OKB e JRW escreveu o manuscrito. Este trabalho foi financiado pela CIHR conceder MOP 74.711 (para JRW).

1. Equipamentos e quarto Set Up: <ol><li> O aparelho para a sociabilidade Crawley e preferência por teste de novidade social é composta retangular, caixa de três câmaras. Cada câmara é de 19 x 45 cm e as barreiras divisórias são feitas de acrílico transparente, com uma seção do meio aberto, que permite o acesso livre para cada câmara. </li><li> Use duas copo-like, idênticos fio recipientes com tampas removíveis que grande o suficiente para segurar um mouse. Estes são colocados verticalmente no interior do aparelho, um em cada câmara lateral, e irá conter o mouse ingênuo / desconhecido. Cada recipiente é composto de fios de metal para permitir a troca de ar entre o interior eo exterior do cilindro, mas pequena o suficiente para impedir direta interações físicas entre um animal no interior com um do lado de fora. </li><li> Testes comportamentais deve ser realizada 9h00 - 18:00. </li><li> Geral iluminação da sala é de 650 lux. </li><li> Empregam 6,0 Observer (Noldus) programa (ou uma alternativa adequada) para monitorar e registrar a observação e acompanhamento parâmetros, mencionados na secção 4.3. </li><li> Depois de cada teste, limpe todas as câmaras com etanol 70% (entre camundongos) e depois com Clidox 01:05:01 (entre as gaiolas) para evitar viés cue olfativo e para garantir a desinfecção adequada, respectivamente. </li><li> A pessoa que faz a observação tem de ser pelo menos 2 metros de distância do aparelho. </li></ol> 2. Preparação dos animais: <ol><li> Casa 3-5 ratos por gaiola em uma sala com um 12 horas de ciclo claro / escuro (luzes acesas às 07:00) com acesso ad libitum à água e comida, de acordo com normas e requisitos de locais de orientação Comitê Animal Care e protocolos. </li><li> Transferência de todas as gaiolas de camundongos para a sala comportamentais 30 minutos antes do primeiro julgamento começa. </li><li> Existem duas classes de rato necessário para este experimento, uma que atua como um controle de ingênuo, ou animal &quot;unfamiliarized&quot; e que é o assunto de teste. Para o mouse controlar o uso de um mouse do mesmo fundo (geralmente C57BL6), idade (geralmente 8-12 semanas de idade), sexo e peso, sem qualquer contato prévio (não littermates) com o mouse assunto. Dois ratos de controle são necessárias por experiência, um é usado para a sessão I e outra para a sessão II. Os ratos mesmo controle pode ser utilizado entre os ensaios. </li></ol> 3. Habituação (adaptação): <ol><li> Isolar os compartimentos direita e esquerda, usando as paredes Plexiglass divisão. </li><li> Lugar copos vazios fio de contenção no meio da câmara de direito e esquerdo (um por cada site). </li><li> Posicione o mouse assunto no centro da câmara de meio para a adaptação. </li><li> Habituar por 5 minutos. </li></ol> 4. Aspect Afiliação social do Test (sessão I): <ol><li> Coloque um dos ratos controle (&quot;Stranger 1&quot;) dentro de um copo de contenção fio que está localizado em uma das câmaras laterais. A colocação de um estranho no lado esquerdo ou direito da câmara é sistematicamente alterada entre ensaios. </li><li> Remover as barreiras entre os compartimentos, para permitir o acesso livre para o mouse sujeitos a explorar cada uma das três câmaras. </li><li> Imediatamente, começar a monitorar e registrar os seguintes parâmetros: <ol class="lalpha"><li> duração e </li><li> número de diretos (ativos) de contactos entre o mouse ea carcaça assunto xícara de contenção ou não da habitação a Stranger um mouse, para cada câmara individualmente. Contato direto entre o mouse assunto eo cálice de contenção, ou alongamento do corpo do mouse em uma área sujeita 3-5 cm ao redor do copo é contado como um contato ativo; </li><li> duração e </li><li> número de outros comportamentos pelo mouse assunto em cada compartimento, incluindo caminhada, auto-limpeza, a falta de quaisquer movimentos do corpo por mais de 5 segundos (&quot;congelamento&quot;), bem como comportamento incomum, como saltar de comportamento repetitivo, etc; </li><li> duração e </li><li> número de entradas para cada compartimento. O rato é considerado na câmara quando a sua cabeça e quatro patas entraram na câmara. </li></ol></li><li> A duração da sessão I é de 10 minutos. </li></ol> 5. Sessão Novidade / preferência social do Teste (Session II): <ol><li> Coloque um rato segundo controle (&quot;Stranger 2&quot;) dentro de um copo idêntico fio de contenção na câmara lado oposto (que tinha sido vazia durante a Sessão I). Monitorar os mesmos parâmetros descritos no item 4.3, diferenciando os comportamentos entre o mouse assunto na presença de um estranho comparado com Estranho 2. </li><li> A duração da sessão II é de 10 minutos. </li></ol> 6. Análise estatística: <ol><li> Usando o programa Origin 6.0 (ou uma alternativa adequada) analisar os seguintes parâmetros, usando os dados gravados: <ol