Work in Dr. Ogunwobi&#8217;s laboratory is supported by a Research Centers in Minority Institutions Program grant from the National Institute on Minority Health and Health Disparities (MD007599) of the National Institutes of Health. The contents of this manuscript are solely the responsibility of the authors and do not necessarily represent the official views of the NIMHD or the NIH.

Declaração de Ética: Todos os estudos com animais foram aprovados pelo Comitê de Cuidado e Uso do animal Institucional (IACUC) da Hunter College of The City University of New York. 1. Procedimentos Pré-experimento <ol><li> Após a chegada à facilidade animal, inicialmente casa de 3 camundongos BALB / c com uma gaiola com uma cama superior e lascas de madeira filtrada. Certifique-se de que os ratos têm acesso livre à comida, Purina para roedores e água. Roupa de cama e comida devem ser mudadas duas vezes por semana, enquanto as gaiolas devem ser limpas uma vez por semana. </li><li> Induzir a anestesia geral em ratinhos usando um vaporizador de isoflurano, juntamente com oxigénio a uma taxa de fluxo constante de 1 litro por min. O sistema é auto-suficiente e inclui um vaporizador de precisão. </li><li> Posição animal numa caixa de plástico que tem o vaporizador de precisão e de gás / sistema anestésico ligado a ele. Inicialmente definir o vaporizador para 2,5 até animal está inconsciente, altura em que o vaporizador para diminuir 2. </li><li> Naquele tempo, mude olinha de válvulas, selando-a para a caixa e abri-lo para o cone do nariz. </li><li> Mover o animal para a área de preparação, com o cone do nariz colocado adequadamente e ligado (para a manutenção da anestesia). </li><li> Prepare 5 × 10 6 BNL 1ME A.7R.1 células do rato HCC para implantação por mouse. BNL 1ME A.7R.1 deve crescer num meio (10% de FBS inactivado pelo calor, 1% de penicilina / estreptomicina e 2 mM de L-Glutamina) incubar numa placa de cultura de células a 37 ° C numa incubadora humidificada com 5% de ar e CO 2. </li><li> Com uma seringa tendo uma agulha G 20, o implante 100 ul de PBS contendo 5 x 10 6 BNL 1ME A.7R.1 células de carcinoma hepatocelular rato em um lóbulo do fígado de ratinhos BALB / C para produzir os tumores primários. Pós-implantação, a casa dos camundongos BALB / c em uma gaiola com os mesmos requisitos de casas como pré-implantação. </li><li> No ponto final experimental, evidência clínica de carcinoma hepatocelular é observável uma redução significativa na condição corporalpontuação (geralmente detectada após 4 semanas). Neste ponto, há uma probabilidade de que os tumores primários têm desenvolvido no fígado enquanto os depósitos metastáticos ter se formado nos pulmões. Em seguida, inicia o processo de isolamento e a propagação de células tumorais circulantes. </li></ol> 2. Recolha de Sangue Total para o isolamento de células de tumor circulantes NOTA: devidamente higienizados área de cirurgia e verifique se ele está livre de desordem. Autoclave todos os instrumentos cirúrgicos ou mergulhar em um desinfectante de acordo com a recomendação do fabricante <ol><li> Sacrifício camundongos por eutanásia humanitária no experimental ponto final (evidência clínica de desenvolvimento do tumor). Eutanásia dos ratos deve envolver CO 2 asfixia. Observe a murganhos corretamente para confirmar a anestesia é distribuído corretamente. O dióxido de carbono deve ser libertado lentamente no interior da câmara ao longo de um período de 5 - 10 min, causando paragem respiratória. Siga por sangria intracardíaca e cérvicoal luxação. 5 </li><li> Usar uma agulha de 25 G ligada a uma seringa de 1 mL para a recolha de sangue total. Heparanize a seringa com 0,01 ml de heparina. Punção da pele com a agulha imediatamente inferior ao xyphisternum a cerca de 45 ° de ângulo. Avance lentamente a agulha para perfurar o coração, e, em seguida, diminuir o ângulo da agulha. Firmemente segurar a agulha e seringa no lugar, e extrair 500 ul - 1.000 l de sangue total do coração. </li><li> Remover a seringa ea agulha e transferir o sangue para um tubo de 1,5 ml livre de pirogénio pré-rotulados. Centrifugar todo o sangue recolhido em 1,5 ml de tubo isento de pirogénios a 1167 xg durante 5 min. NOTA: A centrifugação separa a amostra de sangue em três camadas: a camada inferior ou de hematócrito que consiste em células vermelhas do sangue, uma fina camada intermédia de buffy coat, e uma camada de plasma superior. </li><li> Remover o plasma cuidadosamente por pipetagem e recolhendo-o em um tubo de 1,5 ml pyrogen-livre