The authors are very thankful to the Federal Ministry of Education and Research (BMBF) of Germany for the funding of their work. Also, the authors thank Ines Lemser, Sylke Stahlberg, Ingolf R&#252;cknagel and all the other colleagues working in the team of the animal house (FLI, Germany) for their technical assistance with the bronchoscopies. They are very thankful to Maria-Christina Haase (FLI, Germany) for her help in providing literature. Furthermore, the authors wish to express their gratitude to Dr. Angela Berndt (FLI, Germany) and Nicolette Bestul (University of Wisconsin-River Falls) for critical reading of the manuscript.

Declaração de Ética Este estudo foi realizado em estrita conformidade com Europeu e Nacional de Direito para o Cuidado e Uso de Animais. O protocolo foi aprovado pelo Comitê de Ética de Experimentação Animal e Proteção Animal no Estado da Turíngia, Alemanha (Número da licença: 04-004/11). Todos os experimentos foram realizados sob a supervisão do agente institucional autorizado para a Proteção Animal. A broncoscopia foi rigorosamente realizada sob anestesia geral. Durante o estudo, todos os esforços foram feitos para minimizar o desconforto ou sofrimento. Observações gerais As técnicas descritas têm sido desenvolvidos para vitelos com cerca de 6-8 semanas de idade, pesando cerca de 60-80 kg. Para o uso em outras espécies de animais grandes ou bezerros diferentes em idade e peso corporal, as técnicas devem ser adaptados para se ajustarem ao tamanho e peso e ter em conta a anatomia do pulmão da espécie animal em particular. Tudomaterial utilizado deve ser estéril. Chlamydia psittaci é uma bactéria zoonótica que pode causar doença respiratória e em geral nos seres humanos. A não aviária C. psittaci tensão DC15 utilizado no presente protocolo deve ser tratado sob nível de biossegurança 2. Todo o trabalho com o patógeno e com animais infectados devem ser realizadas usando equipamentos de proteção individual, como um respirador, um macacão à prova de respingos de água, botas de borracha e luvas. Vestindo um respirador adequado é de grande importância, uma vez que a via natural de infecção por C. psittaci é Aerogen. Embalagem e rotulagem das amostras deve ser à prova de desinfecção uma vez que todas as coisas devem ser tratadas com um desinfetante eficaz contra clamídias de acordo com as instruções do fabricante antes de deixar a unidade de alojamento dos animais. 1. Preparando o animal para broncoscopia <ol><li> Determinar o peso do bezerro para a dosagem de anestésicos. </li><li> Coloque um intravenosa (IV) i acesson a veia jugular esquerda. </li><li> Em primeiro lugar, injecta-se lentamente xilazina (0,2 mg / kg de peso corporal) ao longo de aproximadamente 30 seg, em seguida, após sedação ocorre, injectar cetamina (2,0 mg / kg de peso corporal). </li><li> Levante o animal em cima da mesa e colocá-lo em decúbito lateral direito. Uma vez que o animal está devidamente posicionado sobre a mesa, verifique se o acesso IV ainda está em vigor e reajustar se necessário. Durante a anestesia, verificar regularmente o reflexo da pálpebra para determinar a profundidade da anestesia. </li><li> Uma vez que o animal está respirando de forma constante, ter alguém puxar a língua para fora e esticar o pescoço. Coloque um espéculo tubo de metal na boca do animal, usando movimentos leves de rotação. Empurre o espéculo para a frente sob o controle de vista, usando uma lanterna, até a laringe é visível. </li><li> Manter a anestesia ao longo de todo o procedimento endoscópico por injecção de um bolus de 7 mg de xilazina e 70 mg de cetamina, conforme necessário. </li></ol> . 2 a inoculação (Sites de inoculação: Figura 1) </p&gt; <ol><li> Preparar 3 seringas com inoculo, contendo 1, 2, e 5 ml de inoculo. </li><li> Insira um tubo de Teflon em canal de trabalho do endoscópio. O tubo não deve se projetam a partir da ponta do endoscópio. </li><li> Insira o endoscópio através do espéculo metal. Reajustes Ligeira do espéculo pode ser necessário para permitir a passagem da laringe. A traqueia brônquios, que se ramifica para o lado direito, ajuda a alinhar a imagem no monitor. </li><li> Introduzir a seringa com 5 ml de inoculo para a extremidade do tubo de Teflon. Navegue o tubo para os galhos onde o inóculo deve ser depositado e aplicar a quantidade desejada (pulmão direito: Lobus medius: 0,5 ml, Lobus accessorius: 0,5 ml, Lobus caudalis: 0,5 ml e 1,0 ml; Esquerda pulmão: cranial LoBus, Pars cranial : 0,5 ml, Pars caudal: 0,5 ml, Lobus caudalis: 1,5 ml). Fixe a seringa com 1 &amp;# 160; ml de inóculo para o tubo, em seguida, navegue até a traqueia brônquios e depositar o inóculo (cranial LoBus, Pars caudalis: 1,0 ml). É útil sempre aproximar as localizações na mesma ordem. </li><li> Remover o endoscópio e o espéculo. </li><li> Spray de 1 ml do inoculo em cada narina com um actuador. </li><li> Trazer o animal de volta para o estábulo e colocá-lo em posição de bruços para acordar. Não deixe o animal sozinho ou na companhia de outros animais até que ele recuperou a consciência suficiente para manter decúbito esternal. A recuperação deve ser estável com ar-condicionado, uma vez que a habilidade do animal para a termorregulação é reduzida sob anestesia geral. NOTA: Os primeiros sinais clínicos deve ocorrer cerca de 24-36 horas após a inoculação, dependendo do agente patogénico utilizada. </li></ol> . 3 Procedimentos de amostragem (locais de amostragem: Figura 2) <ol><li> Prepare o animal, tal como descrito nos passos 1,1-1,6. </li><li> O lavado broncoalveolar <ol><li> Colocar 5 seringas, contendo cada um 20 ml de solução salina isotónica estéril, em um banho de água e permitir que aqueça até cerca de 38 ° C. </li><li> Insira um cateter de lavagem em canal de trabalho do endoscópio, em seguida, insira o endoscópio para o espéculo de metal e navegar para a frente no brônquio principal do pulmão esquerdo até a posição &quot;cunha&quot; é alcançado onde o endoscópio não pode ser empurrado para mais longe à frente. </li><li> Um após o outro, coloque as seringas com a solução quente NaCl ao cateter lavagem, incutir o fluido e aspirar diretamente. O fluido de lavagem bronco-alveolar deverá ser armazenada em garrafas de vidro siliconados e colocar em gelo imediatamente após a recuperação para evitar que os macrófagos alveolares de unir à superfície do vidro. Nota tanto a quantidade de solução salina e instilados a quantidade de líquido recuperado. </li><li> Remover o cateter lavagem do canal de trabalho. </li></ol></li><li> Escovação brônquica<ol><li> Navegar no endoscópio para o local de amostragem pretendido, no protocolo descrito este é o Bifurcatio traqueias. </li><li> Cubra a escova com o tubo antes de inseri-lo em canal de trabalho do endoscópio até a ponta do pincel aparece no monitor. </li><li> Empurrar a escova com o tubo de plástico para a frente de cerca de 5 cm, e descobrir que a partir do tubo de plástico, empurrando o cabo, em seguida, ele navegue para a localização que está a ser escovado. </li><li> Esfregue fora chamadas epiteliais por gentilmente empurrando e puxando a escova para trás e para a frente durante a navegação do endoscópio para garantir o contato entre o pincel ea parede do brônquio. Pare de esfregar quando ocorre sangramento. Cubra a escova com o tubo antes de puxá-lo para fora do canal de trabalho. </li><li> Prepare-se para cinco esfregaços em lâminas de microscópio por suavemente ondulado a escova sobre o slide. Fixar os esfregaços em metanol frio por 10 min, o ar seco e armazenar a -20 ° C. </li><li> A escova pode ser lavado emdiversos meios de comunicação, dependendo da finalidade das células da amostra. Se tomar vários escovações com o mesmo pincel, certifique-se apenas lave-o nos meios de comunicação, que não irritam a mucosa. </li></ol></li><li> A biópsia pulmonar transbrônquica <ol><li> Navegar no endoscópio para o local de amostragem pretendido, no protocolo descrito este é o caudal Pars dos cranial LoBus. Antes de colocar a pinça de biópsia para o canal de trabalho aberto e fechá-lo um par de vezes para garantir que ele está funcionando sem problemas. </li><li> Empurre a pinça de biópsia para o ramo caudal do brônquio traqueal até encontrar uma resistência ocorre. Puxe 2-3 cm, abrir a pinça, empurrar para a frente cerca de 2 cm, fechar a pinça, puxar para trás e retire a pinça do canal de trabalho. Isso requer um pouco de prática. </li><li> Cuidadosamente remover o tecido a partir de uma pinça de biópsia, utilizando uma agulha ou uma pequena pinça. Em função da utilização do tecido, armazená-lo em nitr líquidoogen ou um meio de fixação adequado. Isso deve acontecer logo após a remoção para evitar processos de autólise. </li></ol></li><li> Tratamento pós-procedimento <ol><li> Trazer o animal de volta para o estábulo e colocá-lo em posição de bruços para acordar. Não deixe o animal sozinho ou na companhia de outros animais até que ele recuperou a consciência suficiente para manter decúbito esternal. A recuperação deve ser estável com ar-condicionado, uma vez que a habilidade do animal para a termorregulação é reduzida sob anestesia geral. </li><li> Monitorar o animal de perto para sinais de pneumotórax para a próxima 24 horas. Fornecer alimentação e água fresca quando o animal recuperou a consciência plena. </li></ol></li></ol>

