Este protocolo pode ser utilizado para estudar o papel das alterações genéticas ou intervenções farmacológicas na função cardíaca e no fluxo coronariano em idades pós-natais precoces. A principal vantagem dessa técnica é o reconhecimento precoce de cardiopatologias e estudos longitudinais de acompanhamento em hemodinâmica ventricular esquerda e parâmetros de fluxo coronariano em diferentes modelos de camundongos. Estudos ecocardiográficos em camundongos neonatais são tecnicamente desafiadores.
Este protocolo é projetado para estudar o início precoce da doença cardiovascular em camundongos neonatais que podem permitir que os pesquisadores projetem as medidas terapêuticas apropriadas. Comece colocando o gel de ECG nas almofadas de eletrodo da plataforma aquecida. Coloque tiras de folha de alumínio em cima das almofadas do eletrodo para estender a faixa do eletrodo e prendê-las com fita adesiva.
Posteriormente, coloque o gel de ECG em cima das tiras de alumínio. Certifique-se de que o gel sob as tiras de folha de alumínio não seque durante o procedimento. Se isso ocorrer, adicione mais gel para manter a condutividade.
Coloque o filhote anestesiado em decúbito dorsal na plataforma de imagem e prenda o dedo da luva recortado ao redor do nariz do filhote. Coloque as patas em cima das almofadas de folha de alumínio e prenda-as com fita adesiva. Certifique-se de que o circuito elétrico está completo e que o ECG está gravando.
Use dois rolos de gaze para manter o gel de ultrassom no lugar. Coloque uma camada espessa de gel de ultrassom pré-aquecido em cima da parte superior do corpo do filhote. Use uma lâmpada de aquecimento para manter a temperatura corporal normal do filhote.
Realizar ecocardiografia transtorácica usando um instrumento de ecocardiografia equipado com um transdutor de matriz linear a 40 mega-hertz para o modo B e a 32 mega-hertz para Doppler seguindo protocolos de ecocardiografia de camundongos adultos. Coloque o transdutor no suporte com a marca de índice em direção ao ombro direito do filhote. Abaixe o transdutor até que ele esteja em contato com o gel e visualize a via de saída do ventrículo esquerdo no modo B.
Evite colocar pressão excessiva sobre a cavidade torácica do filhote ao colocar o ecotransdutor durante a aquisição da imagem ecocardiográfica. Capture a visão do eixo longo paraesternal do ventrículo esquerdo, da via de saída do ventrículo esquerdo e do átrio esquerdo. Use o modo-M nos folhetos aórticos para medir o diâmetro máximo do átrio esquerdo na N-sístole.
Grave os dados pressionando o botão Cine Store. Gire o transdutor em torno de 90 graus no sentido horário do eixo longo paraesternal para obter a visão do eixo curto paraesternal. Capture a visão do eixo curto paraesternal do ventrículo esquerdo para medir as dimensões da câmara, a espessura da parede, o fluxo aórtico e o fluxo pulmonar.
Coloque a sonda ao nível dos músculos papilares e use o modo-M para medir os diâmetros internos do ventrículo esquerdo e a espessura da parede durante a sístole e a diástole. Grave os dados pressionando o botão Cine Store. Mova o transdutor em direção à base do coração e use o Doppler Colorido para visualizar a artéria pulmonar.
Pressione o Doppler de onda de pulso para quantificar a velocidade de pico de fluxo pulmonar, os perfis de fluxo pulmonar, o tempo de ejeção pulmonar e o tempo de aceleração pulmonar. Grave os dados pressionando o botão Cine Store. Mova o transdutor ainda mais em direção à base e use o Doppler Colorido para visualizar o fluxo aórtico.
Use o Doppler de Onda de Pulso para visualizar o fluxo sanguíneo e medir o tempo de ejeção da aorta. Grave os dados pressionando o botão Cine Store. Para capturar a visão apical de quatro câmaras, coloque a plataforma na posição de Trendelenburg, incline-a para a esquerda e ajuste a sonda para visualizar as quatro câmaras.
Use o Doppler Colorido para visualizar o fluxo sanguíneo e o Doppler de Onda de Pulso na ponta dos folhetos da válvula mitral no centro do orifício da válvula mitral para registrar o fluxo mitral. Grave os dados pressionando o botão Cine Store. Use o Doppler tecidual no lado septal do anel valvar mitral em uma visão de quatro câmaras para medir a velocidade de pico de relaxamento miocárdico no enchimento diastólico inicial e no enchimento diastólico tardio, bem como a velocidade de pico de contração miocárdica sistólica.
Grave os dados pressionando o botão Cine Store. Capture a visão do eixo longo paraesternal modificado para examinar a artéria coronária descendente anterior esquerda. Use uma visão de eixo longo paraesternal modificada, movendo o transdutor lateralmente.
Mova a sonda e use o Doppler Colorido para visualizar a origem da artéria coronária principal esquerda que gera a partir da aorta. Identifique a artéria descendente anterior esquerda que gera a partir da artéria coronária principal esquerda e corre entre a parede anterior do ventrículo esquerdo e a via de saída do ventrículo direito. Nesta posição, meça o fluxo da artéria coronária descendente anterior esquerda pressionando o Doppler de Onda de Pulso.
Grave os dados pressionando o botão Cine Store. Aumente a concentração de isoflurano para 2,5% e aguarde cinco minutos para atingir o fluxo máximo. Grave os dados pressionando o botão Cine Store.
Na visão do eixo longo paraesternal, o modo-M foi utilizado para medir o diâmetro do átrio esquerdo. A visão do eixo curto paraesternal foi utilizada para medir as dimensões da câmara ventricular esquerda e a espessura da parede, o fluxo pulmonar e o fluxo aórtico. A visão apical de quatro câmaras foi utilizada para examinar as velocidades de fluxo sanguíneo através da valva mitral, bem como as velocidades de relaxamento miocárdico e contração no anel valvar mitral.
A visão do eixo longo paraesternal modificada foi utilizada para examinar os parâmetros de fluxo da artéria coronária descendente anterior. Os valores aumentados de velocidade de pico de fluxo coronariano, velocidade média de fluxo coronariano e velocidade / tempo integral cinco minutos após o incremento do isoflurano confirmaram a resposta esperada à hiperemia nos camundongos neonatais. Devido ao pequeno tamanho dos filhotes, é importante manter sua temperatura corporal normal e anexar tiras de papel alumínio aos membros para alcançar os eletrorpais e criar um circuito de ECG.