separado para furthexperimentos de er, tais como detecção de livre de células ácidos nucleicos 7. </li><li> Para o isolamento de células tumorais circulantes (CTCs), recolher o buffy coat em um tubo de 1,5 ml livre de pirogénio separada em preparação para células vermelhas do sangue (RBC) de lise. Isto é necessário para eliminar os glóbulos vermelhos residuais na camada buffy coat. </li></ol> 3. Receita de glóbulos vermelhos (RBC) Tampão de Lise <ol><li> Adicione uma solução de 1 L de tampão de lise dos glóbulos vermelhos. </li><li> Adicione a 500 ml de cloreto de amónio e 500 ml de Tris. Em seguida, misturam para criar uma solução de 1 L de tampão de lise dos glóbulos vermelhos com uma concentração final de 155 mM de cloreto de amónio e 10 mM de Tris. </li><li> Tamponar a solução a um pH de 7,5. Armazenar o tampão de lise dos glóbulos vermelhos em 2-8 ° C, e levar a RT imediatamente antes do uso. </li></ol> 4. RBC Lise de Brasão Buffy <ol><li> Adicionar 1 ml de tampão de lise dos glóbulos vermelhos para o tubo esterilizado de 1,5 mL isenta de pirogénio contendo buffy coat recolhido. </li><li> Misturar o conteúdo do tubo porinvertendo diversas vezes. Incubar os conteúdos misturados do tubo durante 5 min à temperatura ambiente no banco. Centrifugar os conteúdos foram misturados durante 5 min a 1167 x g. </li><li> Após a centrifugação, um sedimento esbranquiçado será obtida. Desprezar o sobrenadante avermelhada devagar e com cuidado em lixívia a 10%, sem qualquer interrupção para o sedimento. Se o sedimento não é esbranquiçado, voltar a fazer os passos 3,1-3,5. Aumentando o tempo de incubação em tampão de lise dos glóbulos vermelhos para 10 - 15 minutos também pode ser útil. </li><li> Com segurança descartar o lixo biológico, uma vez descontaminação de resíduos biológicos em 10% de alvejante está completa após 24 horas. </li></ol> 5. Propagação de Cultura de Células NOTA: As células de tumor de crescimento rápido são tipicamente células de glóbulos brancos que são abundantes na mistura original de células semeadas para o prato. Depois da mudança de forma repetida, e de passagens subsequentes CTC, todas as células brancas do sangue são removidas e uma população relativamente pura de CTC permanece. <ol><li> Depoisdescartando o sobrenadante para 10% de lixívia, lavar o sedimento esbranquiçada em 1 ml de solução salina tamponada com fosfato (PBS), pelo menos uma vez, e ressuspender em meio de cultura completo para a propagação em cultura de células. </li><li> Depois de lavagem é completado, adicionar 1 ml de meio de cultura BNL 1ME A.7R.1 completo (10% de FBS inactivado pelo calor, 1% de penicilina / estreptomicina e 2 mM de L-glutamina) ao sedimento e ressuspender o sedimento em meio de cultura. </li><li> Semear o mix novamente suspensas de células em um prato de cultura de células. Incubar a placa de cultura de células a 37 ° C numa incubadora humidificada com ar e 5% de CO 2. </li><li> Mudar o meio de cultura celular a cada dois a três dias. Após cinco a sete dias, CTCs terão aderido à placa de cultura celular e começou a proliferar. Estas células permanecerá viável além de 25 passagens e após repetidos ciclos de congelamento e descongelamento 5. </li></ol> 6. Verificação de carcinoma hepatocelular linha de células tumorais circulantes <ol><li> Execute apolymerase reacção em cadeia (PCR) baseado, para amplificar um único segmento de DNA específica do gene globina do rato β-para confirmar que a nova linhas celulares estabelecidas CTC são células de ratinho, como a linha original é implantado BNL 1ME A.7R.1 HCC. Método foi originalmente descrito e validado por Steube et al. 5,8 </li><li> Realizar imunocoloração para o elemento de resposta específicos de hepatócitos marcador proteína de ligação cAMP como 3-3 (CREB3L3) usando um anticorpo específico. Isso irá confirmar que o romance CTCs estabelecidos são de fato hepatócitos como a linha de células BNL 1ME A.7R.1 original é implantado. 5 </li></ol>

<ol>
