Este trabalho foi financiado pelo cluster de excelência da fundação de pesquisa alemão &quot;Munich Cluster para sistemas Neurologia (Sinergia)&quot; e pela fundação da Daimler-Benz para AL

Declaração de Ética As experiências relatadas neste vídeo foram conduzidos de acordo com as diretrizes nacionais para o uso de animais de laboratório e os protocolos foram aprovados pelos comitês governamentais alemãs (Regierung von Oberbayern, Munique, Alemanha). 10 semanas de idade, os ratos machos C57Bl/6J são usadas neste estudo. Os animais foram alojados sob temperatura controlada (22 ± 2 ° C), com um período de ciclo claro-escuro de 12 horas e acesso à ração peletizada e água ad libitum. Analgesia e sedação protocolos são descritos como aprovado pela comissão governamental local, mas pode ser diferente de protocolos utilizados em outros laboratórios. 1. Preparação do material e instrumentos <ol><li> Ligue o cobertor com aquecimento de modo a manter a área de operação quente e manter a temperatura do corpo do rato durante anestesia (37 ° C). </li><li> Tesoura Prepare autoclavado, forceps e algodões, dexpanthenol pomada e material de sutura. Prepara-se uma seringa com solução salina (sem agulha) para manter a área de operação hidratado. Prepare o gás de anestesia (70% de N 2 O + 30% de O2 + isoflurano). </li><li> Injectar analgésicos por via intraperitoneal: Metamizol 200 mg / kg, carprofeno 4 mg / kg e buprenorfina a 0,1 mg / kg. </li><li> Posicione o mouse na câmara de indução com uma taxa de fluxo de isoflurano de 4% para anestesiar-lo até que o movimento espontâneo de corpo e vibrissas pára. </li><li> Transfira o mouse na posição lateral com o nariz na máscara de anestesia e manter a concentração de isoflurano em 4% para cerca de um minuto, em seguida, reduzir e em approx.1.5% para manter a anestesia adequada. </li><li> Aplicar dexpantenol pomada em ambos os olhos. </li></ol> 2. Modelo MCAO distal <ol><li> Faça uma incisão na pele um centímetro entre o ouvido eo olho usando pequenas tesouras de operação após o preparo asséptico do site usin cirúrgicog desinfetante da pele. </li><li> Separa-se a pele e localizar o músculo temporal. </li><li> Selecione no gerador de alta freqüência a função de coagulação, o modo bipolar, selecione 12 W e se conectar a pinça eletrocoagulação com o cabo. </li><li> Adicionar uma gota de solução salina e usar a pinça para retirar o músculo temporal do crânio em sua parte apical e dorsal, assim, fazendo um retalho do músculo sem remover totalmente o músculo. </li><li> Identificar a MCA abaixo do crânio transparente, na parte rostral da área temporal dorsal para o seio retro-orbital (Figura 2A). Se a bifurcação MCA não é visível (devido a uma variação normal anatómica) identificar o recipiente mais rostral. </li><li> Adicione um pouco de soro fisiológico no crânio e desbastar o osso com a broca logo acima do ramo MCA até que ele tem uma textura fina e translúcida (Figura 2B). </li><li> Retire cuidadosamente o osso acima da artéria com uma pinça muito finas. </li><li> Selecione o modo bipolar in o gerador de alta frequência com a 7 W. Coagula da artéria com o electrocoagulação pinça proximal e distal em relação à bifurcação (Figura 2C). Quando a bifurcação não é visível, devido a uma variante anatómica, coagular o ramo MCA correctamente identificados (ver acima), em dois locais de aprox. Distância de 1 mm. Não é necessário para captar a artéria com as pinças para coagulação, tocando a artéria cuidadosamente com pinças em ambos os lados a partir de cima é suficiente e induz menos danos mecânicos. </li><li> Espere 30 segundos e tocar suavemente a artéria com uma pinça embotadas para verificar se há fluxo de sangue devido a recanalização espontânea. No caso de recanalização repetir a electrocoagulação uma vez. </li><li> Mudar a localização do músculo temporal para a sua posição, que cobre o orifício de trepanação. </li><li> Suturar a ferida e colocar o animal em uma caixa de enfermagem a 32 ° C para se recuperar da anestesia e devolvê-lo para a jaula. Em geral, leva 5-10 minutos para o animal a recuperar da AnesthAIAS. </li><li> Injectar analgesia pós-operatória (ip) após 24 horas e depois diariamente até o quinto dia de pós-operatório: Carprofeno 4 mg / kg. </li></ol> 3. Sham Operação Execute todos os procedimentos de forma idêntica para a operação descrita acima - incluindo o afinamento do crânio e sua remoção - exceto para não coagular a artéria exposta. 4. Cilindro de teste 13 <ol><li> Colocar o animal num cilindro de acrílico transparente de vidro (diâmetro: 8 cm, altura: 25 cm) em frente de dois espelhos e vídeo para 5 min. Ajustar a câmara central em frente dos dois espelhos e o cilindro para obter um vídeo (Figura 3A) óptima. </li><li> Para a avaliação do uso de membro anterior independente, pontuação (1) contato da parede do cilindro com um membro anterior durante traseiro completo e (2) de pouso com apenas um membro anterior no assoalho após traseiro completo. Contagem pelo menos 20 contatos para um membro anterior usando câmera lenta ou quadro-a-frame função do Cliente Vídeo Lan (VLC) software freeware ( <a href="http://www.videolan.org/vlc">http://www.videolan.org/vlc</a> ). </li><li> Para a análise da linha de base antes da cirurgia: realizar o teste duas vezes por mouse, com uma pausa de 1 hora entre os ensaios. Membro Anterior uso é expresso como uma proporção de, uso direita / esquerda e verso membro anterior independente. </li><li> Após a coagulação MCA: realizar o teste novamente duas vezes por mouse, com uma pausa de 1 hora entre os ensaios, tal como indicado acima. </li></ol> 5. Perfusão <ol><li> Anestesiar os animais (por exemplo, através de cetamina e xilazina 120/16 mg / kg de peso corporal, respectivamente). </li><li> Corrigir o animal em decúbito dorsal e abrir a cavidade abdominal com um corte mediano. Remover rasgos e esterno. Faça uma pequena incisão no átrio direito. Inserir uma cânula de perfusão no ventrículo esquerdo e lentamente perfuse com 20 ml de solução salina. </li><li> Decapitar o animal, abrir a calota craniana e retire delicadamente o cérebro a partir da base do crânio. </li><li&gt; Congelar os cérebros em -40 ° C isopentano frio durante 10 min. Depois remover os cérebros do isopentano e armazenar até análise a -80 ° C. </li></ol> 6. Infarct volumetria <ol><li> Cryosectioning: Cortar os cérebros em série num criostato a 20 mm de espessura a cada 400 um em lâminas e armazenar as lâminas a -20 ° C. </li><li> Violeta de cresilo (CV) coloração: <ol><li> Preparar a solução de coloração: Misture 0,5 g de acetato de CV em 500 ml de H 2 O. Agita-se e calor (60 ° C) até que os cristais são dissolvidos. Deixe a solução esfriar e guarde em um frasco escuro. Aquecer de novo para 60 ° C e de filtro antes de cada utilização. </li><li> Secam-se as lâminas à TA durante 30 min. Em seguida, colocá-los em etanol a 95% durante 15 min e em seguida em etanol a 70% durante 1 minuto e depois em etanol a 50% durante 1 min. </li><li> Colocar as lâminas em água destilada por 2 min, atualizar água destilada e colocá-los para 1 min. Depois coloque as lâminas em solução de coloração (60 ° C) fou 10 min e lava-se duas vezes em água destilada durante 1 min. </li><li> Colocar as lâminas em etanol a 95% por 2 min. Em seguida, colocá-los em etanol a 100% durante 5 min, actualizar o etanol a 100% e para colocá-las em 2 min. Depois cobrir as lâminas com meio de montagem. </li><li> Análise: Digitalizar slides e analisar o volume de infarto indireta pelo método Swanson 14 para corrigir edema: (Área isquêmica) = (área Cortex do lado contralateral) - (região do córtex não-isquêmica do lado ipsilateral) (Figura 4A). </li></ol></li></ol>