Os autores não têm nada a revelar.

Um método de broncoscopia de inoculação foi desenvolvida e vários métodos de amostragem broncoscopia foram adaptados para serem utilizados em animais de grande porte, em condições experimentais. As técnicas descritas são fáceis de aprender, mesmo para examinadores com pouca experiência em endoscopia. O processo de broncoscopia é minimamente invasiva e sem efeitos adversos associados com os métodos da inoculação, bem como os métodos de amostragem descritos (BAL, biopsia pulmonar transbrônquica, escovagem brônquica), nunca foram observados em qualquer um dos animais. As complicações associadas com biópsias pulmonar transbrônquica em humanos estão sangrando e pneumotórax 48, nenhum deles foram observadas nos bezerros que foram submetidos a esse procedimento. A biópsia pulmonar transbrônquica é mais demorado e exige mais equipamentos do que o método transcutâneo, mas é menos invasivo e não assumir o risco de infecção da ferida. O método visualmente controlada, endoscópico de inoculaçãoião permite a deposição de uma quantidade definida de agente patogénico em sítios específicos do pulmão. Assim, resulta em achados clínicos e patológicos muito consistentes em todos os animais inoculados 32-34. No entanto, isso não se assemelha a todas as características de infecção natural em bovinos. Em um modelo de um C. respiratória infecção psittaci, a técnica descrita de inoculação levou a lesões pulmonares associadas aos locais de colocação patógeno 34, que, em infecções adquiridas naturalmente bezerros geralmente se desenvolvem pneumonia dos lobos apicais. Este facto tem que ser levado em conta ao interpretar a relevância dos resultados experimentais no contexto de infecções pulmonares naturais adquiridos em bovinos. Videoendoscópica BAL permite a amostragem de uma área definida do pulmão. Para fins experimentais, esta é uma vantagem em comparação com a utilização de um cateter nasal sob condições cegas. Devido à anatomia do pulmão de bovino, o cateter inserido cegamente seria impulsoed para o lóbulo direito do diafragma, na maioria dos casos, 53,54 e o examinador não tem nenhuma influência sobre a área do pulmão que está lavados. Outra vantagem da BAL endoscópica em bezerros anestesiados em decúbito lateral é a elevada taxa de recuperação média de fluido instilado de mais do que 80%. A comparação com outros estudos revelam que, em pé, bezerros sedados, uma recuperação de 133,3 ± 1,6 ml 46 e 127,13 ± 3,53 ml 45 após a instilação de 240 ml de líquido para o lobo caudal é relatado. Em vitelas sedados em decúbito esternal 51% do fluido instilado pode ser recuperado a partir do lobo cranial e 62% a partir do lobo caudal 43. Isto significa que aproximadamente a metade do líquido instilado poderia ser recuperado em posição vertical da panturrilha. Dependendo da quantidade de BALF necessário para posterior preparação de amostras, isso pode não deixar material suficiente para realizar todos os experimentos desejados. BAL em gado tem sido utilizado por vários grupos de pesquisa e muitosdiferentes parâmetros foram examinados sob várias condições. A maior parte dos autores realizaram lavagem dos lóbulos basais 43,45,46, mas a quantidade de líquido utilizada para a lavagem difere entre os grupos de pesquisa. Isto leva a inconsistências na diluição das células recuperadas, proteínas e outras substâncias, o que torna difícil comparar os resultados de diferentes publicações. Portanto, para o uso em bovinos, recomenda-se a lavagem com cinco fracções de 20 ml (ou seja, de 100 ml no total) do corpo quente, solução salina isotónica, que são recuperados imediatamente após a instilação. Quando se utiliza um cateter lavado com um grande diâmetro (isto é,&gt; 2 mm), o volume de cada fracção precisa de ser ligeiramente aumentada, dependendo da quantidade de líquido que permanece no cateter. A anatomia altamente segmentado do pulmão bovino leva a uma limitação metódico; os resultados obtidos a partir de uma parte do pulmão pode não ser verdadeiro para o resto do pulmão. Uma vez que não há écontrole de vista a área de todo pulmão sondado por biópsia transbrônquica e lavado, o examinador não pode saber se as áreas amostradas eram saudáveis ​​ou doentes. Portanto, é muito importante amostrar locais onde o fungo foi inoculado antes, a fim de ter uma taxa de recuperação mais elevada do agente patogénico e que têm uma possibilidade mais elevada de amostragem áreas pulmonares doentes. Outra limitação é o aumento do risco anestésico em animais de má condição clínica. Os métodos descritos devem ser utilizados apenas em modelos de doença leve a moderada para manter o peso para os animais tão baixas quanto possível. Anestesia geral em ruminantes deve sempre ser o mais curto possível, como o desenvolvimento de gás no rúmen aumenta o risco anestésico nestas espécies. Os animais devem ser colocados em decúbito ventral, imediatamente após a broncoscopia para permitir o efluxo do gás desenvolvido e tem de ser cuidadosamente monitorizado até que sejam completamente recuperado da anestesia. Além disso, as técnicas descritas não são suitasável por amostragem intervalos de menos de 24 horas. O protocolo descrito pode ser adaptado a outros agentes infecciosos. Inoculação endoscópica de vários agentes patogénicos tem sido descrito, tal como C. psittaci 32-34, Pasteurella haemolytica 38-40,42, Haemophilus somni 55, e vírus da diarréia viral bovina 44. Além disso, os locais de depósito do patógeno no pulmão pode ser adaptada para o modelo desejado. Ao escolher os locais de amostragem, alguns fatos importantes devem ser levados em conta: locais (i) A amostragem deve ser escolhido com base nos locais de inoculação e nos achados patológicos esperados. (Ii) Quando a necropsia deve ser realizada é preciso ter cuidado para deixar suficientes áreas pulmonares não amostrados para ex vivo de amostragem. (Iii) os locais de pontos de amostragem deve ser escolhida de modo que pode ser alcançado com o equipamento. Especialmente para a biópsia pulmonar transbrônquica, há limitações devido ao comprimento da pinça de biópsia. (Iv) Tele ordem de amostragem é importante, escovado brônquico e biópsia pulmonar transbrônquica pode levar a pequenos sangramentos, o que contaminaria a LBA. Portanto, LBA deve ser sempre obtido em primeiro lugar. Quando se utiliza o protocolo de outras espécies, a anatomia do pulmão específica da espécie devem ser tidas em conta.

