This work was supported by funding from the March of Dimes FY12-133 (S.K.E.) and the National Institutes of Health R01HD037831 (S.K.E.). We would like to thank Dr. Deborah Frank for critical review of the manuscript.

NOTA: Todos os procedimentos com animais respeitadas as diretrizes para o cuidado e uso de animais estabelecidos pelo National Institutes of Health. Todos os protocolos foram aprovados pelo Comitê da Universidade de Washington em St. Louis a estudos com animais. NOTA: materiais e equipamentos específicos para este protocolo estão listados Materiais e Equipamentos tabela. 1. Criação de temporizado Feminino Mice <ol><li> Raça fêmeas adultas entre dois e seis meses de idade, em uma janela de tempo de 2 horas com os machos. H reprodução específica não são necessários, desde que estes sejam mantidos consistentes para a totalidade da experiência. </li><li> Confirmar gravidez pela presença de um tampão copulatória. Designar o dia e hora em que a ficha é visto pela primeira vez como o dia de pós-coito 0 (dpc0). Lembre-se da hora específica quando iniciar a gravação de pressão. </li><li> Realizar cirurgias em dpc8-13. A exacta dpc dependerá da estirpe de ratinho. </li><li> Para determinar se um rato está grávida antes da cirurgia, peultra-sonografia rform do abdômen com um transdutor linear de 40 MHz acoplado a um sistema de imagem antes de administrar anestesia. Isto irá permitir a visualização dos sacos gestacionais. Se um sistema de ultra-som não está disponível, utilizar o peso do rato. NOTA: Um ganho de peso de pelo menos 2 g entre dpc0 e dpc8 e distensão do abdome é um bom indicador da gravidez. </li></ol> 2. Telemetry Cirurgia Prep <ol><li> Use um autoclave para esterilizar instrumentos, gazes, cotonetes, campos cirúrgicos, e pontas de pipeta dentro de 24 horas antes da cirurgia. </li><li> Superfície cirurgia limpa com etanol 70%. </li><li> Ligue almofada de aquecimento (especializado para roedores) e talão esterilizador. </li></ol> 3. Telemetry Cirurgia <ol><li> Para anestesia, utilizar 4-5% de isoflurano com uma taxa de fluxo de oxigénio de 1-2 l / min. </li><li> Aguarde até que o rato mostra sinais de anestesia e depois injetar por via subcutânea com buprenorfina (analgésico: 0,1 ml por 20 g). </li><li> Raspar o abdómen do rato a partir do fundo das nervuras para baixo para a bexiga. </li><li> Traga o mouse para a mesa de cirurgia em almofada de aquecimento pré-aquecido, e cobrir os olhos do rato com pomada oftálmica para evitar a secagem. </li><li> Comece a técnica estéril. Calçar luvas estéreis e manter o wrapper como uma superfície estéril em que para colocar os iodo e etanol scrubs. </li><li> Retire o telêmetro a partir do pacote ou soro fisiológico e usar uma pinça estéril, para colocá-lo em gaze estéril. <ol><li> Usar a seringa (fornecido pelo fornecedor telémetro) para encher a ponta do cateter com gel. Suavemente apertar o cateter criando uma pressão negativa suficiente para extrair o gel no interior do cateter. </li></ol></li><li> Coloque uma ponta estéril sobre a pipeta. Pipetar 2 ul de cola cirúrgica e definir a pipeta sobre uma superfície estéril. </li><li> Para limpar o local cirúrgico, limpar a área com iodo e, em seguida, com etanol a 70%. </li><li> Corte um buraco na cobertura cirúrgica grande o suficientepara a área necessária para a incisão e coloque sobre o mouse. </li><li> Realizar uma pitada pé (resposta pedal) para garantir o mouse é completamente anestesiados antes de fazer uma incisão. </li><li> Faça uma pequena incisão na linha média vertical. Em seguida, faça uma incisão semelhante através do músculo parede do corpo subjacente. </li><li> Puxe cuidadosamente o útero fora da cavidade do corpo e localizar o corno uterino contendo a maioria dos filhotes que são viáveis. <ol><li> Opcional - Para além de miRNA, injetar vetor viral na camada muscular do útero antes da inserção de telêmetro. </li></ol></li><li> Faça uma pequena incisão na ponta do corno uterino com três milímetros de corte tesoura primavera ponta. </li><li> Passe o cateter, sem apertar, entre a parede uterina e sacos fetais. Insira o cateter