Os autores gostariam de agradecer o apoio da Australian National Health and Medical Research Council e da Universidade de Deakin. O trabalho realizado no laboratório da Universidade de Deakin Sensorial foi apoiado pelo Health and Medical Research Council Grant Nacional (1043780) (RSJK) e Horticultura Australia Limited (BS12006) (RSJK).

As seguintes técnicas foram aprovados para uso pelo Comitê de Ética em Pesquisa em Humanos da Universidade Deakin. 1. Demografia e Antropometria <ol><li> Informações demográficas registro de participantes, incluindo a data de nascimento e sexo. </li><li> No início do estudo (e outro estudo aponta se desenho de estudo temporal) ter altura e medidas de peso. Certifique-se que os participantes tenham tirado sapatos, casacos pesados ​​ou outras peças de vestuário, e ter removido todos os itens pesados ​​de seus bolsos. <ol><li> Meça a altura do participante usando um estadiômetro. Medições de registro para o cm mais próximo. </li><li> Pesar os participantes por meio de escalas dedicados. Grave peso para o g mais próximo. </li><li> Calcular IMC usando a equação: peso (kg) / altura 2 (m 2). A partir daí, os participantes são classificados de acordo com os valores de IMC definição padrão; saudável 18,5-25 kg / m 2, excesso de peso 25-30 kg / m 2 ou obesidade &amp; #62; 30 kg / m 2 27. </li></ol></li></ol> As amostras 2. Produzindo para Oral Assessment Threshold Fatty Acid <ol><li> Use leite UHT desnatado como a base para a avaliação do limiar de sabor ácido graxo. O produto pode ser comprado e armazenado a granel, se necessário, e irá manter fechada por até 6 meses ou até que o produto chegou a seu termo. Prepare dois tipos de veículos: veículos com ácidos graxos adicionados e um veículo de controle. O volume das soluções preparadas para o teste dependerá número do participante. O protocolo a seguir fornece valores típicos de 2 participantes. </li><li> Prepare uma solução de leite de base para usar tanto para o controle e veículo de ácidos graxos, colocando 5% w: goma arábica de qualidade alimentar v (por exemplo, 100 g por 2 L de leite) em um copo de 3 L de vidro. Se necessário, a goma de hidrato antes da sua utilização (isto irá variar dependendo do fabricante de goma). </li><li> Adicionar 0,01% w: v EDTA até a goma para prevenir a oxidação (por exemplo, 200 mg por 2 L de leite). </li><li> Alocar aproximadamente 1 litro de leite desnatado por participante (por exemplo., Por 2 participantes, use 2 L de leite) e despeje em copo. </li><li> Usando um misturador de grau laboratorial com tela emulsor, homogeneizar a solução a 12.000 rpm durante 2 min. Definir solução para o lado. </li><li> Preparar as soluções de ácidos graxos utilizando C18 grau alimentício: 1. A oxidação pode ser avaliada por meio de cromatografia gasosa, se necessário. </li><li> Prepara-se uma série de 13 variantes do veículo ácido gordo (leite desnatado UHT) com concentrações crescentes de C18: 1 (0.02, 0.06, 1, 1.4, 2, 2.8, 3.8, 5, 6.4, 8, 9.8, 12, e 20 mM / L). Para fazer isso, rotular de 250 ml copos de vidro com cada concentração. </li><li> Adicionam-se 5% de parafina líquida a cada copo (por exemplo, 5 ml de parafina por 100 ml de solução de leite). </li><li> Baseado em C18: 1 concentração, adicionar a quantidade apropriada de C18: 1 para cada copo (ver Tabela 1). </li></ol><table border="1" cellpadding="0" cellspacing="0"&gt; <tbody><tr><td> C18: 1 concentração (mM) </td><td> ul / 100 ml </td></tr><tr><td> 0,02 </td><td> 0,56 </td></tr><tr><td> 0.06 </td><td> 1.9 </td></tr><tr><td> 1 </td><td> 31,5 </td></tr><tr><td> 1.4 </td><td> 44.1 </td></tr><tr><td> 2 </td><td> 63,1 </td></tr><tr><td> 2.8 </td><td> 88,4 </td></tr><tr><td> 3.8 </td><td> 119,9 </td></tr><tr><td> 5 </td><td> 157,8 </td></tr><tr><td> 6.4 </td><td> 202 </td></tr><tr><td> 8 </td><td> 250 </td></tr><tr><td> 9,8 </td><td> 309 </td></tr><tr><td> 12 </td><td> 380 </td></tr><tr><td> 20 </td><td> 631,2 </td></tr></tbody></table> . Tabela 1 Exemplo C18: 1 concentração por 100 ml de solução de concentrações crescentes (^ l / L) de C18: 1. São usadas para preparar a série de 13 emulsões para thr ácido gordo bucaleshold teste. <ol start="10"><li> Após a utilização, enche o C18: 1 recipiente com N2 para minimizar a oxidação e a seguir armazenar a 4 ° C. </li><li> Adicionar a solução de base de leite a cada copo de ácidos gordos até um volume total de 100 ml. Ponha de lado. </li><li> Utilizando a solução de base restante, prepare o veículo de controle. Num copo de vidro de 2 litros, adicionam-se 5% do volume remanescente em parafina líquida (por exemplo, 35 ml de parafina líquida, num volume final de 750 ml) em conjunto com a solução de base remanescente e homogeneizar durante 30 segundos por 100 ml de líquido. </li><li> Homogeneizar o veículo de controlo para 30 segundos por 100 ml. Este passo é realizado antes de as soluções de ácidos gordos para evitar a contaminação com C18: 1. </li><li> Homogeneizar cada veículo de ácidos gordos, começando com a concentração mais baixa para 30 segundos por 100 ml. </li><li> Higienizar o homogeneizador de antes e depois dos testes. </li><li> À medida que o processo de homogeneização pode elevar a temperatura da solutions, temperatura de verificação de controle e C18: 1 amostras com um termômetro. Servir todas as amostras à TA (20 ° C). </li><li> As amostras de leite devem ser preparadas no mesmo dia como o teste. Prove cada solução antes do teste para avaliar a frescura e adequação. Nota: Dependendo do volume necessário, preparação de solução terá um mínimo de 60 min. </li></ol> 3. Teste do limiar Fatty Acid Oral <ol><li> Certifique-se de que os participantes se abstiveram de comer ou beber (incluindo café, goma, bochechos, etc) durante pelo menos 1 hora antes do teste. </li><li> Minimizar sinais não-gosto através da realização de testes com iluminação vermelha com os participantes usando clipes de nariz. </li><li> Use o procedimento forçado triângulo ascendente escolha para determinar os limiares de ácidos graxos orais. Rotular 30 ml copos de plástico das porções com um número de identificação de três dígitos. Dê a cada participante com um conjunto de três soluções de 20 ml em ordem aleatória; dois veículos de controlo e um aci gordod veículo com a menor concentração de C18: 1 (0,02 mM). </li><li> Para determinar o limiar de ácidos graxos por via oral de um participante, instruir o participante para saborear cada solução da esquerda para a direita e expectorar em uma pia. Peça aos participantes para não engolir as amostras. </li><li> Peça ao participante para identificar qual das três amostras é &quot;estranho&quot; ou &quot;diferente&quot; e se não tiver certeza, eles devem adivinhar (escolha forçada). </li><li> Peça aos participantes que lavar a boca com água deionizada após cada conjunto de amostras. </li><li> Se identificou corretamente, fornecer ao participante um segundo conjunto de três soluções (2 controle e 1 solução ácido graxo em ordem aleatória) com a mesma concentração de ácidos graxos. Se identificado incorrectamente, fornecer o participante com um segundo conjunto de três soluções, mas com a próxima maior concentração de C18: 1 (0,06 mM). </li><li> Continue esse processo até que o participante é capaz de identificar corretamente os 3x amostra &quot;estranho&quot; emuma linha na mesma concentração. A concentração em que eles são capazes de identificar corretamente o sample &#39;estranho&#39; é registrado como os participantes C18: 1 limiar de detecção. Ver Figura 1 para uma representação gráfica deste processo. </li><li> Baseado no limiar de detecção, caracterizar os participantes como hipersensibilidade ou hiposensível de C18: 1. De acordo com a literatura anterior, indivíduos hipersensíveis podem detectar C18: 1 em concentrações &lt;3,8 mm, enquanto os indivíduos hiposensível requerem concentrações&gt; 3,8 mm. Nota: Dependendo do número de respostas incorretas, o procedimento de teste pode demorar entre 10-30 min para completar. </li></ol><img alt="Figura 1" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/51236/51236fig1highres.jpg" src="/files/ftp_upload/51236/51236fig1.jpg" /> Figura 1. Crescente escolha forçada procedimento triângulo usado para determinar a detecção de ácido graxo t. hresholds participantes são fornecidos com três soluções (duas soluções de controle e um C18: 1 solução a uma dada concentração) e pediu para identificar o &#39;sample impar &quot;. Se estiver correta, os participantes recebem um segundo conjunto de amostras com a mesma C18: 1 concentração. Se estiver incorreto, o participante é fornecido com um outro conjunto de amostras com maior concentração de C18: 1. Este procedimento continua até três soluções &quot;estranho&quot; estão corretamente identificados em uma dada concentração. Este ponto é considerado &#39;ácido graxo limiar de detecção &quot;dos indivíduos. 