Ensaio de sangue total com coestimulação dupla para análise específica do antígeno da imunidade do hospedeiro a patógenos fúngicos e virais

Nossa pesquisa se concentra no monitoramento imunológico de pacientes na unidade de terapia intensiva. Alguns pacientes desenvolvem pneumonia viral grave durante a ventilação mecânica. Isolamos a causa dos vírus, mas também caracterizamos a resposta imune local e sistêmica usando o protocolo apresentado neste vídeo para identificar fatores de risco imunológicos.

Os ensaios tradicionais de células T antígenos específicos baseados em células mononucleares isoladas são altamente suscetíveis a fatores de confusão pré-analíticos, consomem muito tempo e recursos e requerem grandes quantidades de sangue. Isso apresenta sérias limitações à implementação de ensaios de células T específicas para antígenos na pesquisa clínica ou no uso de rotina clínica como biomarcadores prognósticos ou diagnósticos. Apresentamos um protocolo de imunoensaio versátil, que acomoda várias leituras a jusante de apenas 250 micros de sangue por estímulo.

Isso permite aplicações, mesmo quando esse volume é limitado ou vários antígenos precisam ser rastreados. Além disso, nosso ensaio é fácil de executar e passível de vários patógenos. Além de sua versatilidade e do baixo volume de sangue necessário, nosso protocolo foi usado como ambiente de estimulação que foi completa e especificamente otimizado para respostas de células T auxiliares induzidas por antígenos.

Isso foi alcançado por meio da estimulação dual core, o que também torna o protocolo mais robusto em relação a fatores de confusão, como farmacoterapia imunossupressora ou atrasos pré-analíticos. Estamos usando este protocolo para monitoramento imunológico de pacientes com pneumonia viral associada à ventilação. Nossos colaboradores em Wuerzburg e Houston estão trabalhando em uma tradução clínica de imunoensaios específicos para citomegalovírus.

Além disso, eles estão usando este protocolo para estudos sobre imunopatogênese fúngica e estudos de imunoterapia pré-clínica em modelos de camundongos para infecções oportunistas.