	<li>Ashworth, T. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+case+of+cancer+in+which+cells+similar+to+those+in+the+tumors+were+seen+in+the+blood+after+death.">A case of cancer in which cells similar to those in the tumors were seen in the blood after death.</a> Australian Medical Journal. 1869, 146-147 (14).</li><li>van de Stolpe, A., den Toonder, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Circulating+Tumor+Cells:+What+Is+in+It+for+the+Patient?+A+Vision+towards+the+Future.">Circulating Tumor Cells: What Is in It for the Patient? A Vision towards the Future.</a> Cancers. 6, 1195-1207 (2014).</li><li>Sheng, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Capture,+release+and+culture+of+circulating+tumor+cells+from+pancreatic+cancer+patients+using+an+enhanced+mixing+chip.">Capture, release and culture of circulating tumor cells from pancreatic cancer patients using an enhanced mixing chip.</a> Lab on a chip. 14, 89-98 (2014).</li><li>George, T. J., Ogunwobi, O. O., Sheng, W., Fan, Z. H., Liu, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=&#34;Tissue+is+the+issue&#34;:+circulating+tumor+cells+in+pancreatic+cancer.">&#34;Tissue is the issue&#34;: circulating tumor cells in pancreatic cancer.</a> Journal of gastrointestinal cancer. , (2014).</li><li>Ogunwobi, O. O., Puszyk, W., Dong, H. J., Liu, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epigenetic+upregulation+of+HGF+and+c-Met+drives+metastasis+in+hepatocellular+carcinoma.">Epigenetic upregulation of HGF and c-Met drives metastasis in hepatocellular carcinoma.</a> PloS one. 8, e63765 (2013).</li><li>Cheng, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transparent,+biocompatible+nanostructured+surfaces+for+cancer+cell+capture+and+culture.">Transparent, biocompatible nanostructured surfaces for cancer cell capture and culture.</a> International journal of nanomedicine. 9, 2569-2580 (2014).</li><li>Yu, M., Stott, S., Toner, M., Maheswaran, S., Haber, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Circulating+tumor+cells:+approaches+to+isolation+and+characterization.">Circulating tumor cells: approaches to isolation and characterization.</a> The Journal of cell biology. 192, 373-382 (2011).</li><li>Steube, K. G., Koelz, A. L., Drexler, H. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+and+verification+of+rodent+cell+lines+by+polymerase+chain+reaction.">Identification and verification of rodent cell lines by polymerase chain reaction.</a> Cytotechnology. 56, 49-56 (2008).</li><li>Pantel, K., Alix-Panabieres, C., Riethdorf, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cancer+micrometastases.">Cancer micrometastases.</a> Nature reviews. Clinical oncology. 6, 339-351 (2009).</li><li>Pantel, K., Brakenhoff, R. H., Brandt, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detection,+clinical+relevance+and+specific+biological+properties+of+disseminating+tumour+cells.">Detection, clinical relevance and specific biological properties of disseminating tumour cells.</a> Nature reviews. Cancer. 8, 329-340 (2008).</li><li>Cristofanilli, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Circulating+tumor+cells,+disease+progression,+and+survival+in+metastatic+breast+cancer.">Circulating tumor cells, disease progression, and survival in metastatic breast cancer.</a> The New England journal of medicine. 351, 781-791 (2004).</li><li>De Giorgi, U., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Circulating+tumor+cells+and+bone+metastases+as+detected+by+FDG-PET/CT+in+patients+with+metastatic+breast+cancer.">Circulating tumor cells and bone metastases as detected by FDG-PET/CT in patients with metastatic breast cancer.</a> Annals of oncology : official journal of the European Society for Medical Oncology / ESMO. 21, 33-39 (2010).</li><li>Eloubeidi, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endoscopic+ultrasound-guided+fine+needle+aspiration+biopsy+of+patients+with+suspected+pancreatic+cancer:+diagnostic+accuracy+and+acute+and+30-day+complications.">Endoscopic ultrasound-guided fine needle aspiration biopsy of patients with suspected pancreatic cancer: diagnostic accuracy and acute and 30-day complications.</a> The American journal of gastroenterology. 98, 2663-2668 (2003).</li><li>O'Toole, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessment+of+complications+of+EUS-guided+fine-needle+aspiration.">Assessment of complications of EUS-guided fine-needle aspiration.</a> Gastrointestinal endoscopy. 53, 470-474 (2001).</li></ol>

The authors declare that they have no competing financial interests.

In this study, how to isolate and propagate CTCs from the whole blood of a syngeneic mouse with HCC were described. The objective of this work is to enhance the ongoing studies of the mechanisms of cancer metastasis. 
A factor that contributes to the poor prognosis of many cancers is the lack of timely detection and consequent widespread dissemination of the malignancy3. CTCs originate from primary cancers and spread via the blood stream to distant organs. As such, CTCs are importan...