4. Fat Classificação Task Esta tarefa envolve participantes de degustação de quatro amostras de creme instante, cada um com diferentes teores de gordura (0, 2, 6 e 10%) e classificando-as em ordem de concentração de gordura ascendente percebido. <ol><li> Prepare um lote de creme usando desnatado em pó instantâneo de baunilha creme de acordo com as instruções do pacote. Misture 2 colheres de sopa de creme powder, 1 colher de sopa de açúcar e 2 xícaras de leite desnatado em um microondas seguro tigela. Se o produto não estiver disponível sugere, este pode ser substituído com um produto instantâneo não gordo semelhante (por exemplo, cozinhar e servir de creme). </li><li> Usando alta potência, aquecer a mistura utilizando um forno de microondas de 1.400 W em intervalos de 30 seg para um total de cerca de 5 minutos, ou até ficar espesso. Isto pode variar dependendo do tipo de creme e a potência do microondas utilizado. Deixe o creme esfriar. </li><li> Rotular quatro tigelas de cozinha de 500 ml (ou similar), com porcentagem de gordura. </li><li> Divida o creme em 4 diferentes lotes de 100 g. </li><li> Adicionar 0, 2, 6, e 10% de óleo vegetal para cada bacia para conseguir o teor de gordura desejado (por exemplo, num lote de 100 g, adicionar 0 ml, 2 ml, 6 ml, e 10 ml de óleo vegetal para atingir percentagens relativas de gordura ) e combinar. Mexa cada amostra bem para garantir que todos os ingredientes são completamente amalgamados. </li><li> Rotular quatro de 30 ml copos de plástico com porções thre randomizadonúmeros e dígitos. Encha os copos porção com 20 g de cada creme (1 tipo de creme por xícara). </li><li> Refrigerar as amostras antes do teste e servir frio (4 ° C). </li><li> Realizar o teste sob luzes vermelhas para minimizar pistas visuais. </li><li> Já os participantes saborear, engolir e classificar os quatro cremes de percepção menor para o maior teor de gordura e receber uma pontuação de 5 dependendo de suas respostas. </li><li> A pontuação para essa tarefa é mostrada na Tabela 2. Nota: o tempo de preparação aproximado para as amostras de nata é de 30 min. A tarefa de classificação de gordura não superior a 10 min deve tomar para ser concluído. </li></ol><table align="left" border="1" cellpadding="0" cellspacing="0"><tbody><tr><td> Ordem de classificação </td><td> Contagem </td></tr><tr><td> 0, 2, 6, 10 </td><td> 5 </td></tr><tr><td> 2, 0, 6, 10 </td><td> 4 </td></tr><tr><td> 0, 2, 10, 6 </td><td> 3 </td></tr><tr><td> 0, 6, 2, 10 </td><td> 2 </td></tr><tr><td> 1, 6, 10, 2 </td><td> 1 </td></tr><tr><td> 6, 0, 2, 10 </td><td> 1 </td></tr><tr><td> 2, 10, 6, 0 </td><td> 1 </td></tr><tr><td> 2, 6, 0, 10 </td><td> 0 </td></tr><tr><td> 6, 2, 10, 0 </td><td> 0 </td></tr><tr><td> 0, 10, 2, 6 </td><td> 0 </td></tr></tbody></table> Tabela 2. Fat ranking de pontuação tarefa. Participantes recebem quatro amostras de creme com 0, 2, 6, ou 10% de gordura adicionada. Os participantes são convidados a classificar as amostras do menor para o maior teor de gordura e pontuação de 0 a 5 pontos (sendo 5 o máximo). 5. Fatty Food Gostar <ol><li> Prepare amostras pequenas (5-20 g) de ambas as opções regulares e baixo teor de gordura dos alimentos disponíveis no mercado. Os alimentos incluem versões regulares e baixo teor de gordura de: queijo creme (servido em um biscoito), mousse de chocolate, queijo, biscoitos secos, manteiga de amendoim mergulho servido em um pedaço de cenoura, maionese, salada dressing (servido em uma fatia de pepino), e iogurte. </li><li> Rotular cada amostra com um número de três dígitos aleatórios para identificação. </li><li> Amostras presentes em uma ordem aleatória para evitar efeitos de ordem. </li><li> Instrua os participantes a saborear cada amostra individualmente. Os alimentos são ingeridos, mas os participantes podem comer tanto ou tão pouco de cada amostra de como eles desejam. </li><li> Já os participantes avaliassem o quanto eles gostam ou não gostam de cada amostra. Meça gosto usando uma escala hedônica magnitude generalizada 100 mm (MLG; veja a Figura 2), variando de forte aversão ao imaginável mais forte que se possa imaginar como. Grave gostando, colocando uma linha vertical no ponto que representa os participantes gostam ou não gostam da comida. </li></ol><img alt="Figura 2" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/51236/51236fig2highres.jpg" src="/files/ftp_upload/51236/51236fig2.jpg" /> Figura 2. MLG hedônicos.Os MLG hedônicos 30,31 utilizados para avaliar gosto de alimentos disponíveis comercialmente regulares e baixo teor de gordura. Participantes gosto e avalie cada amostra e colocar uma linha vertical no ponto que melhor representa o seu tipo, ou não gostam da amostra. <ol start="6"><li> Entradas não gosto não são minimizados para esta tarefa, então levar esta tarefa sob luz normal e não tem participantes usam clipes de nariz. </li></ol> 6. Fotografia Língua <ol><li> Configurar uma câmera e tripé para a fotografia. Iluminação interna regular é suficiente. </li><li> Defina a câmara para o modo macro (ou similar) para close-up fotografia. </li><li> Use um furador para criar um círculo de diâmetro de 6 mm em um 1,5 cm x 1,5 cm (ou similar) quadrado de papel de filtro. Rotular o papel com o número de identificação do participante. </li><li> Numa proveta de 50 ml, combinam corante azul com água desionizada a uma razão de 01:20. Uma pequena quantidade é necessária por participante. </li><li> Verter 30 ml food grau etanol em uma proveta de 50 ml para esterilização pinça. </li><li> Usando fita adesiva, marcar um rectângulo cm 20 cm x 30 sobre o lado da mesa de ensaio (isto deve ser a altura normal recepção), como mostrado na Figura 3a. </li></ol><img alt="Figura 3" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/51236/51236fig3highres.jpg" src="/files/ftp_upload/51236/51236fig3.jpg" /> A) instalação Figura 3. Fotografia Tongue. Demonstração da configuração da tabela necessária antes da fotografia língua B) fotografia Tongue.. Demonstração do método de fotografia língua <ol start="7"><li> Já os participantes colocar os cotovelos sobre os cantos marcados do retângulo, descansar seu queixo em suas mãos e se projetar confortavelmente a sua língua, usando os lábios para firmar essa posição (Figura 3b). O participante deve permanecer nessa posição durante a duração da testing. </li><li> Utilizando uma forma rectangular (1.5 cm x 3 cm), uma tira de papel de filtro, seco brevemente a parte inferior da língua. </li><li> Mergulhe um cotonete na solução corante alimentar / água e transferir uma pequena quantidade de corante na superfície dorsal anterior da língua, imediatamente à direita do ponto de linha média e perto da ponta (ver Figura 4). Seca-se a lingueta por uma segunda vez com o papel de filtro. </li><li> Etanol seco pinças esterilizadas com uma toalha de papel e utilizar uma pinça, colocar a pré-rotulados papel de filtro de 1,5 cm 2 em língua do participante, com o orifício de 6 mm sobre o alimento corante azul (ver Figura 4). </li><li> Usando flash, tirar fotografias de três digitais de língua do participante. Para confidencialidade, assegurar só boca e língua do participante são visíveis. </li><li> Retire o papel-filtro 1,5 cm 2 de língua do participante com uma pinça que foram novamente esterilizados em etanol grau alimentício. Carregar fotografias de um software de edição de fotos e com a função de zoom, contar tudo papilas fungiformes visível. </li><li> Diferenciar papilas fungiformes de outros papilas como maior em forma de cogumelo, estruturas elevadas. Eles não assumem a solução corante tão fortemente, e como tal aparecem com cores muito pálidas. Nota: a fotografia Tongue não mais do que 10 min deve tomar para ser concluído. </li></ol><img alt="Figura 4" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/51236/51236fig4highres.jpg" src="/files/ftp_upload/51236/51236fig4.jpg" /> Figura 4. Quantificar fungiform densidade papilas. Localização da área de 6 mm para avaliação papilas fungiformes. Usando o software de edição de fotografia, figuras numéricos indicam cada papila fungiforme.