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Os autores não têm interesses conflitantes para divulgar.

O presente protocolo descreve o modelo experimental de acidente vascular cerebral distal, OACM permanente por eletrocoagulação transcraniana - o chamado &quot;modelo de coagulação&quot;. Este modelo, entretanto, tornar-se um dos modelos animais mais utilizados em pesquisa do curso experimental 12. Em comparação com outros modelos de isquemia cerebral focal, o modelo de coagulação, tal como apresentado neste vídeo tem a vantagem de um tempo muito curto, a operação de aproximadamente 10 min, quando realizado por um cientista treinado. Assim, os tempos breves de anestesia pode ser conseguida neste modelo, o que é uma característica favorável de um modelo de acidente vascular cerebral experimental porque o impacto dos anestésicos em neuroprotecção e derrame resultado é bem conhecido 15. Além disso, como anteriormente descrito por Carmichael et ai. 11, que demonstram que o volume do enfarte resultante e localização após distal coagulação permanente do MCA corresponde às lesões cerebrais isquémicas, na maioria dos humanosderrames em proporção ao tamanho do cérebro. Acidente vascular cerebral humano é principalmente de tamanho pequeno com lesões de, aproximadamente, 5-15% de hemisfério, com base em estudos populacionais anteriores e os ensaios clínicos de imagem 16-18, em contraste com lesões extensas com acidente vascular cerebral edema cerebral compressão que ocorrem em menos de 10% de cursos clínica 19. Deste modo, as lesões de AVC do território da ACM de cerca de 12% do hemisfério alcançado pelo modelo apresentado pode ser considerado como um volume de curso relevantes em translação. No entanto, tem que ser tomado em consideração que diferentes estirpes de ratos ou protocolos utilizados para anestesia pode afectar o volume da lesão que resulta 20. A mortalidade durante o período de observação após a indução AVC neste modelo é praticamente ausente. A mortalidade total de menos de 5% é constituída principalmente de mortes durante a operação por causa de complicações anestesiológicas ou sacrifício porque chegando de critérios de exclusão. A fim de justificar a baixa variability deste modelo e sua excelente reprodutibilidade, sugerimos os seguintes critérios de exclusão: 1) Qualquer hemorragia subaracnóide durante a operação. 2) Tempo de operação mais de 15 min. 3) A recanalização da MCA depois de duas tentativas para eletrocoagulação com apenas OACM transitória. Além disso, os animais devem ser examinados diariamente após MCAO (comportamento fisiológico básico, a aparência da pele eo peso corporal) para controlar a dor, desconforto ou comportamento doentio. Várias medidas podem ser implementadas para a análise do resultado do curso como medida speckle laser, ressonância magnética, testes comportamentais ou análise histológica. Neste protocolo, fornecer métodos exemplares para análise do comportamento e análise de volume de infarto. Vários teste para análise de comportamento após a isquemia cerebral focal têm sido desenvolvidos e utilizados em pesquisa do curso experimental. Testes adequados para a disfunção sensório-motor usado anteriormente pelo nosso grupo neste modelo AVC 21,22 nósre o teste Rotarod 23, teste de etiqueta adesiva 24, Canto teste 25 eo teste do cilindro 13, o que é demonstrado neste vídeo. O teste do cilindro consistentemente descreve assimetria do motor na fase aguda após distal MCAO permanente e também detecta recuperar consecutivo da função motora. Apesar das vantagens óbvias, algumas limitações deste modelo de acidente vascular cerebral tem que ser tida em conta. Em primeiro lugar, é necessária uma trepanação do crânio, a fim de coagular a artéria, produzindo, assim, um acesso potencial de peri-operacionais infecções do cérebro, embora as infecções bacterianas da ferida cirúrgica, músculo temporal ou o próprio cérebro nunca ter sido detectado por nós mesmos ou documentados por outros usando esse modelo. Além disso, os danos mecânicos para o córtex e de coagulação, durante a preparação não pode ser excluída, mas pode ser limitada pela perfuração cuidadosa e remoção do crânio, humidificação constante do local de cirurgia e ne mínimo<html> eletrocoagulação sário (ver critérios de exclusão). Embora o campo da MCA, conforme ilustrado na Figura 2 encontra-se na maioria dos ratinhos C57BL / 6, nós descrevemos o protocolo como proceder em variações normais do rumo do navio para minimizar a variabilidade modelo. Além disso, sugerimos o uso de múltiplas (3 no caso de bifurcação; 2 sem bifurcação dos MCA) sites de oclusão para minimizar o risco de recanalização parcial da MCA, que em nossa experiência é um fator importante para a variabilidade deste modelo. Em termos de testes comportamentais, apenas os déficits comportamentais menores podem ser detectados nos testes comportamentais acima mencionados e regeneração funcional pode ser observado na primeira semana após o acidente vascular cerebral. Assim, os sistemas de teste mais avançados, com maior sensibilidade e parâmetros de teste qualitativo como o teste atingindo qualificados 27 pode ser mais adequado para detectar o resultado funcional a longo prazo neste modelo. EOR &quot;&gt; Finalmente, devido à coagulação permanente do MCA não reperfusão pode ser obtido, que é uma característica observada numa percentagem substancial de pacientes com AVC, devido a lise de coágulos espontâneos ou terapia 28. No entanto, um modelo de acidente vascular cerebral tromboembólico anteriormente descrito 26 fornece a opção por um modelo de curso gratuito com a reperfusão de isquemia cerebral cortical. Tomados em conjunto, a alta reprodutibilidade, a possível observação a longo prazo devido à mortalidade mínimo eo volume de infarto em relação comparável e localização em relação ao acidente vascular cerebral humano distinguir o &quot;modelo de coagulação&quot; como um modelo valioso para a pesquisa básica e translacional derrame.