Os Valores de grandes modelos animais na investigação biomédica Na pesquisa biomédica interdisciplinar moderno, modelos animais ainda são indispensáveis ​​para elucidar interações complexas - relacionado à saúde ou um estado da doença - dentro de organismos de mamíferos. Apesar de 17 prêmios Nobel a ser concedido a cientistas que estudaram o gado, cavalos, ovelhas, ou aves como modelos para a investigação biomédica 1, hoje em dia a grande maioria das experiências com animais sejam realizados com roedores, enquanto que menos de 1% dos estudos estão a trabalhar com os animais domésticos ou pecuária. Pequenos animais oferecem muitas vantagens práticas (ou seja, de baixo custo, maleabilidade genética, alta produtividade, disponibilidade de numerosos genética e ferramentas imunológicas e kits), e modelos murinos geneticamente modificados são geralmente aceitos para realizar estudos sobre os mecanismos descobrindo caminhos moleculares específicos. Na pesquisa biomédica de sistemas complexos, tele relevância biológica e utilidade clínica dos modelos de ratos está se tornando cada vez mais questionável. Eles poderiam ser enganosa e assumir o risco de excessiva simplificação da complexidade biológica 2-9. Devido às peculiaridades inter-espécies, há espécies animais individuais irá espelhar completamente a situação humana, e a utilização de mais de um modelo parece ser benéfica em uma abordagem de pesquisa interdisciplinar biomédica. No contexto da medicina translacional, animais de grande porte oferecem a oportunidade de servir como modelos comparativos fornecendo resultados com alta relevância biológica de dupla utilização para a saúde humana e animal 1. Notavelmente, o genoma humano está mais intimamente se assemelhavam com o genoma bovino de pelo genoma de roedores de laboratório. Também foi recentemente confirmado que, em comparação com outros taxa, o genoma dos ratos é muito mais rearranjado 10-12. Em um projeto de estudo complexo, o uso de animais oferece a unique oportunidade de, estudos intra-individuais de longa duração por recolha repetida de uma variedade de amostras in vivo a partir de um e de o mesmo individuum sem sacrificar o animal. Portanto, as alterações funcionais, inflamatórias e morfológicas podem ser monitorizados para o mesmo indivíduo ao longo de um certo período de tempo 13. O pulmão bovino como um modelo respiratório adequado Devido ao elevado número de diferenças significativas na anatomia do pulmão, fisiologia respiratória, e imunologia pulmonar, os ratos não se reproduzem muitos aspectos fisiopatológicos importantes da doença pulmonar humana. Isto deve ser tomado em conta quando se utiliza como modelos animais de doença respiratória 2,9,14-16. Embora peculiaridades da anatomia e estrutura que existem para cada pulmão de mamíferos, características funcionais (ou seja, os volumes pulmonares, fluxos de ar e mecânica respiratória) são mais comparáveis ​​entre seres humanos adultos e bezerros devido ao peso corporal semelhantes(50-100 kg). As características do pulmão bovino específicos das espécies, estão resumidos como se segue: o pulmão esquerdo consiste em dois lóbulos (cranialis LoBus, que é dividido em dois segmentos, e lobus caudalis), enquanto o pulmão direito consiste de quatro lóbulos (lobus cranial, lobus medius, lobus caudalis e lobus accessorius). Ao contrário da anatomia do pulmão da maioria dos outros mamíferos, os brônquios dos ramos lobo cranial direito diretamente da lateral direita da traquéia. No que diz respeito ao subgross anatomia, o pulmão de bovino apresenta um elevado grau de lobulação e uma elevada percentagem de tecido intersticial 17,18 conduzindo a um nível relativamente baixo da complacência pulmonar específica e uma resistência do tecido pulmonar superior 19. Portanto, a actividade de respiração necessário é bastante elevado em comparação com outras espécies de 20,21. O elevado grau de lobulação conduz a uma forte independência dos segmentos. Assim, infprocessos lammatory são limitados por septos do tecido conjuntivo, e segmentos doentes e saudáveis, muitas vezes se encontram dentro do mesmo lobo. Devido à falta de vias colaterais, o pulmão de bovino é particularmente adequada para espelhar disfunções pulmonares obstrutivas 13. Em relação à vasculatura do pulmão de bovino, as pequenas artérias pulmonares mostram camadas de músculo liso muito proeminentes. Portanto, o vitelo pode também servir como um modelo animal bem estabelecido para a hipertensão pulmonar ou remodelação vascular 22-24. Com relação às infecções respiratórias, doenças que ocorrem naturalmente existem em gado que compartilham muitas semelhanças com a doença comparável no homem. Exemplos típicos são a tuberculose bovina 25, o vírus sincicial respiratório (VSR) infecções em bezerros 26-28, ou infecções de clamídia naturalmente adquiridas 29. Assim, as grandes modelos animais que se assemelham a situação no hospedeiro natural. Portanto, eles são mais useful para o estudo de interações patógeno-hospedeiro e complexa fisiopatologia da doença correspondente em seres humanos 30,31. Como um modelo biologicamente relevante de infecção Chlamydia psittaci respiratória, os bezerros foram escolhidos por bovinos representam hospedeiros naturais para este patógeno 32-35. As informações obtidas a partir deste modelo, com relação a patogênese da doença ou possíveis vias de transmissão entre animais e seres humanos, vai ajudar a ampliar o nosso conhecimento com impacto tanto para o gado eo homem. O modelo também pode ajudar a verificar se as opções terapêuticas alternativas geralmente aceites e para a eliminação de C. pulmonar infecções psittaci, que é, mais uma vez, de interesse em medicina veterinária e humana. Técnicas aplicadas e amostras obtidas a partir do Sistema Respiratório Bovino Este artigo descreve e ilustra as técnicas e métodos de diagnóstico applicable para o pulmão de bovino e utilizados no nosso modelo para avaliar ambos os efeitos do patogénio no pulmão de mamífero e a eficácia da intervenção