class="lalpha"><li> o número total de contatos e </li><li> duração total de contactos entre mous experimentale contenção e vazio vs copo ou xícara Estranho habitação 1 (em sessão I), ou entre rato experimental ea carcaça copo Estranho um Estranho vs 2 (em sessão II); </li><li> duração média por contato; </li><li> número total ea duração de outros comportamentos (congelamento, self-grooming, a pé) </li><li> tempo total gasto pelo mouse assunto em cada compartimento. </li></ol></li><li> Analisar as diferenças significativas para cada um dos parâmetros acima referidos, através da comparação dos grupos: <ol class="lalpha"><li> &quot;Empty&quot; contenção copo vs &quot;Stranger 1&quot; para um tipo selvagem (WT) sujeito </li><li> &quot;Empty&quot; contenção copo vs &quot;Stranger 1&quot; para o mouse experimental (por exemplo, um nocaute, camundongo transgênico ou tratados com o fármaco, etc.) </li><li> &quot;Stranger 1&quot; vs &quot;Stranger 2&quot; para um assunto WT </li><li> &quot;Stranger 1&quot; vs &quot;Stranger 2&quot; para o mouse experimental (knockout, transgênicos, ou tratados com o fármaco, etc.) </li></ol></li><li> Apresentar cada conjunto de dados dos parâmetros acima mencionados como Sessão I: indivíduos WT e experimental; Sessão II: WT e sujeitos experimentais, como mostrado na Figura 1 (A e B) e 2 (A e B), respectivamente. </li></ol> Também é aconselhável levar em consideração outros parâmetros, o que ajuda na padronização deste teste, como experiência anterior no reconhecimento de padrões de mouse específico de comportamento, como sniffing, grooming, esfregando, lutando, a montagem, que pode ser largamente dependente da observação pessoal e subjetiva . A pessoa que atua como o gravador dos parâmetros comportamentais durante o teste deve ser cego para as condições genótipo ou tratamento e informação descodificada depois. 7. Resultados representativos: Um exemplo das duas etapas do teste interação social é mostrado nas Figuras 1 e 2. A primeira sessão do teste permite a estimativa de afiliação social e motivação do mouse assunto. Nesta parte do teste, o rato estranho foi fechado em um copo de arame circular que permitiu contato com nariz, mas impediu a luta entre ratos. Estas condições garantem que as abordagens sociais são iniciadas pelo mouse e são sujeitos de investigação apenas, sem contato físico direto. O mouse tem a opção de passar mais tempo ao redor do copo de contenção com o mouse estranho ou para evitar qualquer contato movendo para o compartimento com o copo vazio. Outros parâmetros, como o número de contatos individuais, pode ser usado em gastos adicionais para a duração próximo ao mouse estranho. Normalmente, um animal do tipo selvagem vai gastar muito mais tempo no compartimento com um estranho em relação ao compartimento com o copo vazio (Figura 1A), indicando sociabilidade normal, motivação social e filiação. Em camundongos knockout GSK-3α, por exemplo, não existem diferenças significativas entre o tempo gasto com o copo vazio em comparação com o copo contendo um estranho (Figura 1B), indicando sociabilidade prejudicada nestas modelo animal 6. A segunda sessão do teste foi concebido para estimar a novidade social e memória social. Nesta parte, o mouse tem um tema de livre escolha entre o primeiro, já investigou mouse, desconhecido (Estranho 1), e um mouse romance desconhecido (Estranho 2). Normalmente, um animal WT recorda o seu contato prévio com um estranho, e, nesta sessão, tende a passar mais tempo com o mouse recém-encontrado (Estranho 2), indicando memória social intacta e predileção por novas experiências (Figura 2A). Ao contrário do tipo selvagem camundongos, GSK-3α animais mutantes não mostram preferência pela câmara contendo um rato recém-introduzidas (Estranho 2) através de uma câmara contendo um rato agora familiar (Estranho 1) em sessão II (Figura 2B). Comportamento indiferente dos camundongos KO neste teste é um indicativo de diminuição da motivação social e novidade. <img src="/files/ftp_upload/2473/2473fig1.jpg" alt="Figura 1" /> . Figura 1 Sessão I: A inserção social e sociabilidade. Tempo médio de tempo (± SEM) na câmara com o estranho (&quot;lado estranho&quot;) em comparação com a câmara oposta (&quot;lado vazio&quot;). Ao contrário dos machos WT (A), KO (B) os animais não conseguiram demonstrar uma preferência por proximidade social gastando mesmo tempo em ambas as câmaras. *** P ≤ 0,0001 no grupo WT. <img src="/files/ftp_upload/2473/2473fig2.jpg" alt="Figura 2" /> Figura 2 Sessão II:. Memória social e da novidade. A duração média de tempo (± SEM) na câmara com o mouse desconhecido desde a fase de sociabilidade (&quot;Stranger 1&quot;) e na câmara oposta com um novo mouse desconhecido (&quot;Stranger 2&quot;). Ao contrário dos machos WT (A), KO (B) os animais não conseguiram demonstrar uma preferência por novidade sociais gastando mesmo tempo em ambas as câmaras. *** P ≤ 0,0001 no grupo WT.