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Os autores não têm nada a revelar.

As técnicas descritas para a determinação dos limiares por via oral de ácidos graxos, ácidos graxos gosto alimentar, e língua densidade papilas foram validados e utilizados em uma série de trabalhos publicados nos últimos anos e nós sugerimos graxos oral, avaliação de ponto inicial do ácido, a gordura classificação de tarefas e alimentos gordurosos gosto ser realizada em duplicata em cada momento relevante em um estudo. Tem havido alguma discussão sobre o melhor método para avaliar a detecção de limiares 32. Em particular, a composição das soluções utilizadas varia entre laboratórios, tal como a própria metodologia. Especificamente, o ácido gordo utilizado neste protocolo, C18: 1, acreditamos que é uma geralmente representativos e fácil de utilizar ácido gordo, ao contrário de outros ácidos gordos, incluindo o ácido linoleico (C18: 2) e ácido láurico (C12: 0) , que tenham sido previamente utilizados 9. C18: 1 é geralmente encontrado no fornecimento de alimentos e ao contrário de C12: 0 é líquido à temperatura ambiente, e é mais resistente à oxidação do que C18: 2 9.C18: 1 também foi mostrado para fornecer dados fiáveis ​​em várias sessões de teste, e é altamente correlacionada com C18: 2 e C12: 0 10. Além disso, a C18: 1 foi examinado extensivamente em toda a literatura relevante, e é, portanto, mais útil para comparações. Um grande ponto de diferença entre o protocolo descrito no presente trabalho e outros procedimentos utilizados em outros laboratórios são os veículos utilizados para apresentar estímulos ácidos graxos e da abordagem sistemática em que os limiares de detecção são determinados. Dois grandes veículos de ácidos graxos utilizados na literatura são o leite desnatado 10,17 e emulsões de água 6. Embora ambos têm demonstrado eficácia para determinação do limiar de ácido gordo, os participantes podem ter maior probabilidade de identificar o sabor de gordura dentro do leite, ou seja, não é comum à amostra de ácidos gordos em água, o que pode resultar em níveis inferiores de validade externa para os estudos que utilizam uma base de água. Leite sem gordurafornece um veículo para quimiorecepção ácido graxo, sem comprometer a validade. Embora estes dois métodos estão ainda a ser comparados directamente na literatura, sabe-se que os ácidos gordos são pouco solúveis em água 33. Como resultado da solubilidade do ácido gordo em soluções à base de leite, esta emulsão pode tanto ser mantidos mais tempo e ser mais homogéneas do que as soluções à base de água, embora isto ainda está a ser confirmado. Ao implementar esta metodologia, é importante observar os ácidos graxos livres pode ser naturalmente presente no leite 34 e, consequentemente, o produto deve ser usado bem dentro de sua expiração para evitar que o aumento dos ácidos graxos livres (que se desenvolvem com a idade) e possíveis interferências gosto desempenho limiar. Preparação de sucesso das soluções depende de inúmeros fatores. Em primeiro lugar, a ordem em que são adicionados os &quot;ingredientes&quot; é imperativo. Etapas de preparação de veículos devem seguir cuidadosamente as descritas anteriormente para assegurar a adequada composição veículo umnd uma emulsão estável. Em segundo lugar, a temperatura deve ser controlado. Cada amostra deve ser apresentado aos participantes da RT para garantir os participantes não detectar a &quot;amostra estranho&quot; devido a outros do que &quot;gosto&quot; fatores. Finalmente, todas as amostras devem ser correctamente homogeneizado durante o período de tempo sugeridos. Enquanto a emulsão de ácidos gordos e de leite sem gordura é mais eficaz do que se a água fosse para ser usado, há ainda a possibilidade de separação da emulsão dentro da amostra. O método de ensaio específico utilizado na determinação do limiar de ácido gordo oral também deve ser considerado. Dois métodos sensoriais com base em ter sido vulgarmente descritos na literatura; sendo um deles o procedimento forçado ascendente escolha triângulo eo alternativo, o método escada 35. A metodologia ascendente triângulo escolha forçada é um método estabelecido para a determinação do limiar gosto e pode ser considerado útil por várias razões, incluindo o fato de que, ao contrário do método de escada,o método ascendente começa com a menor concentração de C18: 1 (0,02 mM) e aumenta até que o participante seja capaz de detectar a presença de ácido gordo em solução 9. Por outro lado, o método envolve a escadaria aumentando ou diminuindo a concentração de ácidos gordos a partir de um ponto médio predeterminado 11. No entanto, a partir de uma determinação do limiar em um ponto acima do limite pode causar uma dessensibilização de resposta aqueles que prejudicam a capacidade de degustação. Além disso, o método ascendente tem uma menor probabilidade do acaso influenciar resultados (3,7%) em comparação com o método de escada (11,1%) 11. Como tal, sugerimos o método triângulo ascendente forçado escolha, combinado com leite sem gordura como um veículo para testar o gosto parece ser um meio eficaz de determinar com precisão os limiares orais. Aceitação alimentar ou gostar de teste é uma das avaliações mais diretas realizadas no âmbito da investigação sensorial e, como tal, há poucos problemas de tchapéu tendem a surgir. No entanto, o tipo de escala utilizada gosto é um foco importante. Neste caso, um MLG hedônica é o mais eficaz, já que tem bom poder discriminatório e é fácil para os participantes a usar 36. Os pontos finais dos MLG hedônicos são rotulados com os descritores &quot;mais forte antipatia imaginável &#39;e&#39; mais forte que se possa imaginar como&quot; e os participantes avaliam gostando contra todas as experiências hedônicos, não apenas alimentos 30,31. Este é eficaz no controle de efeitos de teto produzidos por escalas 9 pontos padrão, como todas as experiências são consideradas e comparadas. Além disso, os MLG hedônicos é mais capaz de demonstrar maior variação individual, como a escala é mais amplo 36. Alimentar-se o teste de aceitação pode ser limitada pelos alimentos apresentados, em que só apresentam duas opções por tipo de alimento. Mais pesquisas podem incluir várias outras marcas ou tipos de cada alimento, cada um com diferentes teores de gordura, ou talvez produtos feitos especificamente onde a gordurateor pode ser controlado e é a única variável. É importante notar que a interpretação de todos os dados deve ser feito com cuidado. Enquanto uma ligação potencial entre gosto, preferência e consumo é plausível e intrigante, os resultados são gerados dentro de um ambiente de laboratório e pode haver limites para a aplicação destes resultados a situações do mundo real. Avaliando densidade papilas através da fotografia língua é um processo mais difícil, com passos específicos que devem ser tomadas a fim de produzir resultados adequados e aplicáveis. Em particular, é importante identificar o tipo de papilas correcta. Três tipos de sabor papilas são visíveis na língua humana; fungiformes, folhadas e circumvallate 4. Papilas fungiformes pode, contudo, ser facilmente distinguidas como estruturas em forma de cogumelo 26, e são geralmente as papilas que são gravados durante as avaliações de sensibilidade. Papilas fungiformes tendem a variar em concentração de 5-60por área de 6 mm 37 (dependendo da sensibilidade), embora tenha havido estudos que indicam que alguns indivíduos podem ter mais de 230 papilas mesma área 21. O tipo de câmera utilizada é fundamental para a obtenção de resultados adequados e podem ser responsáveis ​​por essa variabilidade. Antes do uso da fotografia digital nesta área, videomicroscopia foi o padrão-ouro para a identificação e registro de densidade papilas. No entanto, determinou-se que o mesmo nível de identificação é possível utilizar uma câmara digital apropriado 26. Além disso, a fotografia digital leva apenas alguns minutos, onde videomicroscopia pode levar até uma hora 26. Não só isso, mas a fotografia digital tem o potencial de ser muito menos dispendioso e mais portátil, que pode ser útil para uso com vários grupos de participantes 26. Finalmente, embora o nosso objectivo é medir a densidade papilas fungiformes para associações com a detecção de ácido graxo oral, sugerimos também limiares gosto de tele cinco sabores protótipo também ser realizadas em paralelo. Dado ligação anterior com a densidade de papilas e função gosto, isso poderia servir como uma «medida verificando &#39;adicional que possa adicionar a integridade dos dados, especialmente tendo em conta esta é uma nova área de pesquisa. A área de pesquisa quimiorecepção oral, particularmente em relação ácidos graxos, é uma questão emergente, e, como tal, é importante que toda a pesquisa a ser realizada com um alto padrão, de preferência com o uso de protocolos consistentes para permitir comparações diretas.