terapêutica. A broncoscopia foi realizada na medicina humana desde os anos 1960 e é considerado um procedimento seguro 36. Em vitelas, broncoscopia experimental foi descrita em 1968, pela primeira vez 37. A aplicação intrabrônquico de patógenos foi sugerido por Potgieter et al. Como um método confiável para a produção de doença do trato respiratório inferior em bezerros 38 e é agora um método generalizado na pesquisa bovina 34,39,40. Inoculação intrabronquial de uma quantidade definida do patógeno sob controlo videoendoscópico permite a colocação selectiva do agente infeccioso no pulmão. Isto leva a achados clínicos e patológicos consistentes em todos os animais 34 e permite amostragem orientada de regiões pulmonares que se espera que sejam alteradas devido à exposição de patógenos. <pclasse = &quot;jove_content&quot;&gt; broncoalveolar fluido de lavagem (LBA), é um indicador bem descrita para a presença e gravidade de inflamação pulmonar. A lavagem broncoalveolar (BAL) é um procedimento padrão na medicina humana, para o diagnóstico de uma variedade de doenças respiratórias 41. Em bovinos vivos, BAL foi introduzido por Wilkie e Markham no final dos anos setenta do século passado 42. Considerou-se uma técnica segura e reprodutível para estudar o tracto respiratório inferior de gado. Devido à falta de dados suficientes sobre os parâmetros LBA em animais saudáveis, em 1988 Pringle et al. Realizada BAL em bezerros saudáveis ​​com um broncoscópio de fibra óptica flexível. Os autores também apontou a necessidade de padronizar os protocolos de BAL em condições experimentais para a aquisição de resultados comparáveis ​​43. BAL é ainda usado como um método in vivo de amostragem em bezerros 44-46. Escovação brônquica é comumente usado em medicina humana como umferramenta de diagnóstico para provar lesões neoplásicas ou para análise microbiológica 36. Para os fins da pesquisa, as culturas de células primárias de células epiteliais colhidas por escovagem citológica pode ser obtido 47. Em gado, o uso de escovagens brônquicas para análise microbiológica foi descrito para caracterizar o ambiente microbiano do pulmão 43. A biópsia pulmonar transbrônquica fornece amostras de tecido do pulmão e é uma valiosa ferramenta de diagnóstico para doenças pulmonares difusas em seres humanos. Pneumotórax iatrogênica e hemorragia relacionada ao procedimento são as complicações associadas com esta técnica. A sua incidência é relatado como sendo inferior a um por cento em pacientes humanos 48. Biopsia do pulmão transbrônquica não é um método comum para a utilização em bovinos, devido ao elevado custo do equipamento necessário e o tempo necessário para obter biópsias. Em vez disso, biópsias pulmonares transcutânea são mais convenientes em condições de campo 49-51.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="1174">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:192px;">Veterinary Video Endoscope</td>
			<td style="width:419px;">Karl Storz GmbH &#38; Co. KG, Tuttlingen, Germany</td>
			<td style="width:121px;">PV-SG 22&#8211;140</td>
			<td style="width:443px;">diameter: 9 mm, working channel: 2,2 mm, working length 140 cm</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">lavage catheter&#160;</td>
			<td>Karl Storz GmbH &#38; Co. KG, Tuttlingen, Germany</td>
			<td></td>
			<td>diameter: 2 mm; length: 180 cm, Luer-lock-adapter</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">acuator</td>
			<td>WEPA Apothekenbedarf GmbH &#38; Co KG, Hillscheid, Germany</td>
			<td>32660</td>
			<td>length: 60 mm</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">biopsy forceps</td>
			<td>Karl Storz GmbH &#38; Co. KG, Tuttlingen, Germany</td>
			<td>REF 60180LT</td>
			<td>1.8 mm, serrated, oval</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Omnifix 20 ml, Luer-Lock</td>
			<td>B. Braun Melsungen AG, Melsungen, Germany</td>
			<td>4617207V</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">cytology brush</td>
			<td>mtp GmbH, Neuhausen ob Eck, Germany</td>
			<td>110240-10&#160;</td>
			<td>working length 180 cm, brush length: 15 mm, diameter 1.8 mm</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">iv acess&#160;</td>
			<td>Henry Schein Vet GmbH, Hamburg, Germany</td>
			<td>370-211</td>
			<td>diameter 1.2 mm, length 43 mm</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Rompun 2% (xylazin)</td>
			<td>Bayer Vital GmbH, Leverkusen, Germany</td>
			<td></td>
			<td>0.2 mg/kg bodyweight</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Ketamin 10% (ketamine)</td>
			<td>bela-pharm GmbH &#38; Co. KG, Vechta, Germany</td>
			<td></td>
			<td>2.0 mg/kg bodyweight</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">isotonic saline solution</td>
			<td>B. Braun Melsungen AG, Melsungen, Germany</td>
			<td>3200950</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">SUB 6 waterbath</td>
			<td>CLF analytische Laborger&#228;te GmbH, Emersacker, Germany</td>
			<td>n/a</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">metal tube speculum&#160;</td>
			<td>n/a</td>
			<td>n/a</td>
			<td>diameter: 3.5 cm, length: 35 cm</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">flashlight</td>
			<td>n/a</td>
			<td>n/a</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">siliconized glass bottles</td>
			<td>n/a</td>
			<td>n/a</td>
			<td>siliconize with Sigmacote (Sigma-Aldrich Co. LLC)</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Omnifix Luer 3 ml</td>
			<td>B. Braun Melsungen AG, Melsungen, Germany</td>
			<td>4616025V</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Omnifix Luer 5 ml</td>
			<td>B. Braun Melsungen AG, Melsungen, Germany</td>
			<td>4616057V</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">sealing plugs</td>
			<td>Henry Schein Vet GmbH, Hamburg, Germany</td>
			<td>900-3057</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">inoculum</td>
			<td></td>
			<td>n/a</td>
			<td>dilute pathogen in 8mL buffer</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