AVC é a terceira causa mais comum de morte e um dos principais motivos de incapacidade em adultos adquirido em países desenvolvidos 1. Cerca de 80% desta doença neurológica aguda é causada por isquemia cerebral resultante de uma obstrução do fluxo sanguíneo cerebral, enquanto cerca de 15% é causada por uma hemorragia intracerebral 2. Apesar de a investigação em curso, a administração intravenosa de ativador do plasminogênio tecidual é o único tratamento farmacológico aprovado para AVC isquêmico até agora e só está disponível para uma minoria de pacientes com AVC devido à janela de 4,5 horas após o AVC aparecimento 3,4 tempo curto aprovado. Como não existem modelos in vitro, que podem modelar corretamente as complexas interações entre o cérebro, vasos e mecanismos fisiopatológicos sistêmicos durante o curso, os modelos animais são essenciais para a pesquisa do curso pré-clínico. Portanto, vários modelos de derrame isquêmico foram desenvolvidos em uma variáveledade de espécies. Um dos modelos de AVC mais vulgarmente utilizado é o &quot;Modelo de filamento&quot;, em que um fio de sutura é transitoriamente introduzido na artéria carótida interna e encaminhada até a ponta oclui a origem da artéria cerebral média (MCA), resultando numa paragem do fluxo sanguíneo e posterior infarto cerebral de também regiões corticais e subcorticais no caso de oclusão prolongada 5,6. Em modelos photothrombotic de acidente vascular cerebral isquêmico, oclusão fotoquímica do navio cortical irradiado é alcançada após a injeção de um fotossensibilizador, resultando em pequenas lesões 7, circunscritos localmente. A oclusão permanente da MCA distais das artérias lenticulostriatal pode ser conseguida por uma ligação da artéria, a sua compressão transitória ou por 8,9 coagulação permanente. O enfarte resultante neste modelo afecta predominantemente o neocórtex 10 porque a oclusão da MCA neste modelo é distai ao lênticaulostriatal artérias, que fornecem os gânglios basais. Uma vez que a maior parte das lesões de AVC humanos estão localizados no território da artéria cerebral média, todos os modelos comuns tempos assemelham oclusões da MCA ou de um dos seus ramos 11. A MCA é uma das principais artérias que proporciona o fornecimento de sangue para o cérebro; que surge a partir da artéria carótida interna, rotas ao longo do sulco lateral, onde, em seguida, filiais e projetos para os gânglios da base e as superfícies laterais do frontal, parietal e lobos temporais, incluindo o motor primário e córtex sensorial. A direita ea esquerda MCA estão conectados às artérias cerebrais anterior e posterior artérias, que se conectam com as artérias cerebrais posteriores comunicação, criando o círculo de Willis (Figura 1). Como relatado anteriormente por Carmichael et al. 11, infartos modelados pela distal Cerebral Média Artery Oclusão (MCAO) modelo em camundongos abranger cerca de 10-15% do hemisfério, imitando assim a maioria das lesões tempos humanos, que estão localizados no território cortical MCA 11,12. Em 1981, Tamura et al. Descrito um modelo de coagulação transcraniana permanente, MCAO em ratos 8. No entanto, o modelo descrito por Tamura envolveu uma oclusão proximal da MCA, a fim de contornar a bifurcação mais distal da artéria. Assim, o &quot;modelo Tamura&quot; original induz não só as lesões corticais, mas também do corpo estriado, semelhantes às lesões obtidos por &quot;modelo de filamento&quot; 6. Aqui, descrevemos o modelo permanente OACM distal por eletrocoagulação transcraniana em camundongos. Além disso, relatamos histológica relacionada e métodos funcionais para analisar o resultado AVC neste modelo. Todos os métodos são baseados em procedimentos operacionais padrão desenvolvidos e utilizados em nossos laboratórios.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="948">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">Camera Canon Eos 500D</td>
			<td style="width:224px;">Canon</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:324px;">optics: 18-55 mm; 30 fps; 640x480 video function</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">Mirror</td>
			<td style="width:224px;">Kristallform</td>
			<td style="width:119px;">2677089</td>
			<td>30x30 cm&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">Transparent acrylic glass cylinder</td>
			<td style="width:224px;">H&#38;S Kunststofftechnik</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>diameter: 8 cm,&#160; height: 25 cm</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">Heating blanket</td>
			<td>FHC DC Temperature Controller</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">Fine Scissors</td>
			<td style="width:224px;">FST</td>
			<td>15000-00</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">Mayor Scissors</td>
			<td style="width:224px;">FST</td>
			<td style="width:119px;">1410-15</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">Forceps</td>
			<td style="width:224px;">FST</td>
			<td style="width:119px;">11616-15</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">Cotons</td>
			<td style="width:224px;">NOBA Verbondmitel Danz</td>
			<td style="width:119px;">974116</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">Saline solution</td>
			<td style="width:224px;">Braun</td>
			<td style="width:119px;">131321</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">Bepanthen pomade</td>
			<td style="width:224px;">Bayer</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">Isoflurane</td>
			<td style="width:224px;">Abbot</td>
			<td style="width:119px;">B506</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Anesthesia system for isoflurane</td>
			<td>Drager</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">Stereomikroskop&#160;</td>
			<td style="width:224px;">Zeiss</td>
			<td>Stemi DV4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">Electrosurgical device</td>
			<td colspan="2">ERBETOM ICC 80/50 HF-Chirurgieger&#228;t</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">Drill</td>
			<td style="width:224px;">Proxxon&#160;</td>
			<td style="width:119px;">D-34343</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">Ketamine</td>
			<td style="width:224px;">Inresa Arzneimittel GmbH</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">Xylacine</td>
			<td style="width:224px;">Albrecht</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">5ml Syringe&#160;</td>
			<td style="width:224px;">Braun</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">Phosphate Buffered Saline PH: 7,4</td>
			<td>Apotheke Innestadt Uni Munchen</td>
			<td style="width:119px;">P32799</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">Isopentane</td>
			<td style="width:224px;">Fluka</td>
			<td style="width:119px;">59070</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">Cryostat</td>
			<td>Thermo Scientific CryoStarNX70</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">Superfrost Plus Slides</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td style="width:119px;">J1800AMNZ</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">Cresyl violet</td>
			<td>Sigma Life Science&#160;</td>
			<td>C5042-10G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">Acetic Acid</td>
			<td>Sigma Life Science&#160;</td>
			<td>695092</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">Ethanol 70%</td>
			<td>CLN Chemikalien Laborbedorf</td>
			<td>521005</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">Ethanol 96%</td>
			<td>CLN Chemikalien Laborbedorf</td>
			<td>522078</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Ethanol 99%</td>
			<td>CLN Chemikalien Laborbedorf</td>
			<td style="width:119px;">ETO-5000-99-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">Roti-Histokit mounting medium</td>
			<td style="width:224px;">Roth</td>
			<td style="width:119px;">6638.1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">C57Bl/6J mice</td>
			<td style="width:224px;">Charles River</td>
			<td style="width:119px;">000664</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