passado vários sacos para reduzir a sua remoção acidental. Certifique-se que os sacos fetais não são perturbados pela inserção. </li><li> Pipetar a cola cirúrgica para o sítio de inserção do telémetro para aderir o cateter para a uchifre terine e impedir o cateter de deslizar para fora da trompa uterina. Espere alguns segundos para a cola para tornar-se rígida, e em seguida, coloque cuidadosamente o útero de volta para dentro da cavidade do corpo. </li><li> Inserir o telémetro na cavidade do corpo no lado oposto do sítio da inserção do cateter. </li><li> Suturar a cavidade do corpo fechado com 6,0 suturas absorvíveis. Em primeiro lugar, fazer um ponto em bolsa e, em seguida, 3-4 pontos individuais. </li><li> Suturar a pele, utilizando a mesma técnica, mas com 6-0 não absorvíveis. </li><li> Dibucaína Swab (analgésico tópico) pomada sobre o local da incisão. </li><li> Injectar subcutaneamente 0,3-0,4 ml de solução salina estéril para ajudar a hidratar o animal. </li><li> Monitorar o animal após a cirurgia até que esteja completamente acordado. Não coloque o mouse de volta em sua gaiola até que ele é capaz de sustentar livremente sua cabeça acima da tabela como certos tipos de roupa de cama pode sufocar um rato pesadamente anestesiado. Para um rato que foi anestesiado para 30-45 min, deve-se esperar the mouse para ser totalmente acordado por 1 hora e 15 min. </li><li> Se a realização de cirurgias adicionais, limpe instrumentos com etanol 70% e talão esterilizar antes da reutilização. </li></ol> 4. recuperação pós-operatória <ol><li> Monitorar diariamente o progresso pós-cirurgia em um log. Catálogo ganho de peso e perda e prestar atenção para letargia, sangramento, ou fechamento incompleto da incisão cirúrgica. <ol><li> Alimente o mouse ração rato amolecida (~ a consistência de purê de maçã) ou recuperação dieta especializada. </li><li> Examine as suturas e se certificar que não são puxados para fora, mas não tente lidar com o mouse excessivamente. </li></ol></li></ol> 5. Telemetry Recording <ol><li> No dia do interesse (pelo menos um de dois a três dias após o mouse se recuperou da cirurgia), coloque um ímã perto do mouse para ligar o telêmetro. Coloque a gaiola do mouse sobre o receptor. A luz no receptor deve ligar se o telêmetro é ativado. </li><li> Calibrar novo Teleme<html> ters com calibrações específicas fabricante fornecido. Especificações de calibração Telemeter reutilizados serão mantidos em software. </li><li> Dentro do software, começar a gravar com o botão direito em &quot;animal&quot; e clique em &quot;iniciar a amostragem, contínuo&quot;, que permite a amostragem em taxas de até 500 Hz. Verifique se o software está definido para salvar e rastrear. NOTA: Quando o ícone do mouse amostragem fica verde, as pressões estão sendo gravadas. Perturbar o mouse durante o parto pode interromper ou alterar o trabalho, por isso observar com cautela. </li><li> Após o parto ou o período de interesse, parar a gravação com o botão direito em &quot;animal&quot; e selecionando &quot;parar as gravações, tudo&quot;. Use um ímã para desligar telêmetro para salvar a vida da bateria, como a bateria telemeter normalmente duram apenas 1,5 meses de gravação contínua. </li><li> Eutanásia o mouse por CO 2 overdose e recuperar o telêmetro. Os filhotes são sacrificados por decapitação. </li></ol>tle &quot;&gt; 6. Telemeter Esterilização <ol><li> Inserir o telémetro numa solução de 1% de detergente enzimática durante a noite em água desionizada à temperatura ambiente. </li><li> Lavar o telêmetro em água deionizada e remover todo o tecido e cola, tomando cuidado para não apertar o cateter. </li><li> Incubar o telémetro em glutaraldeído a 2% durante 24 horas à temperatura ambiente para esterilizar. </li><li> Lavar o telêmetro com solução salina estéril e armazená-lo em solução salina estéril até a próxima implantação ou a ser enviado de volta ao fabricante para ser reformado. Telémetros deve ser renovado se o tecido está localizado no interior do cateter, após a esterilização. Normalmente telémetros pode ser usado 4-5 vezes antes de precisar ser remodelado. </li></ol>