O consumo excessivo de gordura na dieta é um fator potencial de ganho de peso 1-3 e obesidade se tornou uma epidemia global moderna. Pesquisas sugerem níveis mais altos de consumo de gordura, particularmente como parte de uma dieta ad libitum, podem estar associados com um IMC superior 2,3, no entanto, os fatores que influenciam o consumo de gordura na dieta e preferência está longe de ser clara. Procurando os mecanismos que estão na base do consumo de gordura é, portanto, um objetivo óbvio e de interesse particular é um mecanismo oral, responsável pela detecção de gordura, comumente chamado de &quot;sabor ácido graxo&quot; 2. De um ponto de vista evolutivo, o sistema de sabor presumivelmente serviu como um porteiro do sistema digestivo, orientando o consumo de energia e de nutrientes densos expulsão de compostos potencialmente tóxicos 4. O sentido do paladar é provocada por células receptoras gosto especializados que são distribuídos dentro de três tipos de línguapapilas; fungiformes, folhadas e papilas circumvallate, que cada um pode conter até várias centenas de paladar 5. Em adição aos cinco amplamente aceites gostos prototípicas (doce, salgado, azedo, amargo, e umami), não é inteiramente surpreendente que tenha havido sugestão de um mecanismo para a detecção de ácidos bucal seus produtos de degradação de gordura de gordura, ou mais provavelmente a 6. Pesquisa anterior mostrou consistentemente ácidos gordos pode ser detectado no interior da cavidade bucal durante um intervalo de concentrações de 7-11, apesar do facto de que não é um &quot;gosto&quot; no sentido tradicional do termo, como ele não tem só a qualidade perceptual discernível a ele associado (isto é. doce) 12. Trabalhe a partir de nosso laboratório destacou implicações funcionais da quimiorecepção ácidos graxos prejudicada, ou seja, sobre o peso corporal e consumo de gordura na dieta. Aqueles que são menos capazes de detectar ácidos graxos (hiposensível) parecem ter um índice de massa corporal mais elevado (BMI) e consomem mais energia 9, ao mesmo tempo, tem-se observado uma relação entre a sensibilidade de ácido gordo por via oral e o consumo de gordura na dieta; ou seja, de ácidos graxos indivíduos hiposensível foram mostrados a consumir mais gorduras animais, incluindo, carne, produtos lácteos de alta gordura, e gordo espalha todos que estão sendo apontados como contribuintes para o ganho de peso 13. Além disso, os indivíduos que são mais sensíveis aos ácidos graxos parecem estar mais bem equipados a diferenciação entre amostras com diferentes teores de gordura 9. Enquanto outros grupos de pesquisa não conseguiram encontrar associações similares 10,14,15, esta área de pesquisa crescente permanece intrigante. Estas diferenças individuais em quimiorecepção ácido gordo parecem ser um pouco modulado por factores ambientais, incluindo a dieta. Ingestão de gordura habitual tem sido associada com prejudicada quimiorecepção ácido gordo por via oral e, consequentemente, uma maior preferência para, e aumento do consumo degordura dietética 16. Além de adaptação do paladar, do trato gastrintestinal (GI) também parece sensível a tais alterações na ingestão de gordura 17 e sensibilidade ácido graxo GI prejudicada pode estar implicado na incapacidade de gerar saciedade adequada sinalização respostas que desencorajam o excesso de consumo de energia 18. Além dos fatores ambientais, quimiorecepção ácido graxo também pode ser ditada por diferenças genéticas e fisiológicas entre os indivíduos, incluindo a concentração de densidade papilas fungiformes (e presumivelmente receptores gustativos) na língua de um indivíduo 19. Maior densidade de fungiformes papilas da língua tem sido associada à maior sensibilidade oral para numerosos compostos oralmente detectados incluindo 6 - n-propiltiouracil (PROP) 20, 21 de açúcar, sal e 22, enquanto outros também observaram uma associação com a percepção cremoso 23. Supertasters PROP (que presumaBly ter um maior número de papilas fungiformes) são capazes de distinguir alto teor de gordura de baixas molhos para salada gordura 24 e são capazes de discriminar o teor de gordura e cremosidade de alimentos lácteos com mais precisão do que os não-provadores 23,25. Nesta fase, no entanto, a relação entre a densidade de papilas fungiformes e &quot;gosto&quot; de detecção de ácido graxo oral é desconhecida. Na base da investigação quimiorecepção ácido graxo oral humana é a aplicação de várias técnicas sensoriais. Identificando variabilidade individual na detecção de ácido gordo oral é um dos principais focos e depende em grande medida da determinação do limiar de detecção de ácidos gordos, isto é, o ponto mais baixo em que o ácido gordo é capaz de ser detectado na solução 9. Embora o método de teste e estímulo do veículo específico utilizado varia de acordo com a literatura e entre os grupos de pesquisa, o procedimento típico envolve a apresentação de um participante com um conjunto de ácidos gordos emulsionados e controlo (sem fácido atty) soluções e identificar qual é a amostra &quot;impar&quot;. Apresentamos aqui, um método confiável e reprodutível estabelecida para determinação do limiar de 10 usando soluções leite emulsionados e um procedimento forçado triângulo escolha crescente. A medida em que a sensibilidade de ácidos graxos por via oral influencia a dieta, ou seja, o consumo de alimentos gordurosos, ea capacidade de perceber a gordura nos alimentos também é de interesse e aqui também relatar duas técnicas estabelecidas adicionais para ampliar ainda mais a nossa compreensão da quimiorecepção ácido graxo. Fatty comida gosto pode ser identificado através de indivíduos com amostras de alimentos disponíveis no mercado, tanto com uma regular e uma opção de baixo teor de gordura, que são convidados a indicar gosto de cada 16. Em relação à percepção de gordura, uma tarefa de classificação de gordura tem sido desenvolvido pelo nosso laboratório, destinado a avaliar a capacidade do indivíduo para detectar gordura em creme, uma matriz de comida típica 16. Para avaliar geneticac ou diferenças fisiológicas entre os indivíduos, um método de fotografia língua comumente usado envolve a coloração, fotografando e quantificar papilas fungiformes 26. Enquanto estiver usando esta técnica em ácidos graxos pesquisa está em sua infância, aumentando a aplicação, especialmente em ambos magros e sobrepeso / obesidade grupos populacionais podem ajudar a identificar as causas inerentes do excesso de consumo de gordura.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:909px;" width="909">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Name of Material/ Equipment</td>
			<td style="width:104px;">Company</td>
			<td style="width:119px;">Catalog Number</td>
			<td style="width:471px;">Comments/Description</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:216px;">Gum Arabic TIC Pretested PRE-HYDRATED FT Powder</td>
			<td style="width:104px;">Alchemy Agencies Ltd. NZ</td>
			<td style="width:119px;">CFR# 21 CFR 184.1330</td>
			<td>Food grade agrigum</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:216px;">EDTA (Ethylenediaminetetraacetic acid)</td>
			<td style="width:104px;">Merck</td>
			<td style="width:119px;">1.08418 0250</td>
			<td>Disodium salt dehydrate</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:216px;">L4RT Homogenizer</td>
			<td style="width:104px;">Silverson Longmedow, MA</td>
			<td style="width:119px;">L4RT</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Liquid Paraffin</td>
			<td style="width:104px;">Fauldings</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>No catalog number as liquid paraffin is a regular consumable product</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:216px;">Nikon AF-S VR Micro Nikkor 105mm f/2.8G IF-ED camera lens</td>
			<td style="width:104px;">Nikon</td>
			<td align="right" style="width:119px;">2160</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">SLIK Sprint Pro II tripod</td>
			<td style="width:104px;">Slik Corporation</td>
			<td>611-849</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Nikon D90 Digital Camera with LCD Protector</td>
			<td style="width:104px;">Nikon</td>
			<td style="width:119px;">BM-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Nitrogen</td>
			<td style="width:104px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:216px;">Tanita Body Scan Composition Monitor Scales</td>
			<td style="width:104px;">Tanita, Cloverdale, WA, Australia</td>
			<td style="width:119px;">BC-551</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="84">
			<td height="84" style="height:84px;width:216px;">Seca Stadiometer</td>
			<td style="width:104px;">Medshop Australia, Fairfield, VIC, Australia</td>
			<td style="width:119px;">MED435</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