modeling stroke in mice: permanent coagulation of the distal middle cerebral artery

AVC é a terceira causa mais comum de morte e uma das principais causas de incapacidade em adultos adquirida em países desenvolvidos. Opções terapêuticas muito limitados estão disponíveis para uma pequena proporção de pacientes com AVC na fase aguda. A pesquisa atual está intensamente em busca de novas estratégias terapêuticas e está cada vez mais focados na fase sub-aguda e crônica após o AVC porque mais pacientes possam ser elegíveis para intervenções terapêuticas em uma janela de tempo prolongado. Estes mecanismos incluem atraso caminhos fisiopatológicos importantes, tais como a inflamação pós-acidente vascular cerebral, a angiogênese, a plasticidade neuronal e regeneração. Para analisar esses mecanismos e avaliar posteriormente alvos de novas drogas, os modelos AVC experimentais com relevância clínica, baixa mortalidade e alta reprodutibilidade são procurados. Além disso, os ratos são os mais pequenos mamíferos em que uma lesão acidente vascular cerebral focal pode ser induzida e para que um largo espectro de modelos transgénicos sãodisponível. Assim, descrevemos aqui o modelo de ratinho de transcraniana, coagulação permanente da artéria cerebral média por meio de electrocoagulação distais das artérias lenticulostriatal, o chamado &quot;modelo de coagulação&quot;. O infarto resultando neste modelo está localizado principalmente no córtex; o volume de enfarte em relação em relação ao tamanho do cérebro corresponde à maioria dos acidentes vasculares cerebrais humanos. Além disso, o modelo de preencher os critérios de reprodutibilidade e baixa mortalidade acima mencionados. Neste vídeo podemos demonstrar os métodos cirúrgicos de indução AVC no &quot;modelo de coagulação&quot; e denunciar as ferramentas de análise histológica e funcional.