<ol>
	<li>Slattery, M. M., Morrison, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preterm+delivery.">Preterm delivery.</a> Lancet. 360, 1489-1497 (2002).</li><li>Goldenberg, R. L., Culhane, J. F., Iams, J. D., Romero, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epidemiology+and+causes+of+preterm+birth.">Epidemiology and causes of preterm birth.</a> Lancet. 371, 75-84 (2008).</li><li>Keelan, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pharmacological+inhibition+of+inflammatory+pathways+for+the+prevention+of+preterm+birth.">Pharmacological inhibition of inflammatory pathways for the prevention of preterm birth.</a> Journal Of Reproductive Immunology. 88, 176-184 (2011).</li><li>Voltolini, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Understanding+spontaneous+preterm+birth:+from+underlying+mechanisms+to+predictive+and+preventive+interventions.">Understanding spontaneous preterm birth: from underlying mechanisms to predictive and preventive interventions.</a> Reproductive Sciences. 20, 1274-1292 (2013).</li><li>Ratajczak, C. K., Muglia, L. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Insights+into+parturition+biology+from+genetically+altered+mice.">Insights into parturition biology from genetically altered mice.</a> Pediatric research. 64, 581-589 (2008).</li><li>Rajakumar, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Placental+HIF-1+alpha,+HIF-2+alpha,+membrane+and+soluble+VEGF+receptor-1+proteins+are+not+increased+in+normotensive+pregnancies+complicated+by+late-onset+intrauterine+growth+restriction.">Placental HIF-1 alpha, HIF-2 alpha, membrane and soluble VEGF receptor-1 proteins are not increased in normotensive pregnancies complicated by late-onset intrauterine growth restriction.</a> American Journal Of Physiology. Regulatory, Integrative And Comparative Physiology. 293, (2007).</li><li>Whitesall, S. E., Hoff, J. B., Vollmer, A. P., D'Alecy, L. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+simultaneous+measurement+of+mouse+systolic+arterial+blood+pressure+by+radiotelemetry+and+tail-cuff+methods.+American+journal+of+physiology.">Comparison of simultaneous measurement of mouse systolic arterial blood pressure by radiotelemetry and tail-cuff methods. American journal of physiology.</a> Heart And Circulatory Physiology. 286, H2408-H2415 (2004).</li><li>Mackay, L. B., Shi, L. B., Maul, H. .., Maner, W. L., Garfield, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effect+of+bilateral+pelvic+neurectomy+on+cervical+ripening+in+pregnant+rats.">The effect of bilateral pelvic neurectomy on cervical ripening in pregnant rats.</a> Journal Of Perinatal Medicine. 37, 263-269 (2009).</li><li>Pierce, S. L., Kutschke, W., Cabeza, R., England, S. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+measurement+of+intrauterine+pressure+by+telemetry:+a+new+approach+for+studying+parturition+in+mouse+models.">In vivo measurement of intrauterine pressure by telemetry: a new approach for studying parturition in mouse models.</a> Physiol Genomics. 42, 310-316 (2010).</li><li>Imamura, T., Luedke, C. E., Vogt, S. K., Muglia, L. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oxytocin+modulates+the+onset+of+murine+parturition+by+competing+ovarian+and+uterine+effects.">Oxytocin modulates the onset of murine parturition by competing ovarian and uterine effects.</a> American Journal Of Physiology. Regulatory, Integrative And Comparative Physiology. 279, R1061-R1067 (2000).</li><li>McCloskey, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+inwardly+rectifying+K++channel+KIR7.1+controls+uterine+excitability+throughout+pregnancy.">The inwardly rectifying K+ channel KIR7.1 controls uterine excitability throughout pregnancy.</a> EMBO Mol Med. 6 (9), 1161-1174 (2014).</li></ol>

The authors have nothing to disclose.

