Hibridização de células bacterianas com uma sonda de oligonucleotídeo marcada com um fluoróforo usando hibridização in situ de fluorescência (FISH)

Para começar, pegue células bacterianas fixadas em paraformaldeído. Centrifugar as células a 14 000 x g durante 10 minutos. Em seguida, remova o sobrenadante.

Ressuspenda o pellet em 100 microlitros de etanol de grau analítico a 96% e incube por um minuto em temperatura ambiente. Repita a centrifugação por cinco minutos, depois remova o etanol e seque ao ar o pellet da célula. Agora hibridize as células em uma solução contendo oligonucleotídeo marcado com fluorescência por três horas a 46 a graus Celsius.

Imediatamente após a hibridização, centrifugue as amostras em um rotor pré-aquecido a 46 graus Celsius por 15 minutos na temperatura máxima permitida. Em seguida, lave as amostras em um tampão com rigor adequado por 15 minutos a 48 graus Celsius. Após centrifugar a amostra, mais uma vez, lave as células com 500 microlitros de PBS gelado.

Ressuspenda-os em 20 microlitros de PBS e armazene-os a quatro graus Celsius até o uso posterior.