Devido ao tempo e moderada anestesia danos cerebrais curto, cerca de 10 min após a transferência para as suas gaiolas de todos os animais eram acordados, movendo-se livremente na gaiola e interagindo com a mesma ninhada. A mortalidade durante a cirurgia MCAO foi inferior a 5%, principalmente como resultado de hemorragia subaracnóidea acidental ou incorreta anestesia. A mortalidade durante o tempo de observação de 7 dias após a indução de derrame ocorre apenas muito raramente em cerca de 1-2% dos animais. Na série de operação de 10 animais para este relatório todos os animais sobreviveram à operação eo período de observação de 7 dias, nenhum deles teve de ser excluído devido a critérios de exclusão. Déficits comportamentais após a MCA coagulação foram avaliados pelo teste do cilindro uso 13 analisar forepaw assimetria. Neste teste, o índice de utilização das patas dianteiras esquerda e direita independente é medida em pontos de tempo indicados após a indução e acidente vascular cerebral em comparação com os valores de base obtidos 24hr antes de MCAO (Figura 3B). Os animais apresentaram uma mudança significativa no uso do membro assimetria para a exploração parede combinados no teste do cilindro de 24 horas (1,72 ± 0,326, p &lt;0,05) e 3 dias (1,36 ± 0,17, p &lt;0,05) após a MCAO. Embora a relação melhorou durante o período de observação de 1 semana, a assimetria do motor era ainda significativo de 7 dias após MCAO (1,35 ± 0,29, p &lt;0,05) em relação aos valores basais. Realizamos infarto volumetria usando cresil violeta manchado seções cerebrais coronais de série 7 dias após a indução do AVC (Figura 4B). A média de volume de infarto foi de 15,4 mm 3, representando, assim, 12% de um hemisfério cerebral (Figura 4C). A variabilidade deste modelo AVC é excepcionalmente baixo, com um desvio padrão de aproximadamente 10%. A área abrange a lesão somatossensorial e do córtex motor com afeto apenas menor de estruturas subcorticais. Além disso, a localização do infartoárea é altamente previsível com apenas variabilidade mínima como mostrado no diagrama esquemático de distribuição (Figura 4D). <img alt="Figura 1" fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/51729/51729fig1highres.jpg" width="500" /> Figura 1. Representação esquemática do Círculo de Willis. The Circle arterial de Willis é formado pelas artérias cerebral média (MCA) e as artérias cerebrais anteriores (ACA) que se ramificam a partir da artéria carótida interna (ACI), bem como pelo posterior artérias cerebral (APC) e a posterior artérias comunicantes (PComA). O MCA é executado no sulco lateral onde se ramifica para o córtex cerebral. O ramo MCA dominante fornecer a maior parte do córtex motor e parte do córtex somatossensorial é permanentemente ocluído pela modelo demonstrou (artéria comunicante Acoma = Anterior; BA = artéria basilar; Suca = cerebel Superiorartéria lar). <img alt="Figura 2" fo:content-width="3in" src="/files/ftp_upload/51729/51729fig2highres.jpg" width="400" /> Figura 2. Vista transcraniana após remoção do músculo temporal e vista esquemática de oclusão MCA. (A) Depois de retirar o músculo temporal artérias corticais pode ser visto através do crânio do rato parcialmente translúcida (em camundongos 8-12 semanas de idade). O ramo dominante MCA pode ser identificado na parte rostral da visão temporal, bem como outras artérias corticais ramificação do MCA e do PCA na parte caudal. (B) Representação esquemática no ramo MCA dominante em sua variação predominante com uma bifurcação no córtex temporal lateral, após a perfuração de um orifício e a remoção do crânio. (C) Os quadrados pretos representam os sítios de coagulação MCA nas proximais e distais lados da bifurcação. Figura 3. Análise de défices comportamentais. (A) teste do cilindro set-up: o mouse é colocado em um cilindro vertical e espelhos são colocados atrás a fim de registrar todos os movimentos usando uma câmera de vídeo (B) uso Membro Anterior assimetria foi analisada utilizando o teste do cilindro.. Rácios de esquerda / direita de uso independente membro anterior foram calculados 24 horas antes MCAO e nos momentos indicados após a indução derrame. N = 10, * p &lt;0,05 entre o ponto de tempo indicado e basal valor (controlo). <img alt="Figura 4" fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/51729/51729fig4highres.jpg" width="500" /> Figura 4. Volumétrica análise infarto e resultado do infarto após distal MCAO. (A) Imagem representativa de uma violeta cresil sutiã coronal manchadona seção 7 dias após MCAO. A linha amarela é o que indica a seleção do córtex contralateral (direito) ea linha vermelha é a seleção do córtex não infartado (manchado) do cérebro ipsilateral. A área pálida no hemisfério esquerdo descreve a área do tecido infartado. (B) a análise do volume de infarto 10 cérebros (cada ponto representa um cérebro individual) 24 horas, 3 dias e 7 dias após a coagulação distal MCA. A linha vermelha representa a média horizontal, barras de erro indicam o desvio padrão. (C) representativas violeta cresil secções cerebrais coronais coradas cada 400 um a 7 dias após a MCA. Coagulação (D) distribuição esquemática do tecido cerebral enfartado 7 dias após a MCAO. Cada slide mostra a informação acumulada de distribuição infarto (codificados por cores, conforme indicado) na seção dada em relação ao bregma (imagem modificada a partir de:. Liesz A et al, Brain, 2011; com permissão de Oxford University Press). &lt;a href = &quot;https://www.jove.com/files/ftp_upload/51729/51729fig4highres.jpg&quot; target = &quot;_blank&quot;&gt; Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.

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Modeling Stroke in Mice: Permanent Coagulation of the Distal Middle Cerebral Artery

Vários modelos murinos de oclusão da artéria cerebral média (MCAO) são amplamente utilizados em pesquisas sobre o cérebro experimental. Aqui, demonstramos o modelo de transcraniana permanente distal MCAO que produz enfarte cortical consistente de um tamanho correspondente ao dano imposto pela maioria dos acidentes vasculares cerebrais isquémicos humanos.

Curso de modelagem em Ratos: Coagulação permanente da artéria distal Cerebral Média

Stroke is the third most common cause of death and a main cause of acquired adult disability in developed countries. Only very limited therapeutical ...

modeling-stroke-mice-permanent-coagulation-distal-middle-cerebral

Research

JoVE Journal

Medicine

36.6K visualizações.  University Hospital Munich.  Vários modelos murinos de oclusão da artéria cerebral média (MCAO) são amplamente utilizados em pesquisas sobre o cérebro experimental. Aqui, demonstramos o modelo de transcraniana permanente distal MCAO que produz enfarte cortical consistente de um tamanho correspondente ao dano imposto pela maioria dos acidentes vasculares cerebrais isquémicos humanos. 

Vídeo: Modeling Stroke in Mice: Permanent Coagulation of the Distal Middle Cerebral Artery

Modeling Stroke in Mice - Middle Cerebral Artery Occlusion with the Filament Model

Stroke is among the most frequent causes of death and adult disability, especially in highly developed countries. However, treatment options to date are very limited. To meet the need for novel therapeutic approaches, experimental stroke research frequently employs rodent models of focal cerebral ischaemia. Most researchers use permanent or transient occlusion of the middle cerebral artery (MCA) in mice or rats.
Proximal occlusion of the middle cerebral artery (MCA) via the intraluminal suture technique (so called filament or suture model) is probably the most frequently used model in experimental stroke research. The intraluminal MCAO model offers the advantage of inducing reproducible transient or permanent ischaemia of the MCA territory in a relatively non-invasive manner. Intraluminal approaches interrupt the blood flow of the entire territory of this artery. Filament occlusion thus arrests flow proximal to the lenticulo-striate arteries, which supply the basal ganglia. Filament occlusion of the MCA results in reproducible lesions in the cortex and striatum and can be either permanent or transient. In contrast, models inducing distal (to the branching of the lenticulo-striate arteries) MCA occlusion typically spare the striatum and primarily involve the neocortex. In addition these models do require craniectomy. In the model demonstrated in this article, a silicon coated filament is introduced into the common carotid artery and advanced along the internal carotid artery into the Circle of Willis, where it blocks the origin of the middle cerebral artery. In patients, occlusions of the middle cerebral artery are among the most common causes of ischaemic stroke. Since varying ischemic intervals can be chosen freely in this model depending on the time point of reperfusion, ischaemic lesions with varying degrees of severity can be produced. Reperfusion by removal of the occluding filament at least partially models the restoration of blood flow after spontaneous or therapeutic (tPA) lysis of a thromboembolic clot in humans.
In this video we will present the basic technique as well as the major pitfalls and confounders which may limit the predictive value of this model.

