Preparação de conjugados de anticorpos QDNB usando o método de evaporação de emulsão em uma etapa

Para começar, adicione 100 microlitros de nanoesferas QD preparadas a 200 microlitros de tampão fosfato. Em seguida, adicione seis microlitros de EDC. Depois disso, incube a mistura por 30 minutos em temperatura ambiente em um misturador rotativo.

Centrifugar a mistura a 13 523 g durante 10 minutos à temperatura ambiente e rejeitar o sobrenadante. Em seguida, adicione 100 microlitros de tampão fosfato ao precipitado. Cobrir o tubo com a tampa e mergulhá-lo no banho-maria ultrassónico operacional até que o precipitado esteja totalmente disperso.

Disperse 100 microgramas de anticorpo em 200 microlitros de tampão fosfato e adicione a suspensão de nanoesferas QD ativada à solução de anticorpo. Incube a mistura em temperatura ambiente por 30 minutos com rotação contínua. Em seguida, remover o excesso de anticorpos por centrifugação a 6.010 g durante cinco minutos à temperatura ambiente e eliminar cuidadosamente o sobrenadante.

Para bloquear as nanoesferas, adicione 200 microlitros de solução de caseína a 1% ao resíduo. Cubra o tubo com sua tampa e mergulhe-o no banho-maria ultrassônico operacional até que o resíduo esteja totalmente disperso. Incubar a mistura à temperatura ambiente durante duas horas com rotação contínua.

Adicione 100 microlitros de solução conservante à mistura e armazene a quatro graus Celsius para uso posterior.