measuring oral fatty acid thresholds, fat perception, fatty food liking, and papillae density in humans

Evidência emergente de uma série de laboratórios indicam que os humanos têm a capacidade de identificar os ácidos gordos na cavidade oral, presumivelmente através de receptores de ácidos gordos alojados em células de sabor. Pesquisas anteriores mostraram que a sensibilidade oral, de um indivíduo de ácido graxo, ácido oleico especificamente (C18: 1) está associada com o índice de massa corporal (IMC), o consumo de gordura na dieta, e a capacidade de identificar a gordura nos alimentos. Desenvolvemos um método de confiança e reprodutível para avaliar quimiorecepção oral de ácidos gordos, usando uma leite e C18: 1 em emulsão, em conjunto com um procedimento forçado triângulo escolha ascendente. Em paralelo, uma matriz de comida foi desenvolvido para avaliar a capacidade de um indivíduo para perceber gordura, para além de um método simples para avaliar fatty gosto. Como uma fotografia adicionado língua medida é usada para avaliar a densidade papilas, com maior densidade sendo muitas vezes associada com o aumento da sensibilidade de sabor.

Os métodos descritos acima são importantes como alguma evidência emergente indicou que quimiorecepção ácido gordo prejudicada no tracto GI e cavidade oral pode estar associada com o aumento do IMC e o desenvolvimento de obesidade 17. Vários estudos têm utilizado os protocolos descritos para investigar a detecção por via oral de ácidos graxos e nossa publicação recente mostrou que o método é confiável e reprodutível 10. Estudos utilizando esta metodologia foram capazes de determinar com fiabilidade limiares de detecção orais de ácidos graxos do indivíduo, identificando o ponto em que os participantes são capazes de detectar uma diferença entre amostras de leite 9. . Depois de três sessões de testes utilizando este protocolo, Stewart et al 9 encontraram que o limiar de detecção média de C18: 1 foi de 2,2 ± 0,1, com limites de detecção variando 1-6,4 mm (ver Figura 5). Mais recentemente, temos estabelecido um C18: 1 faixa de limiar de detecção de 00,26-12 mM, (média: 2,64 ± 0,7 mm) 10. Estes resultados suportam a noção de que os ácidos gordos podem ser detectadas na cavidade oral, e que marcada diferenças individuais na sensibilidade a C18: 1 existe. Com base nesses resultados, podemos classificar os indivíduos como hipersensibilidade ou hiposensível de C18: 1. Indivíduos hipersensíveis são capazes de identificar corretamente C18: 1 &lt;3,8 mM, enquanto assuntos hiposensível requerem concentrações&gt; 3,8 mM. Investigação do nosso laboratório tem encontrado sensibilidade oral a C18: 1 está associado com o consumo da dieta de gordura e IMC (Figura 6), em que C18: 1 hiposensível indivíduos consomem mais gorduras saturadas e animais e têm um IMC superior 13. Curiosamente, em um estudo realizado por Stewart e Keast 16, verificou-se que o consumo de uma dieta de baixo teor de gordura resultou em aumento da sensibilidade ao C18: 1 para os participantes, tanto magras e com sobrepeso (Figura 7). No entanto, este estudo também descobriu que quando os participantes consu<html> med uma dieta rica em gordura, as pessoas magras tinham sensibilidade reduzida ao C18: 1, enquanto que os indivíduos com sobrepeso tiveram nenhuma mudança na sensibilidade gustativa (Figura 8). Isto sugere que habitualmente consomem uma dieta rica em gordura, o que é mais provável que os indivíduos com excesso de peso, pode resultar em atenuada quimiorecepção ácidos gordos 28. No entanto, como não houve diferenças na sensibilidade da linha de base entre os participantes magros e com excesso de peso, esses resultados podem indicar que indivíduos magros são simplesmente mais suscetíveis a mudanças na dieta sobre a ingestão de gordura. Isto também pode sugerir que foi a presença da intervenção específica (alta vs baixa gordura), que pode ter influenciado resultados, em vez de dietas habituais, os quais podem ou não podem ter sido diferente para a intervenção de dieta. Apesar disso, este estudo indica que existem algumas diferenças fundamentais entre indivíduos magros e com sobrepeso em relação a sensibilidade gustativa de ácidos graxos, o que requer uma investigação mais aprofundada. ONTEÚDO &quot;fo: manter-together.within-page =&quot; always &quot;&gt; <img alt="Figura 5" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/51236/51236fig5highres.jpg" src="/files/ftp_upload/51236/51236fig5.jpg" /> Figura 5 C18:. Uma limiares de detecção de sabor variabilidade acentuada foi mostrado na sensibilidade a C18: 1 com os participantes. Capazes de detectar C18: 1 através de uma gama de concentrações (mM 1 mM-6.4). <img alt="Figura 6" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/51236/51236fig6highres.jpg" src="/files/ftp_upload/51236/51236fig6.jpg" /> Figura 6 C18:. 1 limiares de detecção do gosto e associação com o IMC uma associação entre a capacidade de detectar C18:. 1 e na composição corporal tem sido demonstrado, por meio de que aqueles com limiares de detecção mais elevados (indivíduos hiposensível) têm valores significativamente mais elevados de IMC (P = 0,002 , r 2 = 0,467). <p class="jove_content" fo:keep-together.within-page = &quot;always&quot;&gt; <img alt="Figura 7" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/51236/51236fig7highres.jpg" src="/files/ftp_upload/51236/51236fig7.jpg" /> Figura 7 C18:. 1 limiares de detecção de seguir uma dieta de baixa gordura Após 4 Consumo de semana de uma dieta de baixa gordura, C18: 1. Limiares de detecção de aumento para indivíduos ambos magros e obesos. <img alt="Figura 8" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/51236/51236fig8highres.jpg" src="/files/ftp_upload/51236/51236fig8.jpg" /> Figura 8 C18:. 1 limiares de detecção de seguir uma dieta rica em gordura Após 4 Consumo de semana de uma dieta rica em gordura, indivíduos magros exibido sensibilidade reduzida ao C18:. 1 (P = 0,006), enquanto que os indivíduos com sobrepeso demonstraram nenhuma alteração (P = 0,609) . Da mesma forma que o impacto da dieta sobre os limiares de detecção de ácidos graxos, há pesquisas para suggeª que a comida gosto pode ser de plástico e alterado pela exposição. Por exemplo, verifica-se que uma dieta rica em gordura aumenta a preferência para um produto de maior teor em gordura, com a frente que ocorre após o consumo de uma dieta de baixo teor de gordura 16. No entanto, essas mudanças não foram consistentes na literatura. Afigura-se que as mudanças para as preferências são mediadas pelo período de tempo que o indivíduo tem vindo a aderir a uma dieta de alto ou de baixo teor de gordura. Especificamente, Mattes 29 encontraram alterações significativas nas preferências alimentares dos participantes após 12 semanas em uma dieta de baixo teor de gordura, enquanto Stewart e Keast 16 encontrou apenas alterações esporádicas e marginais após quatro semanas em uma dieta similar. Consumir um alto teor de gordura da dieta alterada preferências dos participantes para iogurte, com preferências por iogurte desnatado aumentando, inverso aos resultados esperados (linha de base (BL): 19,44 ± 5,73, Semana 4 (WK4): 21,94 ± 5,21, P = 0,046). Além disso, depois de quatro semanas de uma dieta com baixo teor de gordura, manteiga preferências para baixo teor de gordura aumentou em todos os participants (BL: 6,23 ± 4,26, WK4: 7,32 ± 3,04, P = 0,046). Preferências de iogurte desnatado aumentou para os participantes magros só (BL: 2,51 ± 3,26, WK4: 3,68 ± 4,94, P = 0,07), enquanto as preferências para mousse baixo teor de gordura diminuiu para todos os participantes (p = 0,01). A capacidade de detectar gordura nos alimentos é avaliado por pedindo aos participantes para degustar e classificar uma série de cremes com diferentes teores de gordura. Percepção de gordura é identificado com base em quão bem os participantes foram capazes de classificar as amostras. Percepção de gordura tem sido conhecida a mudar com a dieta, por exemplo, seguir uma dieta de baixa gordura resultou em melhorias para o desempenho do participante na correta identificação e classificação do grau de gordura em cada amostra de creme 11. Além disso, parece que há uma associação entre a sensibilidade de C18: 1 e identificação e classificação de conteúdo de gordura 4. De fato, os indivíduos que estavam hipersensíveis ao C18: 1 desempenho significativamente melhor on a tarefa de classificação de gordura (4,3 ± 0,6) em comparação com indivíduos hiposensível (2,3 ± 0,1, P = 0,02) (escores estão fora de um máximo de cinco) 9. Isso indica que as pessoas que são mais sensíveis aos ácidos graxos também foram melhores na diferenciação entre as quatro diferentes concentrações de gordura no creme. Embora tenha havido uma tendência para o desempenho melhorar depois de consumir a dieta de baixo teor de gordura, durante quatro semanas, esta não foi uma mudança significativa (BL: 1,3 ± 0,3, WK4: 2 ± 0,3, P = 0,077) 16. Densidade papilas ou seja, o número de papilas (e, portanto, as papilas gustativas) presentes na língua varia entre os indivíduos e é indicativo da função gosto. Quanto maior a densidade fungiformes papilas tem sido associada a sensibilidade aumentada sabor, para os compostos incluindo a sacarose e 21 a substância amarga PROP 20. Tongue densidade papilas, conforme determinado pela fotografia língua, varia consideravelmente entre os indivíduos. Por exemplo, Zhang &lt;em&gt; et al. 21 descobriu que havia diferenças individuais significativas entre os participantes, que vão desde uma concentração de 7,07 ± 0.35/cm 2-233,43 ± 0.00/cm 2 (dados foi para um único participante), enquanto que outros 26 encontraram uma média concentração papilas fungiformes ser 156,00 ± 5.86/cm 2. Além disso, foi constatado que as papilas podem aparecer significativamente diferente em estrutura entre os indivíduos, com a variação em altura, largura e formato, 21 embora evidência limitada sobre as possíveis implicações dessas diferenças. Dado descobertas anteriores que ligam número papilas com sensibilidade sabor, é plausível que uma relação semelhante também podem existir para a sensibilidade de ácido gordo por via oral, em que aqueles que estão mais oralmente sensível a ácidos gordos podem ter uma maior densidade de papilas sabor e, portanto, um maior número de receptores de ácidos gordos orais. Embora esta associação ainda está para ser estabelecida, presees um romance área de pesquisa pode ajudar a envolver os mecanismos subjacentes que orientam o consumo ao longo de gordura.