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Não há conflitos de interesse declarados.

Mus musculus é uma espécie social que se engaja em altos níveis de interações sociais recíprocas, comunais comportamentos de nidificação, sexual e paternidade, perfume territorial marcação e 10/08 agressiva comportamentos. Vários testes foram desenvolvidos para examinar comportamento social em ratos (revisto em 3). Aqui, apresentamos um teste amplamente utilizado para avaliar a sociabilidade em camundongos. Sociabilidade Crawley e preferência por teste de novidade social foi originalmente desenvolvido pela Crawley e colegas 7, 11. Existem várias vantagens para o paradigma três câmaras, que melhoram a confiabilidade dos dados para análise de sociabilidade, inserção social, memória social e preferência, usando procedimentos semelhantes. A especificidade principal deste teste é o projeto em que um mouse, anteriormente unencountered pelo animal assunto, é colocado sob um copo de arame e incapaz de se mover livremente. Isso evita que o contato físico direto, eliminando luta e / ou comportamento agressivo, mas permite interações sensoriais (olfato, visão, audição, paladar). Sob essas condições, o rato experimental inicia e encerra qualquer interações, tendo sempre uma escolha entre rato desconhecido vs recipiente vazio (na sessão 1), ou entre rato familiar (Estranho 1) vs o mouse romance (Estranho 2). Por exemplo, em uma câmara de testes de interação social, o mouse assunto é exposto a um estranho na mesma câmara, e uma vez que tanto os ratos são capazes de mover-se livremente o contato ativo acima física tende a ser dominante e não podem ser eliminados. O aparelho três câmaras é muito maior do que um dispositivo de câmara típico único, que permite que o mouse sujeitos a permanecer na proximidade ou mover longe do rato Stranger. Assim, o nível de estresse do teste de sociabilidade Crawley é baixa e principalmente causada por colocar o mouse em um ambiente experimental romance, que permite a repetição do teste ao longo do tempo, por exemplo, em diferentes idades da coorte do mouse mesmo: adultos vs juvenil. Ao comparar um grupo de jovens animais com o mesmo grupo, mas mais velhos, é possível acompanhar e discriminar entre prejuízo no funcionamento social vs memória de reconhecimento social e / ou deficiências cognitivas, que pode ser observado na Sessão 2, e estar relacionada com a idade fisiologia dependente. Este teste é relativamente demorado (~ 40 minutos por mouse), que é uma desvantagem. No entanto, vários repertórios de parâmetros específicos podem ser monitorados e recodificado (manualmente e / ou vídeo), permitindo a análise robusta. Por exemplo, alguns dos parâmetros adicionais, tais como o congelamento e / ou auto-grooming comportamento, pode indicar aumento da ansiedade e diminuição da motivação para o comportamento social. Usando o mesmo protocolo, os ratos podem ser testadas novamente no dia seguinte com o mesmo rato Estranho 1 a descartar um efeito da ansiedade social. Parâmetros adicionais (como o chocalho da cauda, ​​morder o cálice de arame, onde está localizado um Estranho) pode ser útil em distinguir um comportamento agressivo contra facilidade incomum para o animal romance. Ansiedade observados podem ser devido à adaptação inadequada dos ratos para a