As investigações sobre a contratilidade do miométrio têm contado com ex vivo medições da tensão muscular. Esta metodologia pode ser útil para testar em estágio inicial de drogas uterotônicas recentemente desenvolvidos que não podem ser administrados aos animais vivos. No entanto, abordagens in vivo são necessários para compreender longitudinalmente a progressão do trabalho de parto. As medições in vivo servir a vários propósitos. Primeiro, eles permitem a captura de uma image...

O nascimento prematuro é a principal causa de morbidade e mortalidade nos países desenvolvidos perinatal; é responsável por 50% de morbidade perinatal e 75% de 1,2 a mortalidade perinatal. Trabalho de parto prematuro é multifacetada e pode ser idiopática. Apesar de muita pesquisa surgiu nas vias moleculares e elétricas transformando o miométrio, de um tecido de repouso em um contrátil um, a fisiopatologia exata do trabalho de parto prematuro permanece indefinida. Endocrine, inflamatório, e regulação de genes têm sido relacionados ao trabalho de parto prematuro 3,4. No entanto, as preocupações éticas limitar a capacidade de realizar pesquisas sobre os mecanismos de trabalho de parto prematuro em seres humanos. Dadas estas limitações, muitos investigadores voltaram-se para os ratos como um sistema modelo com que no estudo da fisiologia de parto. Os ratos têm gestações curta duração de aproximadamente três semanas e pode ser facilmente manipulado geneticamente. Além disso, vários modelos genéticos do rato temfoi desenvolvido para determinar as vias de sinalização que são essenciais para o trabalho 5. Apesar das diferenças fundamentais entre o mouse eo parto humano, ratos e humanos compartilham muitos dos mesmos mecanismos que são essenciais para o trabalho, incluindo a inflamação intra-uterina e infecção 6. Assim, os ratos servir como uma ferramenta valiosa para examinar a atividade uterina. Até à data, o padrão-ouro para medir a contratilidade uterina em camundongos foi ex vivo gravações de tensão isométrica; no entanto, isto é limitado a um ponto de tempo gestacional por experiência e requer a remoção do útero do seu ambiente fisiológico. Outro factor importante é o elevado número de animais necessários para essas investigações. Por último, esta metodologia não permite estudos longitudinais que examinam a indução do trabalho de parto pré-termo e fisiopatologia. Os recentes avanços feitos em dispositivos de telemetria radiométricos usados ​​para estudar a pressão arterial muda 7 em ratos e intpressão rauterine em ratos 8 pediu a questão para saber se a mesma tecnologia pode ser utilizada para estudar alterações na pressão intra-uterina em ratinhos durante a gravidez. Depois de solução de problemas inicial, foi desenvolvido um método com sucesso para medir a indução do parto e progressão em um mouse. Esta abordagem in vivo pode medir a transição do estado de baixa pressão do útero quiescente para o estado de alta pressão indicativa de contrações fortes. Este método também foi capaz de detectar diferenças de pressão significativas entre ratinhos transgénicos com parto comprometida e ratinhos do tipo selvagem, demonstrando o impacto fisiológico da expressão dos genes 9. Este protocolo fornece em tempo real, no método in vivo para estudar a pressão rato uterino durante a gravidez.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="702">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">Name of Material/ Equipment</td>
			<td style="width:105px;">Company</td>
			<td style="width:147px;">Catalog Number</td>
			<td style="width:207px;">Comments/Description</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">Surgical Glue</td>
			<td style="width:105px;">3M Vetbond</td>
			<td style="width:147px;">1469SB</td>
			<td>Tissue Adhesive--stored in Drierite</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">Absorbable 6-0 Sutures</td>
			<td style="width:105px;">Ethicon</td>
			<td style="width:147px;">J212H</td>
			<td>Vicryl</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">Non-absorbable 6-0 Sutures</td>
			<td style="width:105px;">Ethicon</td>
			<td style="width:147px;">8706H</td>
			<td>Prolene</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;">Water Jacket Blanket + Heating Pad</td>
			<td style="width:105px;">Gaymer</td>
			<td style="width:147px;">T/Pump PN 11184-000 Blanket-66N111CC</td>
			<td>Specialized for rodents</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">Bead sterilizer</td>
			<td style="width:105px;">Keller</td>
			<td style="width:147px;">Z378577</td>
			<td>Steri 250 Sterilizer</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">Disecting Microscope</td>
			<td style="width:105px;">Nikon</td>
			<td style="width:147px;">SMZ754</td>
			<td>Fibre optic gooseneck external light source</td>
		</tr>
		<tr height="46">
			<td height="46" style="height:46px;width:245px;">Sterile Surgical Gloves--Latex&#160;</td>
			<td style="width:105px;">Cardinal Health Triflex</td>
			<td style="width:147px;">2D7253</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:245px;">PhysioTel PA-C10 Pressure Transmitter</td>
			<td style="width:105px;">&#160;Data Sciences International</td>
			<td style="width:147px;">270-0135-001</td>
			<td style="width:207px;">TA11PA-C10</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:245px;">Telemeter Reciever</td>
			<td style="width:105px;">&#160;Data Sciences International</td>
			<td style="width:147px;">272-6001-001</td>
			<td style="width:207px;">RPC-1</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:245px;">Dataquest ART 4.3.2 Analysis Platinum</td>
			<td style="width:105px;">&#160;Data Sciences International</td>
			<td style="width:147px;">271-0147-141</td>
			<td>Analysis software</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">Diet Recovery Gel</td>
			<td style="width:105px;">Clear H2O</td>
			<td style="width:147px;">72-01-5022</td>
			<td>Purified Soft Diet for Rodents</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:245px;">Tergazyme</td>
			<td style="width:105px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td>Z273287</td>
			<td>Enzyme detergent</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

