluxo viscoso preparado e fixe a seringa cheia à sua respectiva localização na bomba de seringa. Em seguida, coloque uma seringa vazia no outro local da seringa na bomba de seringa.
Usando conectores de tubulação e tubulação de 1/16 polegada, conecte ambas as seringas à câmara de fluxo. Programe a bomba para infundir e retirar um determinado volume de fluido a uma taxa designada e selecione as seringas correspondentes. Um programa de exemplo é mostrado na tela.
Aspirar o meio de cultura celular da placa de Petri para preparar o cisalhamento. Em seguida, insira e fixe a câmara de fluxo com a junta de borracha na placa de Petri que contém as células anexadas. Coloque a câmara de fluxo microfluídica encaixada com as células na placa em um microscópio invertido conectado a um monitor de exibição.
A configuração agora está pronta para aplicar tensão de cisalhamento de fluido em uma única célula e monitorar opticamente a deformação celular resultante.