the bovine lung in biomedical research: visually guided bronchoscopy, intrabronchial inoculation and in vivo sampling techniques

Há uma busca permanente de modelos animais alternativos na pesquisa da medicina respiratória. Dependendo do objetivo da pesquisa, os grandes animais como modelos de doença pulmonar muitas vezes se assemelham a situação do pulmão humano muito melhor do que os ratos fazem. Trabalhando com grandes animais também oferece a oportunidade de saborear o mesmo animal várias vezes ao longo de um determinado curso de tempo, o que permite que os estudos a longo prazo, sem sacrificar os animais. O objetivo foi o de estabelecer métodos in vivo de amostragem para o uso em um modelo de bovinos de uma infecção Chlamydia psittaci respiratório. A amostragem deve ser efectuada em vários pontos de tempo em cada animal durante o estudo, e as amostras devem ser adequados para estudar a resposta do hospedeiro, bem como o agente patogénico, em condições experimentais. A broncoscopia é uma valiosa ferramenta de diagnóstico em medicina humana e veterinária. É um procedimento seguro e minimamente invasivo. Este article descreve a inoculação intrabrônquico de bezerros, bem como métodos de amostragem para o trato respiratório inferior. Videoendoscópica, inoculação intrabrônquico leva a achados clínicos e patológicos muito consistentes em todos os animais inoculados e é, portanto, adequado para uso em modelos de doença pulmonar infecciosa. Os métodos de amostragem descritos são lavado bronco-alveolar, escovado brônquico e biópsia pulmonar transbrônquica. Todos estes são valiosas ferramentas de diagnóstico em medicina humana e poderiam ser adaptados para fins experimentais para bezerros com idade de 6-8 semanas. As amostras obtidas foram adequados para a detecção de agentes patogénicos e caracterização da gravidade da inflamação do pulmão no hospedeiro.

Curso da doença O efeito do patógeno sobre a saúde dos animais pode ser avaliada por exame clínico. Nos nossos modelos de infecção respiratória, os animais foram examinados duas vezes ao dia e de observações clínicas foram registadas utilizando um sistema de pontuação. Informações adicionais foram capturados através da realização de outros métodos in vivo de amostragem, por exemplo, coleta de sangue e swabs ou medição da função pulmonar. Exames patológicos foram realizados em diferentes pontos de tempo após a inoculação, para descrever o progresso da infecção 32-34. BALF Taxa de Recuperação A taxa de recuperação do líquido instilado foi 83,05 ± 4,58% (média ± DP). Pathogen Detection Recultivo do agente patogénico pode ser realizada a partir de escovagens brônquicas. Além disso, a PCR de rastreio de várias amostras é possível detectar o agente patogénico, por exemplo, tibiópsia ssue, amostra citologia, células-LBA 52 ou faringe cotonete. A visualização do patógeno é possível através da realização de imuno-histoquímica de secções congeladas de biópsias pulmonares e preparações de sedimentação das células-LBA (Figura 3). Em experiências anteriores, por PCR de amostras de sangue e compressas (conjuntival, fecal, nasal) foram realizados para caracterizar a propagação e disseminação de agente patogénico 32. Marcadores de inflamação local do tecido pulmonar No LBA, vários parâmetros de inflamação pulmonar pode ser estudada. A contagem total de células e a percentagem de neutrófilos aumenta geralmente quando a inflamação pulmonar está presente. Para a diferenciação de células, preparações de sedimentação de células-LBA pode ser corado com Giemsa e diferenciadas com imersão em óleo (Figura 4). Proporções celulares e líquida da LBA são separadas por centrifugação (300 xg, 20 min). O LBA-Sobrenadante contém vários marcadores que mudam durante processos inflamatórios no pulmão e podem ser estudadas em condições experimentais. Exemplos são a proteína total e eicosanóides 29,34. Uma visão geral esquemática do potencial utilização posterior das amostras descritas é mostrada na Figura 5. <img alt="Figura 1" fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/51557/51557fig1highres.jpg" width="500" /> Figura 1. Esquema do pulmão de bovino com locais de inoculação (amarelo). Os números indicam a ordem em que o inoculo é administrado em diferentes brônquios. R: right; L: esquerda. Pulmão direito: 1 Lobus medius: 0,5 ml, 2 Lobus accessorius: 0,5 ml, 3 LoBus caudalis: 0,5 ml e 1,0 ml 4; Pulmão esquerdo: cranial LoBus, <strong&gt; 5 Pars cranial: 0,5 ml, 6 Pars caudalis: 0,5 ml, 7 Lobus caudalis: 1,5 ml, 8 cranial LoBus, Pars caudalis: 1,0 ml. <img alt="Figura 2" fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/51557/51557fig2highres.jpg" width="500" /> . Figura 2 Esquema do pulmão bovino com os locais de inoculação (amarelo) e os locais de amostragem:. Lavado bronco-alveolar (azul), escovação brônquica (verde), e biópsia pulmonar (laranja) Note-se que todas as amostras são obtidas de regiões onde o patógeno foi depositado antes. R: direita, L: esquerda. <img alt="Figura 3" fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/51557/51557fig3highres.jpg" width="500" /> Figura 3. A) A biópsia pulmonar a partir de um bezerro inoculado com Chl<html> amydia psittaci 4 dias após a inoculação (dpi), b), os sedimentos celulares de FLBA de um bezerro inoculados com C. psittaci 9 dpi. Imunohistoquímica para clamídias. Inclusões por clamídia (setas) estão presentes no pulmão (a) e em macrófagos alveolares (b). Contracorante hematoxilina. <img alt="Figura 4" fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/51557/51557fig4highres.jpg" width="500" /> Figura 4. Sedimento celular de LBA de um bezerro inoculados com C. psittaci 9 dpi. macrófagos alveolares (#) são o tipo de célula predominante no LBA. A quantidade de granulócitos neutrófilos (*) aumenta quando os processos inflamatórios estão presentes. Coloração Pappenheim Modificada. &quot;width =&quot; 600 es.jpg &quot;/&gt; Figura 5. Possíveis métodos para a preparação de amostras. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/51557/51557fig5highres.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>

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The Bovine Lung in Biomedical Research: Visually Guided Bronchoscopy, Intrabronchial Inoculation and In Vivo Sampling Techniques

Este artigo descreve técnicas de broncoscopia no pulmão bovino em condições experimentais, ou seja, a inoculação broncoscopicamente guiada, lavado bronco-alveolar, escovado brônquico e biópsia pulmonar transbrônquica.