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Measuring Oral Fatty Acid Thresholds, Fat Perception, Fatty Food Liking, and Papillae Density in Humans | Neuroscience | Video

Measuring Oral Fatty Acid Thresholds, Fat Perception, Fatty Food Liking, and Papillae Density in Humans

Quimiorecepção oral de ácidos graxos ea associação com dieta e gordurosos preferências alimentares pode permitir a identificação de mecanismos envolvidos no desenvolvimento da obesidade e por mudanças na dieta pode ser difícil para muitas pessoas.

Medindo Oral Ácido Limites Fatty, Fat Percepção, gordos alimentares Gostar, e Papilas Densidade em seres humanos

Emerging evidence from a number of laboratories indicates that humans have the ability to identify fatty acids in the oral cavity, presumably via fatty ...

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19.8K visualizações.  Deakin University.  Quimiorecepção oral de ácidos graxos ea associação com dieta e gordurosos preferências alimentares pode permitir a identificação de mecanismos envolvidos no desenvolvimento da obesidade e por mudanças na dieta pode ser difícil para muitas pessoas. 

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Using Affordable LED Arrays for Photo-Stimulation of Neurons

Standard slice electrophysiology has allowed researchers to probe individual components of neural circuitry by recording electrical responses of single cells in response to electrical or pharmacological manipulations1,2. With the invention of methods to optically control genetically targeted neurons (optogenetics), researchers now have an unprecedented level of control over specific groups of neurons in the standard slice preparation. In particular, photosensitive channelrhodopsin-2 (ChR2) allows researchers to activate neurons with light3,4. By combining careful calibration of LED-based photostimulation of ChR2 with standard slice electrophysiology, we are able to probe with greater detail the role of adult-born interneurons in the olfactory bulb, the first central relay of the olfactory system. Using viral expression of ChR2-YFP specifically in adult-born neurons, we can selectively control young adult-born neurons in a milieu of older and mature neurons. Our optical control uses a simple and inexpensive LED system, and we show how this system can be calibrated to understand how much light is needed to evoke spiking activity in single neurons. Hence, brief flashes of blue light can remotely control the firing pattern of ChR2-transduced newborn cells.

Adult-born neurons expressing ChR2 can be manipulated in slice electrophysiological preparations in order to examine their contribution towards the function of olfactory neural circuits.

Acessível usando Arrays LED para Foto Estimulação de Neurônios

Standard slice electrophysiology has allowed researchers to probe individual components of neural circuitry by recording electrical responses of single ...

Neurociência

Selective Viral Transduction of Adult-born Olfactory Neurons for Chronic in vivo Optogenetic Stimulation

Local interneurons are continuously regenerated in the olfactory bulb of adult rodents1-3. In this process, called adult neurogenesis, neural stem cells in the walls of the lateral ventricle give rise to neuroblasts that migrate for several millimeters along the rostral migratory stream (RMS) to reach and incorporate into the olfactory bulb. To study the different steps and the impact of adult-born neuron integration into preexisting olfactory circuits, it is necessary to selectively label and manipulate the activity of this specific population of neurons. The recent development of optogenetic technologies offers the opportunity to use light to precisely activate this specific cohort of neurons without affecting surrounding neurons4,5. Here, we present a series of procedures to virally express Channelrhodopsin2(ChR2)-YFP in a temporally restricted cohort of neuroblasts in the RMS before they reach the olfactory bulb and become adult-born neurons. In addition, we show how to implant and calibrate a miniature LED for chronic in vivo stimulation of ChR2-expressing neurons.

Selective Viral Transduction of Adult-born Olfactory Neurons for Chronic in vivo Optogenetic Stimulation

Adult-born neurons of the olfactory bulb can be optogenetically controlled using Channelrhodopsin2-expressing lentiviral injection in the rostral migratory stream and chronic photostimulation with an implanted miniature LED.

Transdução Viral seletiva de Adultos-nascido neurônios olfativos de crônica In vivo Estímulo Optogenetic

Local interneurons are continuously regenerated in the olfactory bulb of adult rodents1-3. In this process, called adult neurogenesis, neural stem cells ...