Filamentous occlusion of the Middle cerebral artery is a common model for studying ischemic stroke in mice.

Curso de modelagem em Ratos - Oclusão da Artéria Cerebral Média com o modelo de Filamento

Stroke is among the most frequent causes of death and adult disability, especially in highly developed countries. However, treatment options to date are ...

Medicina

Mouse Model of Middle Cerebral Artery Occlusion

Stroke is the most common fatal neurological disease in the United States 1. The majority of strokes (88%) result from blockage of blood vessels in the brain (ischemic stroke) 2. Since most ischemic strokes (~80%) occur in the territory of middle cerebral artery (MCA) 3, many animal stroke models that have been developed have focused on this artery. The intraluminal monofilament model of middle cerebral artery occlusion (MCAO) involves the insertion of a surgical filament into the external carotid artery and threading it forward into the internal carotid artery (ICA) until the tip occludes the origin of the MCA, resulting in a cessation of blood flow and subsequent brain infarction in the MCA territory 4. The technique can be used to model permanent or transient occlusion 5. If the suture is removed after a certain interval (30 min, 1 h, or 2 h), reperfusion is achieved (transient MCAO); if the filament is left in place (24 h) the procedure is suitable as a model of permanent MCAO. This technique does not require craniectomy, a neurosurgical procedure to remove a portion of skull, which may affect intracranial pressure and temperature 6. It has become the most frequently used method to mimic permanent and transient focal cerebral ischemia in rats and mice 7,8. To evaluate the extent of cerebral infarction, we stain brain slices with 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride (TTC) to identify ischemic brain tissue 9. In this video, we demonstrate the MCAO method and the determination of infarct size by TTC staining.

We demonstrate in the video a method for producing a middle cerebral artery occlusion in adult mice using an intraluminal monofilament. We also show how to evaluate the extent of cerebral infarction by 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride (TTC) staining.

Modelo do rato de Oclusão da Artéria Cerebral Média

Stroke is the most common fatal neurological disease in the United States 1. The majority of strokes (88%) result from blockage of blood vessels in the ...

Intraluminal Middle Cerebral Artery Occlusion (MCAO) Model for Ischemic Stroke with Laser Doppler Flowmetry Guidance in Mice

Stroke is the third leading cause of death and the leading cause of disability in the world, with an estimated cost of near $70 billion 
in the United States in 20091,2. The intraluminal middle cerebral artery occlusion (MCAO) model was developed by Koizumi4 in 1986 to simulate this 
impactful human pathology in the rat. A modification of the MCAO method was later presented by Longa3. Both techniques have been widely used to identify 
molecular mechanisms of brain injury resulting from ischemic stroke and potential therapeutic modalities5. This relatively noninvasive method in rats has been 
extended to use in mice to take advantage of transgenic and knockout strains6,7. To model focal cerebral ischemia, an intraluminal suture is advanced via 
the internal carotid artery to occlude the base of the MCA. Retracting the suture after a specified period of time mimics spontaneous reperfusion, but the 
suture can also be permanently retained. This video will be demonstrating the two major approaches for performing intraluminal MCAO procedure in mice in a 
stepwise fashion, as well as providing insights for potential drawbacks and pitfalls. The ischemic brain tissue will subsequently be stained by 
2,3,5-triphenyltetrazolium chloride (TTC) to evaluate the extent of cerebral infarction8.

Intraluminal Middle Cerebral Artery Occlusion MCAO Model for Ischemic Stroke with Laser Doppler Flowmetry Guidance in Mice

The intraluminal middle cerebral artery occlusion (MCAO) model is the most frequent used model among experimental ischemic stroke models. Here we will demonstrate the entire model in detail with the guide of Laser Doppler flowmetry, and its representative results.

Intraluminal artéria cerebral média Oclusão Model (MCAO) para Acidente Vascular Cerebral Isquêmico com Laser Doppler Fluxometria Orientação em Ratos

Stroke is the third leading cause of death and the leading cause of disability in the world, with an estimated cost of near $70 billion 
in the United ...

The Application Of Permanent Middle Cerebral Artery Ligation in the Mouse

Focal cerebral ischemia is among the most common type of stroke seen in patients. Due to the clinical significance there has been a prolonged effort to develop suitable animal models to study the events that unfold during ischemic insult. These techniques include transient or permanent, focal or global ischemia models using many different animal models, with the most common being rodents.
The permanent MCA ligation method which is also referred as pMCAo in the literature is used extensively as a focal ischemia model in rodents 1-6. This method was originally described for rats by Tamura et al. in 1981 7. In this protocol a craniotomy was used to access the MCA and the proximal regions were occluded by electrocoagulation. The infarcts involve mostly cortical and sometimes striatal regions depending on the location of the occlusion. This technique is now well established and used in many laboratories 8-13. Early use of this technique led to the definition and description of &#x201C;infarct core&#x201D; and &#x201C;penumbra&#x201D; 14-16, and it is often used to evaluate potential neuroprotective compounds 10, 12, 13, 17. Although the initial studies were performed in rats, permanent MCA ligation has been used successfully in mice with slight modifications 18-20 .
This model yields reproducible infarcts and increased post-survival rates. Approximately 80% of the ischemic strokes in humans happen in the MCA area 21 and thus this is a very relevant model for stroke studies. Currently, there is a paucity of effective treatments available to stroke patients, and thus there is a need for good models to test potential pharmacological compounds and evaluate physiological outcomes. This method can also be used for studying intracellular hypoxia response mechanisms in vivo. 
Here, we present the MCA ligation surgery in a C57/BL6 mouse. We describe the pre-surgical preparation, MCA ligation surgery and 2,3,5 Triphenyltetrazolium chloride (TTC) staining for quantification of infarct volumes.

Middle cerebral artery (MCA) ligation is a technique to study focal cerebral ischemia in animal models. In this method, the middle cerebral artery is exposed by craniotomy and ligated by cauterization. This method gives highly reproducible infarct volumes and increased post-operative survival rates compared to other methods available.

A aplicação de ligadura da artéria Cerebral Média Permanente no mouse

Focal cerebral ischemia is among the most common type of stroke seen in patients. Due to the clinical significance there has been a prolonged effort to ...