O pulmão bovino em Investigação Biomédica: visualmente guiada Broncoscopia, intrabrônquico Inoculação e<em&gt; In Vivo</em&gt; Técnicas de Amostragem

There is an ongoing search for alternative animal models in research of respiratory medicine. Depending on the goal of the research, large animals as ...

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The Bovine Lung in Biomedical Research: Visually Guided Bronchoscopy, Intrabronchial Inoculation and In Vivo Sampling Techniques

23.0K visualizações.  Friedrich-Loeffler-Institut.  Este artigo descreve técnicas de broncoscopia no pulmão bovino em condições experimentais, ou seja, a inoculação broncoscopicamente guiada, lavado bronco-alveolar, escovado brônquico e biópsia pulmonar transbrônquica. 

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Making Sense of Listening: The IMAP Test Battery

The ability to hear is only the first step towards making sense of the range of information contained in an auditory signal. Of equal importance are the abilities to extract and use the information encoded in the auditory signal. We refer to these as listening skills (or auditory processing AP). Deficits in these skills are associated with delayed language and literacy development, though the nature of the relevant deficits and their causal connection with these delays is hotly debated.
When a child is referred to a health professional with normal hearing and unexplained difficulties in listening, or associated delays in language or literacy development, they should ideally be assessed with a combination of psychoacoustic (AP) tests, suitable for children and for use in a clinic, together with cognitive tests to measure attention, working memory, IQ, and language skills. Such a detailed examination needs to be relatively short and within the technical capability of any suitably qualified professional. Current tests for the presence of AP deficits tend to be poorly constructed and inadequately validated within the normal population. They have little or no reference to the presenting symptoms of the child, and typically include a linguistic component. Poor performance may thus reflect problems with language rather than with AP. To assist in the assessment of children with listening difficulties, pediatric audiologists need a single, standardized child-appropriate test battery based on the use of language-free stimuli.
We present the IMAP test battery which was developed at the MRC Institute of Hearing Research to supplement tests currently used to investigate cases of suspected AP deficits. IMAP assesses a range of relevant auditory and cognitive skills and takes about one hour to complete. It has been standardized in 1500 normally-hearing children from across the UK, aged 6-11 years. Since its development, it has been successfully used in a number of large scale studies both in the UK and the USA. IMAP provides measures for separating out sensory from cognitive contributions to hearing. It further limits confounds due to procedural effects by presenting tests in a child-friendly game-format. Stimulus-generation, management of test protocols and control of test presentation is mediated by the IHR-STAR software platform. This provides a standardized methodology for a range of applications and ensures replicable procedures across testers. IHR-STAR provides a flexible, user-programmable environment that currently has additional applications for hearing screening, mapping cochlear implant electrodes, and academic research or teaching.

A test battery (IMAP) for performing an in-depth assessment of auditory and cognitive abilities contributing to listening skills is described. It is quick to administer, child-friendly and free from linguistic confounds. Stimulus generation and protocol management are controlled via a software platform (IHR-STAR) to ensure replicable procedures.

Making Sense of Listening: A bateria de testes IMAP

The ability to hear is only the first step towards making sense of the range of information contained in an auditory signal. Of equal importance are the ...

Medicina

Method of Isolated Ex Vivo Lung Perfusion in a Rat Model: Lessons Learned from Developing a Rat EVLP Program

The number of acceptable donor lungs available for lung transplantation is severely limited due to poor quality. Ex-Vivo Lung Perfusion (EVLP) has allowed lung transplantation in humans to become more readily available by enabling the ability to assess organs and expand the donor pool. As this technology expands and improves, the ability to potentially evaluate and improve the quality of substandard lungs prior to transplant is a critical need. In order to more rigorously evaluate these approaches, a reproducible animal model needs to be established that would allow for testing of improved techniques and management of the donated lungs as well as to the lung-transplant recipient. In addition, an EVLP animal model of associated pathologies, e.g., ventilation induced lung injury (VILI), would provide a novel method to evaluate treatments for these pathologies. Here, we describe the development of a rat EVLP lung program and refinements to this method that allow for a reproducible model for future expansion. We also describe the application of this EVLP system to model VILI in rat lungs. The goal is to provide the research community with key information and &#8220;pearls of wisdom&#8221;/techniques that arose from trial and error and are critical to establishing an EVLP system that is robust and reproducible.

Method of Isolated Ex Vivo Lung Perfusion in a Rat Model: Lessons Learned from Developing a Rat EVLP Program

Ex-Vivo Lung Perfusion (EVLP) has allowed lung transplantation in humans to become more readily available by enabling the ability to assess organs and expand the donor pool. Here, we describe the development of a rat EVLP program and refinements that allow for a reproducible model for future expansion.

Método de Isolado<em&gt; Ex Vivo</em&gt; Perfusão pulmonar em um modelo de rato: Lições aprendidas com o desenvolvimento de um Programa PPEV Rat

The number of acceptable donor lungs available for lung transplantation is severely limited due to poor quality. Ex-Vivo Lung Perfusion (EVLP) has allowed ...

Depletion of Mouse Cells from Human Tumor Xenografts Significantly Improves Downstream Analysis of Target Cells

The use of in vitro cell line models for cancer research has been a useful tool. However, it has been shown that these models fail to reliably mimic patient tumors in different assays1. Human tumor xenografts represent the gold standard with respect to tumor biology, drug discovery, and metastasis research 2-4. Tumor xenografts can be derived from different types of material like tumor cell lines, tumor tissue from primary patient tumors4 or serially transplanted tumors. When propagated in vivo, xenografted tissue is infiltrated and vascularized by cells of mouse origin. Multiple factors such as the tumor entity, the origin of xenografted material, growth rate and region of transplantation influence the composition and the amount of mouse cells present in tumor xenografts. However, even when these factors are kept constant, the degree of mouse cell contamination is highly variable.
Contaminating mouse cells significantly impair downstream analyses of human tumor xenografts. As mouse fibroblasts show high plating efficacies and proliferation rates, they tend to overgrow cultures of human tumor cells, especially slowly proliferating subpopulations. Mouse cell derived DNA, mRNA, and protein components can bias downstream gene expression analysis, next-generation sequencing, as well as proteome analysis 5. To overcome these limitations, we have developed a fast and easy method to isolate untouched human tumor cells from xenografted tumor tissue. This procedure is based on the comprehensive depletion of cells of mouse origin by combining automated tissue dissociation with the benchtop tissue dissociator and magnetic cell sorting. Here, we demonstrate that human target cells can be can be obtained with purities higher than 96% within less than 20 min independent of the tumor type.