sala experimental, a luz em demasia, a saúde do mouse pobres, ou como resultado da modificação genética e / ou neofobia (em alguns modelos KO). Além disso, a habituação prejudicada pode ser interpretado como um déficit cognitivo, e podem afetar os resultados da segunda sessão. Antes de submeter camundongos para este teste, é importante para os animais sujeitos a saúde geral e exames neurológicos, incluindo a temperatura corporal e peso, exame casaco, e uma série de exames seguintes reflexos: Whisker, Righting, Ear Twitch, atingindo e estridentes (Key descrita em 12-15). Adicional testes comportamentais podem ser úteis para discriminar respostas específicas. Um aumento do número de contatos e / ou um aumento na duração total de contatos ativa talvez associada com o comportamento hiperativo de manchas de mouse específico, que pode ser confirmado usando um teste de campo aberto (para medir a atividade locomotora). Duração reduzida e / ou número de contatos pode estar associada com depressão e / ou ansiedade-como o comportamento, o que pode ser avaliado usando FST, TST ou EPM, zero labirinto, os testes de claro / escuro, respectivamente (descrito em 6, 13 , 15). Uma vez que condições adequadas são aplicadas e as diferenças significativas observadas, há uma exigência para realizar exames de seguimento, a fim de confirmar os achados. O olfato desempenha um papel fundamental no reconhecimento social em roedores, uma vez que tanto anosmia induzida quimicamente ou remoção dos blocos individuais de reconhecimento órgão vomeronasal 16, 17. Camundongos tendem a cheirar um odor romance e então rapidamente se acostumar a sua novidade. O teste de bulbo olfatório pode ser usado para essa finalidade (descrita em 6, 7). Há também modificações e uso alternativo de três compartimentos teste de sociabilidade de câmara, tais como estimativa do comportamento materno, ao examinar o tempopassou por uma fêmea assunto proximal a um copo contendo seus filhotes (refletindo motivação materna), bem como a motivação sexual, pela avaliação da resposta de um teste masculino / feminino para um lugar feminino / masculino em uma xícara de estranho na sessão 1 7, 11. Outros testes podem ser usados ​​para analisar a sociabilidade em camundongos usando abordagens alternativas / paradigmas, como a interação social na gaiola e / ou em um ambiente de romance (um câmara de ensaios de interação social), residente intruso, teste da partição, teste de abordagem social , interação social recíproca, etc, (descrito em 3, 18). Vocalizações nas faixas de ultra-som e sonoros, visuais, gustativas e táteis modalidades também podem contribuir para a comunicação de informação e vínculo social (revisto em 19). Sociabilidade prejudicada e comportamento social desregulado tem sido apontada como um marco para muitos transtornos psiquiátricos. Por exemplo, transtorno do espectro do autismo e esquizofrenia são ambos caracterizados por défices marcados na cognição social e comportamento social 20, e interrupções do resultado das relações sociais em um risco aumentado de depressão 21. Assim, o ensaio descrito aqui pode ser usado em modelos animais das condições acima mencionadas. Além disso, este ensaio é aplicável para avaliar os efeitos potenciais de compostos farmacológicos sobre a sociabilidade (revisto em 3, 22-24).