MPI CyberMotion Simulator: Implementation of a Novel Motion Simulator to Investigate Multisensory Path Integration in Three Dimensions

Path integration is a process in which self-motion is integrated over time to obtain an estimate of one's current position relative to a starting point 1. Humans can do path integration based exclusively on visual 2-3, auditory 4, or inertial cues 5. However, with multiple cues present, inertial cues - particularly kinaesthetic - seem to dominate 6-7. In the absence of vision, humans tend to overestimate short distances (&lt;5 m) and turning angles (&lt;30&deg;), but underestimate longer ones 5. Movement through physical space therefore does not seem to be accurately represented by the brain.
Extensive work has been done on evaluating path integration in the horizontal plane, but little is known about vertical movement (see 3 for virtual movement from vision alone). One reason for this is that traditional motion simulators have a small range of motion restricted mainly to the horizontal plane. Here we take advantage of a motion simulator 8-9 with a large range of motion to assess whether path integration is similar between horizontal and vertical planes. The relative contributions of inertial and visual cues for path navigation were also assessed.
16 observers sat upright in a seat mounted to the flange of a modified KUKA anthropomorphic robot arm. Sensory information was manipulated by providing visual (optic flow, limited lifetime star field), vestibular-kinaesthetic (passive self motion with eyes closed), or visual and vestibular-kinaesthetic motion cues. Movement trajectories in the horizontal, sagittal and frontal planes consisted of two segment lengths (1st: 0.4 m, 2nd: 1 m; &plusmn;0.24 m/s2 peak acceleration). The angle of the two segments was either 45&deg; or 90&deg;. Observers pointed back to their origin by moving an arrow that was superimposed on an avatar presented on the screen.
Observers were more likely to underestimate angle size for movement in the horizontal plane compared to the vertical planes. In the frontal plane observers were more likely to overestimate angle size while there was no such bias in the sagittal plane. Finally, observers responded slower when answering based on vestibular-kinaesthetic information alone. Human path integration based on vestibular-kinaesthetic information alone thus takes longer than when visual information is present. That pointing is consistent with underestimating and overestimating the angle one has moved through in the horizontal and vertical planes respectively, suggests that the neural representation of self-motion through space is non-symmetrical which may relate to the fact that humans experience movement mostly within the horizontal plane.

An efficient way to gain insight into how humans navigate themselves in three dimensions is described. The method takes advantage of a motion simulator capable of moving observers in ways unattainable by traditional simulators. Results confirm that movement in the horizontal plane is underestimated, while vertical movement is overestimated.

MPI Simulator CyberMotion: Implementação de um simulador de movimento Novela Caminho para Investigar Integração multisensorial em Três Dimensões

Path integration is a process in which self-motion is integrated over time to obtain an estimate of one's current position relative to a starting point 1. ...

Isolation and Culture of Human Fungiform Taste Papillae Cells

Taste cells are highly specialized, with unique histological, molecular and physiological characteristics that permit detection of a wide range of simple stimuli and complex chemical molecules contained in foods. In human, individual fungiform papillae contain from zero to as many as 20 taste buds. There is no established protocol for culturing human taste cells, although the ability to maintain taste papillae cells in culture for multiple cell cycles would be of considerable utility for characterizing the molecular, regenerative, and functional properties of these unique sensory cells. Earlier studies of taste cells have been done using freshly isolated cells in primary culture, explant cultures from rodents, or semi-intact taste buds in tissue slices1,2,3,4. Although each of these preparations has advantages, the development of long-term cultures would have provided significant benefits, particularly for studies of taste cell proliferation and differentiation. Several groups, including ours, have been interested in the development and establishment of taste cell culture models. Most attempts to culture taste cells have reported limited viability, with cells typically not lasting beyond 3-5 d5,6,7,8. We recently reported on a successful method for the extended culture of rodent taste cells9. We here report for the first time the establishment of an in vitro culture system for isolated human fungiform taste papillae cells. Cells from human fungiform papillae obtained by biopsy were successfully maintained in culture for more than eight passages (12 months) without loss of viability. Cells displayed many molecular and physiological features characteristic of mature taste cells. Gustducin and phospholipase C &beta;2, (PLC-&beta;2) mRNA were detected in many cells by reverse transcriptase-polymerase chain reaction and confirmed by sequencing. Immunocytochemistry analysis demonstrated the presence of gustducin and PLC-&beta;2 expression in cultured taste cells. Cultured human fungiform cells also exhibited increases in intracellular calcium in response to appropriate concentrations of several taste stimuli indicating that taste receptors and at least some of the signalling pathways were present. These results sufficient indicate that taste cells from adult humans can be generated and maintained for at least eight passages. Many of the cells retain physiological and biochemical characteristics of acutely isolated cells from the adult taste epithelium to support their use as a model taste system. This system will enable further studies of the processes involved in proliferation, differentiation and function of mammalian taste receptor cells in an in vitro preparation.
Human fungiform taste papillae used for establishing human fungiform cell culture were donated for research following proper informed consent under research protocols that were reviewed and approved by the IRB committee. The protocol (#0934) was approved by Schulman Associates Institutional Review Board Inc., Cincinnati, OH. Written protocol below is based on published parameters reported by Ozdener et al. 201110.

We aimed to develop a reproducible protocol for isolating and maintaining long-term cultures of human fungiform taste papillae cells. Cells from human fungiform papillae obtained by biopsy were successfully maintained in culture for more than eight passages (12 months) without loss of viability.

Isolamento e Cultura de Células Papila fungiforme Humanos Taste

Taste cells are highly specialized, with unique histological, molecular and physiological characteristics that permit detection of a wide range of simple ...

Progressive-ratio Responding for Palatable High-fat and High-sugar Food in Mice

Foods that are rich in fat and sugar significantly contribute to over-eating and escalating rates of obesity. The consumption of palatable foods can produce a rewarding effect that strengthens action-outcome associations and reinforces future behavior directed at obtaining these foods. Increasing evidence that the rewarding effects of energy-dense foods play a profound role in overeating and the development of obesity has heightened interest in studying the genes, molecules and neural circuitry that modulate food reward1,2. The rewarding impact of different stimuli can be studied by measuring the willingness to work to obtain them, such as in operant conditioning tasks3. Operant models of food reward measure acquired and voluntary behavioral responses that are directed at obtaining food. A commonly used measure of reward strength is an operant procedure known as the progressive ratio (PR) schedule of reinforcement.4,5 In the PR task, the subject is required to make an increasing number of operant responses for each successive reward. The pioneering study of Hodos (1961) demonstrated that the number of responses made to obtain the last reward, termed the breakpoint, serves as an index of reward strength4. While operant procedures that measure changes in response rate alone cannot separate changes in reward strength from alterations in performance capacity, the breakpoint derived from the PR schedule is a well-validated measure of the rewarding effects of food. The PR task has been used extensively to assess the rewarding impact of drugs of abuse and food in rats (e.g.,6-8), but to a lesser extent in mice9. The increased use of genetically engineered mice and diet-induced obese mouse models has heightened demands for behavioral measures of food reward in mice. In the present article we detail the materials and procedures used to train mice to respond (lever-press) for a high-fat and high-sugar food pellets on a PR schedule of reinforcement. We show that breakpoint response thresholds increase following acute food deprivation and decrease with peripheral administration of the anorectic hormone leptin and thereby validate the use of this food-operant paradigm in mice.

The present report details the protocol employed to measure the rewarding effects of high-fat food in mice using a progressive ratio operant conditioning task.

Relação progressiva Respondendo para Alimentos gordurosos e High-açúcar Palatable em Ratos

Foods that are rich in fat and sugar significantly contribute to over-eating and escalating rates of obesity. The consumption of palatable foods can ...