Human tumor xenografts are vascularized and infiltrated by cells of mouse origin during the growth phase in vivo. To circumvent the bias caused by these contaminating cells during downstream analysis, we developed a method allowing for comprehensive depletion of all mouse cells by magnetic cell sorting.

Depleção de células do rato de xenoenxertos de tumor humano Melhora Significativamente Análise Downstream de células alvo

The use of in vitro cell line models for cancer research has been a useful tool. However, it has been shown that these models fail to reliably mimic ...

Phosphorus-31 Magnetic Resonance Spectroscopy: A Tool for Measuring In Vivo Mitochondrial Oxidative Phosphorylation Capacity in Human Skeletal Muscle

Skeletal muscle mitochondrial oxidative phosphorylation (OXPHOS) capacity, which is critically important in health and disease, can be measured in vivo and noninvasively in humans via phosphorus-31 magnetic resonance spectroscopy (31PMRS). However, the approach has not been widely adopted in translational and clinical research, with variations in methodology and limited guidance from the literature. Increased optimization, standardization, and dissemination of methods for in vivo 31PMRS would facilitate the development of targeted therapies to improve OXPHOS capacity and could ultimately favorably impact cardiovascular health. 31PMRS produces a noninvasive, in vivo measure of OXPHOS capacity in human skeletal muscle, as opposed to alternative measures obtained from explanted and potentially altered mitochondria via muscle biopsy. It relies upon only modest additional instrumentation beyond what is already in place on magnetic resonance scanners available for clinical and translational research at most institutions. In this work, we outline a method to measure in vivo skeletal muscle OXPHOS. The technique is demonstrated using a 1.5 Tesla whole-body MR scanner equipped with the suitable hardware and software for 31PMRS, and we explain a simple and robust protocol for in-magnet resistive exercise to rapidly fatigue the quadriceps muscle. Reproducibility and feasibility are demonstrated in volunteers as well as subjects over a wide range of functional capacities.

Phosphorus-31 Magnetic Resonance Spectroscopy: A Tool for Measuring In Vivo Mitochondrial Oxidative Phosphorylation Capacity in Human Skeletal Muscle

This work demonstrates the feasibility of an in vivo phosphorus-31 magnetic resonance spectroscopy (31PMRS) technique to quantify mitochondrial oxidative phosphorylation (OXPHOS) capacity in human skeletal muscle.

Fósforo-31 Magnetic Resonance Spectroscopy: uma ferramenta para medir<em&gt; In Vivo</em&gt; Capacidade mitocondrial fosforilação oxidativo no músculo esquelético humano

Skeletal muscle mitochondrial oxidative phosphorylation (OXPHOS) capacity, which is critically important in health and disease, can be measured in vivo ...

Sampling Strategies and Processing of Biobank Tissue Samples from Porcine Biomedical Models

In translational medical research, porcine models have steadily become more popular. Considering the high value of individual animals, particularly of genetically modified pig models, and the often-limited number of available animals of these models, establishment of (biobank) collections of adequately processed tissue samples suited for a broad spectrum of subsequent analyses methods, including analyses not specified at the time point of sampling, represent meaningful approaches to take full advantage of the translational value of the model. With respect to the peculiarities of porcine anatomy, comprehensive guidelines have recently been established for standardized generation of representative, high-quality samples from different porcine organs and tissues. These guidelines are essential prerequisites for the reproducibility of results and their comparability between different studies and investigators. The recording of basic data, such as organ weights and volumes, the determination of the sampling locations and of the numbers of tissue samples to be generated, as well as their orientation, size, processing and trimming directions, are relevant factors determining the generalizability and usability of the specimen for molecular, qualitative, and quantitative morphological analyses. Here, an illustrative, practical, step-by-step demonstration of the most important techniques for generation of representative, multi-purpose biobank specimen from porcine tissues is presented. The methods described here include determination of organ/tissue volumes and densities, the application of a volume-weighted systematic random sampling procedure for parenchymal organs by point-counting, determination of the extent of tissue shrinkage related to histological embedding of samples, and generation of randomly oriented samples for quantitative stereological analyses, such as isotropic uniform random (IUR) sections generated by the &#34;Orientator&#34; and &#34;Isector&#34; methods, and vertical uniform random (VUR) sections.

The practical application and performance of methods for generation of representative tissue samples of porcine animal models for a broad spectrum of downstream analyses in biobank projects are demonstrated, including volumetry, systematic random sampling, and differential processing of tissue samples for qualitative and quantitative morphologic and molecular analyses types.

Estratégias de amostragem e processamento de amostras de tecido do Biobanco de suínos modelos biomédicos

In translational medical research, porcine models have steadily become more popular. Considering the high value of individual animals, particularly of ...

Direct Intrabronchial Administration to Improve the Selective Agent Deposition Within the Mouse Lung

Intratracheal (IT) administration of experimental agents is an essential technique in murine models of diffuse lung diseases, such as bleomycin-induced pulmonary fibrosis.&#160; However, distribution of intratracheally-administered agents to the distal mouse lung is often asymmetric, with lung parenchymal concentrations increased in the smaller (but equally accessible) left lung of the mouse.&#160; Described in this report is a novel intrabronchial (IB) approach to cannulate the left and/or right lungs of living mice non-operatively.&#160; It is also demonstrated how this approach can be used to selectively administer agents to one lung or adapted (via dose-adjusted IB delivery) to improve the left-right symmetry of lung delivery of experimental agents, thereby improving models of diffuse lung disease such as bleomycin-induced pulmonary fibrosis.

Intratracheal (IT) administration of experimental agents in mice often results in asymmetric delivery to the distal lungs.&#160; In this report, we describe a direct intrabronchial (IB) approach to cannulate each lung in living mice non-operatively.&#160; This approach can be used to selectively administer agents to one lung or may be adapted to improve the symmetric agent delivery to both lungs.

Administração Intrabronquial direta para melhorar a deposição do agente seletivo dentro do pulmão do rato

Intratracheal (IT) administration of experimental agents is an essential technique in murine models of diffuse lung diseases, such as bleomycin-induced ...