intrauterine telemetry to measure mouse contractile pressure in vivo

Um complexo de integração de sinais moleculares e eléctricos é necessário para transformar um útero quiescente para um órgão contráctil no final da gravidez. Apesar da descoberta de reguladores-chave da contractilidade uterina, este processo ainda não está completamente entendido. Os ratinhos transgénicos proporcionar um modelo ideal para estudar o parto. Anteriormente, o único método para estudar a contractilidade uterina no rato foi ex vivo gravações de tensão isométrica, que são sub-óptima por várias razões. O útero tem de ser removido do seu ambiente fisiológico, um campo de investigação tempo limitado é possível, e os ratinhos deve ser sacrificado. O desenvolvimento recente de telemetria radiométrica permitiu longitudinais, as medições em tempo real da pressão intra-uterina in vivo em ratinhos. Aqui, a implantação de um telêmetro intra-uterina para medir as mudanças de pressão no útero de camundongos a partir de meados de gravidez até o parto é descrito. Ao comparar as diferenças de imprensamentos entre o tipo selvagem e ratinhos transgénicos, o impacto fisiológico de um gene de interesse pode ser elucidado. Esta técnica deve acelerar o desenvolvimento de terapias usadas para tratar distúrbios do miométrio durante a gravidez, incluindo o trabalho de parto prematuro.

Em tempo real das pressões intra-uterinos vivo pode ser gravado utilizando um sistema de aquisição de telemetria. Amostragem Pressão emparelhado com gravação simultânea de vídeo do mouse foi usado para capturar o momento exato da entrega de cada filhote e correlacionar o tempo de entrega para a pressão intra-uterina da mãe. Todos os pontos de dados podem ser representados graficamente, em seguida, durante toda a gravação para gerar uma pressão versus tempo trama (Figura 1A).</stron...

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Intrauterine Telemetry to Measure Mouse Contractile Pressure In Vivo

This manuscript provides a protocol for implanting telemeters in the mouse for the purpose of measuring intrauterine pressures during pregnancy.

Telemetria Intrauterine medir Rato contrátil Pressão<em&gt; In Vivo</em

A complex integration of molecular and electrical signals is needed to transform a quiescent uterus into a contractile organ at the end of pregnancy. ...

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Research

JoVE Journal

Medicine

Intrauterine Telemetry to Measure Mouse Contractile Pressure In Vivo

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