RNAi-mediated Double Gene Knockdown and Gustatory Perception Measurement in Honey Bees (Apis mellifera)

This video demonstrates novel techniques of RNA interference (RNAi) which downregulate two genes simultaneously in honey bees using double-stranded RNA (dsRNA) injections. It also presents a protocol of proboscis extension response (PER) assay for measuring gustatory perception.	
	RNAi-mediated gene knockdown is an effective technique downregulating target gene expression. This technique is usually used for single gene manipulation, but it has limitations to detect interactions and joint effects between genes. In the first part of this video, we present two strategies to simultaneously knock down two genes (called double gene knockdown). We show both strategies are able to effectively suppress two genes, vitellogenin (vg) and ultraspiracle (usp), which are in a regulatory feedback loop. This double gene knockdown approach can be used to dissect interrelationships between genes and can be readily applied in different insect species.	
	The second part of this video is a demonstration of proboscis extension response (PER) assay in honey bees after the treatment of double gene knockdown. The PER assay is a standard test for measuring gustatory perception in honey bees, which is a key predictor for how fast a honey bee's behavioral maturation is. Greater gustatory perception of nest bees indicates increased behavioral development which is often associated with an earlier age at onset of foraging and foraging specialization in pollen. In addition, PER assay can be applied to identify metabolic states of satiation or hunger in honey bees. Finally, PER assay combined with pairing different odor stimuli for conditioning the bees is also widely used for learning and memory studies in honey bees.

RNAi-mediated Double Gene Knockdown and Gustatory Perception Measurement in Honey Bees Apis mellifera

In this protocol, we describe two strategies that simultaneously suppress two genes (double gene knockdown) in honey bees. Then we present how to use the proboscis extension response (PER) assay to study the effect of double gene knockdown on honey bee gustatory perception.

RNAi mediado por Gene Knockdown duplo e Mensuração Percepção gustativa em abelhas do mel (<em&gt; Apis mellifera</em&gt;)

This video demonstrates novel techniques of RNA  interference (RNAi) which downregulate two genes simultaneously in honey bees  using double-stranded RNA ...

The Neuromuscular Junction: Measuring Synapse Size, Fragmentation and Changes in Synaptic Protein Density Using Confocal Fluorescence Microscopy

The neuromuscular junction (NMJ) is the large, cholinergic relay synapse through which mammalian motor neurons control voluntary muscle contraction. Structural changes at the NMJ can result in neurotransmission failure, resulting in weakness, atrophy and even death of the muscle fiber. Many studies have investigated how genetic modifications or disease can alter the structure of the mouse NMJ. Unfortunately, it can be difficult to directly compare findings from these studies because they often employed different parameters and analytical methods. Three protocols are described here. The first uses maximum intensity projection confocal images to measure the area of acetylcholine receptor (AChR)-rich postsynaptic membrane domains at the endplate and the area of synaptic vesicle staining in the overlying presynaptic nerve terminal. The second protocol compares the relative intensities of immunostaining for synaptic proteins in the postsynaptic membrane. The third protocol uses Fluorescence Resonance Energy Transfer (FRET) to detect changes in the packing of postsynaptic AChRs at the endplate. The protocols have been developed and refined over a series of studies. Factors that influence the quality and consistency of results are discussed and normative data are provided for NMJs in healthy young adult mice.

The neuromuscular junction (NMJ) is altered in a variety of conditions that can sometimes culminate in synaptic failure. This report describes fluorescence microscope-based methods to quantify such structural changes.

A Junção Neuromuscular: Synapse Medir o tamanho, Mudanças de fragmentação e em Synaptic Density proteína utilizando microscopia de fluorescência confocal

The neuromuscular junction (NMJ) is the large, cholinergic relay synapse through which mammalian motor neurons control voluntary muscle contraction. ...

Non-invasive Assessment of Changes in Corticomotoneuronal Transmission in Humans

The corticospinal pathway is the major pathway connecting the brain with the muscles and is therefore highly relevant for movement control and motor learning. There exists a number of noninvasive electrophysiological methods investigating the excitability and plasticity of this pathway. However, most methods are based on quantification of compound potentials and neglect that the corticospinal pathway consists of many different connections that are more or less direct. Here, we present a method that allows testing excitability of different fractions of the corticospinal transmission. This so called H-reflex conditioning technique allows one to assess excitability of the fastest (monosynaptic) and also polysynaptic corticospinal pathways. Furthermore, by using two different stimulation sites, the motor cortex and the cervicomedullary junction, it allows not only differentiation between cortical and spinal effects but also assessment of transmission at the corticomotoneural synapse. In this manuscript, we describe how this method can be used to assess corticomotoneural transmission after low-frequency repetitive transcranial magnetic stimulation, a method that was previously shown to reduce excitability of cortical cells. Here we demonstrate that not only cortical cells are affected by this repetitive stimulation but also transmission at the corticomotoneuronal synapse at the spinal level. This finding is important for the understanding of basic mechanisms and sites of neuroplasticity. Besides investigation of basic mechanisms, the H-reflex conditioning technique may be applied to test changes in corticospinal transmission following behavioral (e.g., training) or therapeutic interventions, pathology or aging and therefore allows a better understanding of neural processes that underlie movement control and motor learning.

The aim of the present study was to assess changes in transmission at the corticomotoneuronal synapses in humans after repetitive transcranial magnetic stimulation. For this purpose, an electrophysiological method is introduced that allows assessment of pathway specific corticospinal transmission, i.e. differentiation of fast, direct corticospinal pathways from polysynaptic connections.

Avaliação Não-invasiva de Alterações na Transmissão Corticomotoneuronal em Humanos

The corticospinal pathway is the major pathway connecting the brain with the muscles and is therefore highly relevant for movement control and motor ...

Denver Papillae Protocol for Objective Analysis of Fungiform Papillae

The goal of the Denver Papillae Protocol is to use a dichotomous key to define and prioritize the characteristics of fungiform papillae (FP) to ensure consistent scoring between scorers. This protocol builds off of a need that has arisen from the last two decades of taste research using FP as a proxy for taste pore density. FP density has historically been analyzed using Miller &#38; Reedy&#8217;s 1990 characterizations of their morphology: round, stained lighter, large, and elevated. In this work, the authors forewarned that stricter definitions of FP morphology needed to be outlined. Despite this call to action, follow up literature has been scarce, with most studies continuing to cite Miller &#38; Reedy&#8217;s original work. Consequently, FP density reports have been highly variable and, combined with small sample sizes, may contribute to the discrepant conclusions on the role of FP in taste sensitivity. The Genetics of Taste Lab explored this apparent inconsistency in counting and found that scorers were individually prioritizing the importance of these characteristics differently and had no guidance for when a papilla had some, but not all, of the reported qualities of FP. The result of this subjectivity is highly variable FP counts of the same tongue image. The Denver Papillae Protocol has been developed to remedy this consequence through use of a dichotomous key that further defines and prioritizes the importance of the characteristics put forth by Miller &#38; Reedy. The proposed method could help create a standard way to quantify FP for researchers in the field of taste and nutritional studies.

Here we present a protocol to measure fungiform papilla density from digital photographs. This method builds prioritization and objective characteristic metrics into the original descriptive work on fungiform papillae by Miller &#38; Reedy (1990).

Denver Papilas Protocolo para Objective Analysis de papilas fungiformes

The goal of the Denver Papillae Protocol is to use a dichotomous key to define and prioritize the characteristics of fungiform papillae (FP) to ensure ...

A Rapid Food-Preference Assay in Drosophila

To select food with nutritional value while avoiding the consumption of harmful agents, animals need a sophisticated and robust taste system to evaluate their food environment. The fruit fly, Drosophila melanogaster, is a genetically tractable model organism that is widely used to decipher the molecular, cellular, and neural underpinnings of food preference. To analyze fly food preference, a robust feeding method is needed. Described here is a two-choice feeding assay, which is rigorous, cost-saving, and fast. The assay is Petri-dish-based and involves the addition of two different foods supplemented with blue or red dye to the two halves of the dish. Then, ~70 prestarved, 2-4-day-old flies are placed in the dish and&#160;allowed to choose between blue and red foods in the dark for about 90 min. Examination of the abdomen of each fly is followed by the calculation of the preference index. In contrast to multiwell plates, each Petri dish takes only ~20 s to fill and saves time and effort. This feeding assay can be employed to quickly determine whether flies like or dislike a particular food.

A Rapid Food-Preference Assay in Drosophila

We present a protocol for a two-choice feeding assay for flies. This feeding assay is fast and easy to run and is suitable not only for small-scale laboratory research, but also for high-throughput behavioral screens in flies.

Um ensaio rápido de preferência alimentar em Drosophila

To select food with nutritional value while avoiding the consumption of harmful agents, animals need a sophisticated and robust taste system to evaluate ...