On-Site Sampling and Extraction of Brain Tumors for Metabolomics and Lipidomics Analysis

Despite the variety of tools available for cancer diagnosis and classification, methods that enable fast and simple characterization of tumors are still in need. In recent years, mass spectrometry has become a method of choice for untargeted profiling of discriminatory compound as potential biomarkers of a disease. Biofluids are generally considered as preferable matrices given their accessibility and easier sample processing while direct tissue profiling provides more selective information about a given cancer. Preparation of tissues for the analysis via traditional methods is much more complex and time-consuming, and, therefore, not suitable for fast on-site analysis. The current work presents a protocol combining sample preparation and extraction of small molecules on-site, immediately after tumor resection. The sampling device, which is of the size of an acupuncture needle, can be inserted directly into the tissue and then transported to the nearby laboratory for instrumental analysis. The results of metabolomics and lipidomics analyses demonstrate the capability of the approach for the establishment of phenotypes of tumors related to the histological origin of the tumor, malignancy, and genetic mutations, as well as for the selection of discriminating compounds or potential biomarkers. The non-destructive nature of the technique permits subsequent performance of routinely used tests e.g., histological tests, on the same samples used for SPME analysis, thus enabling attainment of more comprehensive information to support personalized diagnostics.

The manuscript presents on-site sampling of human brain tumors with solid phase microextraction followed by their biochemical profiling towards the discovery of biomarkers.

Amostragem e Extração de Tumores Cerebrais no local para análise metabolômica e lipidômica

Despite the variety of tools available for cancer diagnosis and classification, methods that enable fast and simple characterization of tumors are still ...

Ex Vivo and In Vivo Animal Models for Mechanical and Chemical Injuries of Corneal Epithelium

Corneal injury to the ocular surface, including chemical burn and trauma, may cause severe scarring, symblepharon, corneal limbal stem cells deficiency, and result in a large, persistent corneal epithelial defect. Epithelial defect with the following corneal opacity and peripheral neovascularization result in irreversible visual impairment and hinder future management, especially keratoplasty. Since the animal model can be used as an effective drug development platform, models of corneal injury to the mouse and alkali burn to rabbit corneal epithelium are developed here. New Zealand white rabbit is used in the alkali burn model. Different concentrations of sodium hydroxide can be applied onto the central circular area of the cornea for 30 s under intramuscular and topical anesthesia. After copious isotonic normal saline irrigation, residual loose corneal epithelium was removed with corneal burr deep down to the Bowman's layer within this circular area. Wound healing was documented by fluorescein staining under Cobalt blue light. C57BL/6 mice were used in the traumatic model of murine corneal epithelium. The murine central cornea was marked using a skin punch, 2 mm in diameter, and then debrided by a corneal rust ring remover with a 0.5 mm burr under a stereomicroscope. These models can be prospectively used to validate the therapeutic effect of eye drops or mixed agents such as stem cells, which potentially facilitate corneal epithelial regeneration. By observing corneal opacity, peripheral neovascularization, and conjunctival congestion with stereomicroscope and imaging software, therapeutic effects in these animal models can be monitored.

Ex Vivo and In Vivo Animal Models for Mechanical and Chemical Injuries of Corneal Epithelium

Here, animal models based on mouse and rabbit are developed for mechanical and chemical injury of corneal epithelium to screen new therapeutics and the underlying mechanism.

Modelos Animais Ex Vivo e In Vivo para Lesões Mecânicas e Químicas do Epitélio da Córnea

Corneal injury to the ocular surface, including chemical burn and trauma, may cause severe scarring, symblepharon, corneal limbal stem cells deficiency, ...

Dissection Techniques and Histological Sampling of the Heart in Large Animal Models for Cardiovascular Diseases

The standard gross examination and sampling are key elements in the reproducibility and success of experimental studies of cardiovascular diseases carried out in large animals. Considering the complex anatomy of the heart, interspecies differences, and the types of compensatory and pathological reactions, consistent protocols are challenging to implement. The utilization of multiple dissection protocols is usually adapted to suit the prosector's experience, and personal preference continues to be a source of experimental and interobserver variability. Here, the aim is to present the main anatomical features and landmarks, dissection protocols, and histological sampling standards of the heart in some commonly used species (including dogs, pigs, ruminants, and cats) as models of cardiovascular diseases.
Two standard gross examination protocols are presented here. First, the inflow-outflow method, which follows the physiological blood flow direction through the heart and large vessels (frequently used in dogs, ruminants, and pigs), and second, the four-chamber dissection technique (exemplified in cats). Both techniques can be adapted to any species in certain experimental circumstances. The sampling protocols include all the areas of interest (sinoatrial node, ventricles, interventricular septum, atria, valves, and aorta), and if properly carried out, improve both the reproducibility and reliability of experimental studies.

Due to the complex anatomy, a consistently reproducible dissection and harvesting protocol for cardiac samples can be challenging to implement. This manuscript presents the key elements of some standard cardiac dissection protocols, highlighting both the gross examination approaches and the sampling sites commonly used for histopathologic examination.

Técnicas de Dissecção e Amostragem Histológica do Coração em Modelos de Grandes Animais para Doenças Cardiovasculares

The standard gross examination and sampling are key elements in the reproducibility and success of experimental studies of cardiovascular diseases carried ...

Broncoscopia flexível para broncoscopistas novatos

Systematic Bronchoscopy: the Four Landmarks Approach

Flexible bronchoscopy is a technically difficult procedure and has been identified as the most important procedure that should be integrated into a simulation-based training program for pulmonologists. However, more specific guidelines that govern bronchoscopy training are needed to meet this demand. To ensure patients a competent examination, we propose a systematic, stepwise approach, splitting the procedure into four &#34;landmarks&#34; to support novice endoscopists navigating the bronchial maze. The procedure can be evaluated based on three established outcome measures to ensure a thorough and effective inspection of the bronchial tree: diagnostic completeness, structured progress, and procedure time.
The stepwise approach relying on the four landmarks is used at all simulation centers in Denmark and is being implemented in the Netherlands. To provide instant feedback to novice bronchoscopists when training and to relieve time constraints from consultants, we suggest that future studies should implement artificial intelligence&#160;as a feedback and certification tool when training new bronchoscopists.

Autor em destaque: Aprendendo broncoscopia sistemática em um ambiente de base de simulação 

Here, we present a protocol to navigate the bronchial maze in a structured manner, splitting the bronchoscopy into a stepwise approach-the four landmarks approach.

Broncoscopia Sistemática: a Abordagem dos Quatro Marcos

Flexible bronchoscopy is a technically difficult procedure and has been identified as the most important procedure that should be integrated into a ...