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		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Ethanol 70% (commercial Alcohols)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>MSH</td>
<td>19901</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Clidox 1:5:1 Base Activator</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Pharmacal</td>
<td> 96130F 95130F</td>
<td>1 part Base to 5 parts water to 1 part Activator</td>
</tr>		</tbody>
		</table>
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assessment of social interaction behaviors

Interações sociais são um componente fundamental e adaptativa da biologia de várias espécies. Reconhecimento social é fundamental para a estrutura e estabilidade das redes e relações que definem as sociedades. Para os animais, como ratos, o reconhecimento de coespecíficos pode ser importante para manter a hierarquia social e para a escolha do companheiro 1. Uma variedade de distúrbios neuropsiquiátricos são caracterizadas por interrupções no comportamento social e reconhecimento social, incluindo depressão, distúrbios do espectro do autismo, transtorno bipolar, transtorno obsessivo-compulsivo e esquizofrenia. Estudos dos seres humanos, bem como modelos animais (por exemplo, Drosophila melanogaster, Caenorhabditis elegans, Mus musculus, Rattus norvegicus) identificaram genes envolvidos na regulação do comportamento social 2. Para avaliar a sociabilidade em modelos animais, vários testes comportamentais têm sido desenvolvidos (revisto em 3). Integrativa de pesquisa em modelos animais e testes apropriados para o comportamento social pode levar ao desenvolvimento de melhores tratamentos para psicopatologias social. O teste de paradigma três câmaras conhecido como sociabilidade Crawley e preferência por novidade protocolo social tem sido empregada com sucesso para estudar filiação social e memória social em várias linhas puras e rato mutante (por exemplo, 4-7). O principal princípio deste teste baseia-se na livre escolha por um rato sujeitos a passar algum tempo em qualquer um dos três compartimentos caixa durante duas sessões experimentais, incluindo contato indireto com um ou dois ratos com o qual é desconhecido. Para quantificar as tendências sociais do mouse experimental, as principais tarefas são para medir a) o tempo gasto com um romance conspecific e b) preferência por um romance contra um conspecific familiar. Assim, o desenho experimental deste teste permite a avaliação de dois aspectos críticos, mas distinguíveis de comportamento social, tais como filiação social / motivação, bem como a memória social e da novidade. &quot;Sociabilidade&quot; neste caso é definido como a propensão de gastar tempo com outro mouse, em relação ao tempo gasto sozinho em uma câmara idêntica, mas vazio 7. &quot;A preferência por novidade social&quot; é definido como a propensão a gastar tempo com um rato anteriormente unencountered ao invés de com um mouse familiares 7. Este teste fornece resultados robustos, que depois devem ser cuidadosamente analisados, interpretados e apoiado / confirmado por testes de sociabilidade alternativa. Além de aplicativos específicos, teste de sociabilidade Crawley pode ser incluído como um componente importante da tela de comportamento geral de ratos mutantes.

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Assessment of Social Interaction Behaviors

Aqui nós descrevemos um protocolo detalhado para o exame de sociabilidade em camundongos usando sociabilidade Crawley e preferência por teste de novidade social. Descrevemos as vantagens e aplicações possíveis para esse procedimento, incluindo detalhes críticos importantes para a correta interpretação dos resultados.

Avaliação de comportamentos de interação social

Social interactions are a fundamental and adaptive component of the biology of numerous species. Social recognition is critical for the structure and ...

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Research

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Neuroscience

91.8K visualizações.  Mount Sinai Hospital. Aqui nós descrevemos um protocolo detalhado para o exame de sociabilidade em camundongos usando sociabilidade Crawley e preferência por teste de novidade social. Descrevemos as vantagens e aplicações possíveis para esse procedimento, incluindo detalhes críticos importantes para a correta interpretação dos resultados.