<ol><li> Uma cultura saudável, ampliando exponencialmente é lavado com PBS para remover a mídia residual que poderiam saciar a reação Tripsina. </li><li> Aqueceu 0,05% Tripsina-EDTA é adicionado para cobrir as células, ea placa permitido incubar por até 5 minutos em temperatura ambiente. Durante esse tempo, as células podem ser observadas de arredondamento, e as colônias de elevação da superfície da placa. </li><li> Pipetagem repetida gentil irá remover células e de colônias a partir da superfície da placa. </li><li> Tripsinizados células são colocadas em um tubo cônico contendo padrão pré-aquecido media CTeh para saciar a tripsina restantes, e então girou. </li><li> Células são ressuspendidas meios de crescimento em uma concentração de aproximadamente um milhão de células em um mL de mídia. </li><li> Depois que as células sejam adequadamente ressuspenso, Media gelada congelamento é adicionado ao volume igual. </li><li> Suspensões de células são bem misturados, aliquotado em frascos de congelamento, e permitiu a lenta congelamento a-80C durante 24 horas. </li><li> Células congeladas pode, então, mudou-se para a fase de vapor de nitrogênio líquido para o armazenamento de longo prazo, ou permanecer em temperatura de -80 por aproximadamente seis meses. </li></ol><p> Nota: como uma alíquota congelado a uma concentração de 106 células / ml é suficiente para ressuscitar uma cultura em uma placa de 10cm. </p>

<ol>
	<li>Cowan, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Derivation+of+Embryonic+Stem+Cells+from+Human+Blastocysts.">Derivation of Embryonic Stem Cells from Human Blastocysts.</a> , 1650-1656 (2004).</li></ol>

<p> A técnica que descrevemos para congelar linhas MATIZ celular funciona bem para armazenar de forma eficiente e ressuscitar MATIZ linhas celulares e também quaisquer células de mamíferos de interesse. Congelar uma pequena proporção de células em cada passagem é uma consideração importante quando se trabalha com linhagens de células-tronco embrionárias humanas, como anormalidades do cariótipo podem surgir e as células anormais podem rapidamente assumir a linha. Assim, tendo congelado racha em cada passagem, além de grandes banco...

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>HuES Medium</td>
<td>medium</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>For aq total of 651.5 ml, add: 500 ml KO-DMEM + 6.5 ml PenStrep + 6.5 ml L- Glut + 6.5 ml NEAA 6.5 ml + beta-mercaptoethanol 0.6ul (14.3 M stock) + 65 ml Serum Replacement + 65 ml Plasmanate +  0.65 ml bFGF2 (~10 ng/mL final)
</td>
</tr>
<tr>
<td>Freezing Medium</td>
<td>medium</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>80% FCS (fetal calf serum) + 20% DMSO (dimethyl sulphoxide). Stored at 4C. </td>
</tr>		</tbody>
		</table>
		</div>
			<div>
					</div>

freezing human es cells

<p class="jove_content">Aqui demonstramos como nosso laboratório congela MATIZ embrionárias humanas linhas de células estaminais. Uma cultura saudável, ampliando exponencialmente é lavado com PBS para remover a mídia residual que poderiam saciar a reação Tripsina. Aqueceu 0,05% Tripsina-EDTA é adicionado para cobrir as células, ea placa permitido incubar por até 5 minutos em temperatura ambiente. Durante esse tempo, as células podem ser observadas de arredondamento, e as colônias de elevação da superfície da placa. Pipetagem repetida gentil irá remover células e de colônias a partir da superfície da placa. Tripsinizados células são colocadas em um tubo cônico contendo padrão pré-aquecido media CTeh para saciar a tripsina restantes, e então girou. Células são ressuspendidas meios de crescimento em uma concentração de aproximadamente um milhão de células em um mL de mídia, uma concentração de tal forma que uma alíquota é suficiente para ressuscitar uma cultura em uma placa de 10cm. Depois que as células sejam adequadamente ressuspenso, media gelo frio é adicionado ao volume igual. Suspensões de células são bem misturados, aliquotado em frascos de congelamento, e permitiu a lenta congelamento a-80C durante 24 horas. Células congeladas pode, então, mudou-se para a fase de vapor de nitrogênio líquido para o armazenamento de longo prazo, ou permanecer em temperatura de -80 por aproximadamente seis meses.</p>

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Freezing Human ES Cells

<p class="jove_content">Aqui demonstramos como nosso laboratório congela MATIZ embrionárias humanas linhas de células estaminais.</p>

Congelamento células ES

Here we demonstrate how our lab freezes HuES human embryonic stem cell lines.  A healthy, exponentially expanding culture is washed with PBS to remove ...

Research

JoVE Journal

Biology

14.8K visualizações.  Harvard. Aqui demonstramos como nosso laboratório congela MATIZ embrionárias humanas linhas de células estaminais.