Endothelin-1 Induced Middle Cerebral Artery Occlusion Model for Ischemic Stroke with Laser Doppler Flowmetry Guidance in Rat

Stroke is the number one cause of disability and third leading cause of death in the world, costing an estimated $70 billion in the United States in 20091, 2. Several models of cerebral ischemia have been developed to mimic the human condition of stroke. It has been suggested that up to 80% of all strokes result from ischemic damage in the middle cerebral artery (MCA) area3. In the early 1990s, endothelin-1 (ET-1) 4 was used to induce ischemia by applying it directly adjacent to the surface of the MCA after craniotomy. Later, this model was modified 5 by using a stereotaxic injection of ET-1 adjacent to the MCA to produce focal cerebral ischemia. The main advantages of this model include the ability to perform the procedure quickly, the ability to control artery constriction by altering the dose of ET-1 delivered, no need to manipulate the extracranial vessels supplying blood to the brain as well as gradual reperfusion rates that more closely mimics the reperfusion in humans5-7. On the other hand, the ET-1 model has disadvantages that include the need for a craniotomy, as well as higher variability in stroke volume8. This variability can be reduced with the use of laser Doppler flowmetry (LDF) to verify cerebral ischemia during ET-1 infusion. Factors that affect stroke variability include precision of infusion and the batch of the ET-1 used6. Another important consideration is that although reperfusion is a common occurrence in human stroke, the duration of occlusion for ET-1 induced MCAO may not closely mimic that of human stroke where many patients have partial reperfusion over a period of hours to days following occlusion9, 10. This protocol will describe in detail the ET-1 induced MCAO model for ischemic stroke in rats. It will also draw attention to special considerations and potential drawbacks throughout the procedure.

Several animal models of cerebral ischemia have been developed to simulate the human condition of stroke. This protocol describes the endothelin-1 (ET-1) induced middle cerebral artery occlusion (MCAO) model for ischemic stroke in rats. In addition, important considerations, advantages, and shortcomings of this model are discussed.

Endotelina-1 Induzida Médio modelo de oclusão da artéria cerebral para AVC isquêmico com Laser Orientação Fluxometria Doppler em ratos

Stroke is the number one cause of disability and third leading cause of death in the world, costing an estimated $70 billion in the United States in ...

Utilizing a Cranial Window to Visualize the Middle Cerebral Artery During Endothelin-1 Induced Middle Cerebral Artery Occlusion

Creation of a cranial window is a method that allows direct visualization of structures on the cortical surface of the brain1-3. This technique can be performed in many locations overlying the rat cerebrum, but is most easily carried out by creating a craniectomy over the readily accessible frontal or parietal bones. Most frequently, we have used this technique in combination with the endothelin-1 middle cerebral artery occlusion model of ischemic stroke to quantify the changes in middle cerebral artery vessel diameter that occur with injection of endothelin-1 into the brain parenchyma adjacent to the proximal MCA4, 5. In order to visualize the proximal portion of the MCA during endothelin -1 induced MCAO, we use a technique to create a cranial window through the temporal bone on the lateral aspect of the rat skull (Figure 1). Cerebral arteries can be visualized either with the dura intact or with the dura incised and retracted. Most commonly, we leave the dura intact during visualization since endothelin-1 induced MCAO involves delivery of the vasoconstricting peptide into the brain parenchyma. This bypasses the need to incise the dura directly over the visualized vessels for drug delivery. This protocol will describe how to create a cranial window to visualize cerebral arteries in a step-wise fashion, as well as how to avoid many of the potential pitfalls pertaining to this method.

This article describes a method for visualizing rat cerebral arteries through a cranial window using temporal craniectomy in order to view proximal portions of the middle cerebral artery (Figure 1). This versatile method can be combined with various techniques of drug delivery to measure cerebral artery reactivity in vivo.

Utilizando uma janela craniana para Visualizar a artéria cerebral média Durante endotelina 1 Induzida por oclusão da artéria cerebral média

Creation of a cranial window is a method that allows direct visualization of structures on the cortical surface of the brain1-3. This technique can be ...

Optimized System for Cerebral Perfusion Monitoring in the Rat Stroke Model of Intraluminal Middle Cerebral Artery Occlusion

The translational potential of pre-clinical stroke research depends on the accuracy of experimental modeling. Cerebral perfusion monitoring in animal models of acute ischemic stroke allows to confirm successful arterial occlusion and exclude subarachnoid hemorrhage. Cerebral perfusion monitoring can also be used to study intracranial collateral circulation, which is emerging as a powerful determinant of stroke outcome and a possible therapeutic target. Despite a recognized role of Laser Doppler perfusion monitoring as part of the current guidelines for experimental cerebral ischemia, a number of technical difficulties exist that limit its widespread use. One of the major issues is obtaining a secure and prolonged attachment of a deep-penetration Laser Doppler probe to the animal skull. In this video, we show our optimized system for cerebral perfusion monitoring during transient middle cerebral artery occlusion by intraluminal filament in the rat. We developed in-house a simple method to obtain a custom made holder for twin-fibre (deep-penetration) Laser Doppler probes, which allow multi-site monitoring if needed. A continuous and prolonged monitoring of cerebral perfusion could easily be obtained over the intact skull.

Cerebral perfusion monitoring has been demonstrated to improve accuracy in ischemic stroke models. Technical difficulties often limit the use of this essential tool for cerebrovascular research. In this video, an optimized system is shown to obtain a single or multi-site hemodynamic monitoring during intraluminal middle cerebral artery occlusion in rats.

Sistema otimizado para Monitorização de perfusão cerebral no modelo do rato do curso de oclusão da artéria cerebral média intraluminal

The translational potential of pre-clinical stroke research depends on the accuracy of experimental modeling. Cerebral perfusion monitoring in animal ...

