Instale o conjunto de perfusão na unidade de acordo com o protocolo do fabricante. Dentro de uma coifa, anexe um chip fluídico vazio a ele e adicione meio SFM-34 suplementado com citocina para preencher ambos os reservatórios em condições estéreis. Transfira a unidade fluídica para a incubadora, conectando-a à bomba para remoção de bolhas e calibração.
Remova cuidadosamente a unidade fluídica com o conjunto conectado da incubadora e transfira-a para o exaustor junto com os cavacos que contêm as células. Aperte a tubulação em ambos os lados do chip de teste. Remova o tubo fixado do chip de teste e conecte o chip que contém as células ao tubo.
Depois de remover ou abrir as abraçadeiras, transfira o sistema para a incubadora e conecte a bomba de ar à unidade fluídica. Retire a unidade fluídica da bomba e mova-a para o capô. Aperte a tubulação em ambos os lados do cavaco e remova a tubulação dos reservatórios no chip.
Depois de remover suavemente o meio do chip, lave as células com Dulbecco's Phosphate-Buffered Saline ou DPBS. Adicione 150 microlitros de tampão de dissociação e incube por três minutos a 37 graus Celsius. Quando as células estiverem destacadas, colete o tampão de dissociação de um reservatório e lave o canal uma vez com DPBS.
Lave o reservatório com o tampão de lavagem para coletar as células restantes do chip. Finalmente, adicione um mililitro de tampão de lavagem às células coletadas antes de usar 10 microlitros para contar as células. Antes da estimulação, as células apresentavam orientação aleatória, mas com a estimulação, reorientavam-se paralelamente à direção do fluxo.
O perfil de expressão de CD34 de células cultivadas sob fluxo por cinco dias e a porcentagem de células CD34 positivas retiradas do canal fluídico mostraram a eficácia do protocolo.