Embolic Middle Cerebral Artery Occlusion (MCAO) for Ischemic Stroke with Homologous Blood Clots in Rats

Clinically, thrombolytic therapy with use of recombinant tissue plasminogen activator (tPA) remains the most effective treatment for acute ischemic stroke. However, the use of tPA is limited by its narrow therapeutic window and by increased risk of hemorrhagic transformation. There is an urgent need to develop suitable stroke models to study new thrombolytic agents and strategies for treatment of ischemic stroke. At present, two major types of ischemic stroke models have been developed in rats and mice: intraluminal suture MCAO and embolic MCAO. Although MCAO models via the intraluminal suture technique have been widely used in mechanism-driven stroke research, these suture models do not mimic the clinical situation and are not suitable for thrombolytic studies. Among these models, the embolic MCAO model closely mimics human ischemic stroke and is suitable for preclinical investigation of thrombolytic therapy. This embolic model was first developed in rats by Overgaard et al.1 in 1992 and further characterized by Zhang et al. in 19972. Although embolic MCAO has gained increasing attention, there are technical problems faced by many laboratories. To meet increasing needs for thrombolytic research, we present a highly reproducible model of embolic MCAO in the rat, which can develop a predictable infarct volume within the MCA territory. In brief, a modified PE-50 tube is gently advanced from the external carotid artery (ECA) into the lumen of the internal carotid artery (ICA) until the tip of the catheter reaches the origin of the MCA. Through the catheter, a single homologous blood clot is placed at the origin of the MCA. To identify the success of MCA occlusion, regional cerebral blood flow was monitored, neurological deficits and infarct volumes were measured. The techniques presented in this paper should help investigators to overcome technical problems for establishing this model for stroke research.

Embolic Middle Cerebral Artery Occlusion MCAO for Ischemic Stroke with Homologous Blood Clots in Rats

In this paper, we demonstrate a standard method for producing an embolic middle cerebral artery occlusion with homologous blood clots (fibrin-rich) in adult rat. This model closely mimics human ischemic stroke and is suitable for preclinical study of thrombolytic therapy for ischemic stroke.

Embolic artéria cerebral média Oclusão (MCAO) para Acidente Vascular Cerebral Isquêmico com homólogos Coágulos de sangue em ratos

Clinically, thrombolytic therapy with use of recombinant tissue plasminogen activator (tPA) remains the most effective treatment for acute ischemic ...

Quantification of Neurovascular Protection Following Repetitive Hypoxic Preconditioning and Transient Middle Cerebral Artery Occlusion in Mice

Experimental animal models of stroke are invaluable tools for understanding stroke pathology and developing more effective treatment strategies. A 2 week protocol for repetitive hypoxic preconditioning (RHP) induces long-term protection against central nervous system (CNS) injury in a mouse model of focal ischemic stroke. RHP consists of 9 stochastic exposures to hypoxia that vary in both duration (2 or 4 hr) and intensity (8% and 11% O2). RHP reduces infarct volumes, blood-brain barrier (BBB) disruption, and the post-stroke inflammatory response for weeks following the last exposure to hypoxia, suggesting a long-term induction of an endogenous CNS-protective phenotype. The methodology for the dual quantification of infarct volume and BBB disruption is effective in assessing neurovascular protection in mice with RHP or other putative neuroprotectants. Adult male Swiss Webster mice were preconditioned by RHP or duration-equivalent exposures to 21% O2 (i.e. room air). A 60 min transient middle cerebral artery occlusion (tMCAo) was induced 2 weeks following the last hypoxic exposure. Both the occlusion and reperfusion were confirmed by transcranial laser Doppler flowmetry. Twenty-two hr after reperfusion, Evans Blue (EB) was intravenously administered through a tail vein injection. 2 hr later, animals were sacrificed by isoflurane overdose and brain sections were stained with 2,3,5- triphenyltetrazolium chloride (TTC). Infarcts volumes were then quantified. Next, EB was extracted from the tissue over 48 hr to determine BBB disruption after tMCAo. In summary, RHP is a simple protocol that can be replicated, with minimal cost, to induce long-term endogenous neurovascular protection from stroke injury in mice, with the translational potential for other CNS-based and systemic pro-inflammatory disease states.

This protocol describes repetitive hypoxic preconditioning, or brief exposures to systemic hypoxia that reduce infarct volumes and blood-brain barrier disruption following transient middle cerebral artery occlusion in mice. It also details dual quantification of infarct volume and blood-brain barrier disruption after stroke to assess the efficacy of neurovascular protection.

Quantificação de Proteção Neurovascular sequência repetitiva Hypoxic Pré-condicionamento e Transient Oriente oclusão da artéria cerebral em ratos

Experimental animal models of stroke are invaluable tools for understanding stroke pathology and developing more effective treatment strategies. A 2 week ...

Performing Permanent Distal Middle Cerebral with Common Carotid Artery Occlusion in Aged Rats to Study Cortical Ischemia with Sustained Disability

Stroke typically occurs in elderly people with a range of comorbidities including carotid (or other arterial) atherosclerosis, high blood pressure, obesity and diabetes. Accordingly, when evaluating therapies for stroke in animals, it is important to select a model with excellent face validity. Ischemic stroke accounts for 80% of all strokes, and the majority of these occur in the territory of the middle cerebral artery (MCA), often inducing infarcts that affect the sensorimotor cortex, causing persistent plegia or paresis on the contralateral side of the body. We demonstrate in this video a method for producing ischemic stroke in elderly rats, which causes sustained sensorimotor disability and substantial cortical infarcts. Specifically, we induce permanent distal middle cerebral artery occlusion (MCAO) in elderly female rats by using diathermy forceps to occlude a short segment of this artery. The carotid artery on the ipsilateral side to the lesion was then permanently occluded and the contralateral carotid artery was transiently occluded for 60 min. We measure the infarct size using structural T2-weighted magnetic resonance imaging (MRI) at 24 hr and 8 weeks after stroke. In this study, the mean infarct volume was 4.5% &#177; 2.0% (standard deviation) of the ipsilateral hemisphere at 24 hr (corrected for brain swelling using Gerriet&#8217;s equation, n = 5). This model is feasible and clinically relevant as it permits the induction of sustained sensorimotor deficits, which is important for the elucidation of pathophysiological mechanisms and novel treatments.

Here we present a protocol to produce permanent distal middle cerebral artery occlusion in elderly female rats with simultaneous occlusion of the carotid arteries to generate large cortical infarcts and sustained deficits. We show confirmation of the lesion size using structural MRI at 24 hr and 8 weeks after stroke.

Realizando Permanente Distal Oriente cerebral com carótida comum Oclusão da Artéria em ratos idosos para estudar Cortical Isquemia com Deficiência Sustentada

Stroke typically occurs in elderly people with a range of comorbidities including carotid (or other arterial) atherosclerosis, high blood pressure, ...