The cancer research community has known of the existence of circulating tumor cells (CTCs) since first being observed by Thomas Ashworth in 18691. Since then, CTCs have been shown to be important in tumor metastasis and disease progression2-5. Today, solid tumors are a major cause of morbidity and mortality worldwide. CTCs are rare cells that originate from primary tumors and travel through the blood stream to different organs of which only a small fraction ultimately develop into metastasis2-5. Notably, there is positive correlation between tumor size and CTC number3,4. 
An understanding of CTC biology can contribute to the search for targeted therapy. Furthermore, CTCs may have diagnostic applications. To achieve these potential clinical applications, one needs to overcome some current challenges to studying CTCs. One challenge is related to the fact that CTCs may be present as single cells or as clusters and they may even be able to change their phenotype in response to the blood microenvironment2. Moreover, detection can be very challenging, in part, due to the low count of CTCs (a few to hundreds per milliliter) among one billionhematologic cells per milliliterin the blood6. Nevertheless, in recent years, research into the potential clinical applications of CTCs from solid organ cancers has intensified.
Despite these efforts, the challenges of studying and understanding the role of CTCs persist due to the rarity of CTCs and the inadequacy of the technological tools currently available. Despite these challenges, the tremendous potential for clinical applications continues to be an incentive to pursue research into the role of CTCs in cancer metastasis.
We were recently successful in isolating and propagating in cell culture CTCs from an orthotopic syngeneic mouse model of hepatocellular carcinoma (HCC) metastasis5. The purpose of the current paper is to describe in detail all aspects of the successful methodology. The significance of this methodology lies in the fact that this approach may be modified in order to successfully isolate and propagate in culture human CTCs, thus enhancing the possibility of in vitro studies of CTC biology. 
There are multiple potential clinical applications for the use of CTCs. CTCs may be useful for prognosis, response monitoring, screening, dynamic monitoring of tumor molecular alterations, and personalized therapy4. Therefore, a better understanding of the biology of CTCs has high potential for clinical impact.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Heparin Sodium Salt 1G</td>
			<td>VWR</td>
			<td>89508-852</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BTX Tube Micro 1.5mL Clear NS</td>
			<td>VWR</td>
			<td>89511-254</td>
			<td>1.5mL&#160; pyrogen-free eppendorf Tubes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needle Sterile Disp BD 25GX1IN</td>
			<td>VWR</td>
			<td>BD305125</td>
			<td>25G Needle</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Slp Tip SRNG 1ml 200 each per pack</td>
			<td>VWR</td>
			<td>BD309659</td>
			<td>1mL syringe tip</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe 1ml leur lok Pk 100</td>
			<td>VWR</td>
			<td>BD309628</td>
			<td>1 mL syringe</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>VWR Forceps Tissue 6</td>
			<td>VWR</td>
			<td>82027-446</td>
			<td>Forceps</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cyromold intrm 15X15X5MM PK 100</td>
			<td>VWR</td>
			<td>25608-924</td>
			<td>Cyromold</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cryo-oct compund 4oz</td>
			<td>VWR</td>
			<td>25608-930</td>
			<td>Oct compound</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>VWR Slide sprfrst 25X75MM PK72</td>
			<td>VWR</td>
			<td>48311-703</td>
			<td>Slides</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>VWR Cover Glass #2 22X5oMM OZ</td>
			<td>VWR</td>
			<td>48-382-128</td>
			<td>Cover Glass</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>VWR Slide Box True North Fm Pu</td>
			<td>VWR</td>
			<td>89140-278</td>
			<td>Slide Box</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Super HT PAP Pen</td>
			<td>VWR</td>
			<td>89427-058</td>
			<td>PAP pen</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Water RNASe and DNAse free 2L</td>
			<td>VWR</td>
			<td>101454-204</td>
			<td>Nuclease Free Water</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Buffer Tris Ultra Pure Grade 500G</td>
			<td>VWR</td>
			<td>97061-796</td>
			<td>Tris Buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ammonium Chloride ACS Grade 2&#160; 5KG</td>
			<td>VWR</td>
			<td>97062-048</td>
			<td>Ammonium Chloride Buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Falcon Tissue Culture Dish 60 x 15mm Style polystyrene</td>
			<td>VWR</td>
			<td align="right">353002</td>
			<td>Tissue Culture Dish</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Clorox&#174; Germicidal Bleach, Regular</td>
			<td>VWR</td>
			<td>89501-620</td>
			<td>Clorox Bleach</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS, 1X (Phosphate-Buffered Saline) without calcium &#38; magnesium (500mL)</td>
			<td>Thermo Fischer Scientific</td>
			<td>21-040-CV</td>
			<td>PBS, 1X</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM, 1X&#160; with 4.5 g/L glucose &#38; L-glutamine without sodium pyruvate</td>
			<td>Thermo Fischer Scientific</td>
			<td>10-017-CV</td>
			<td>DMEM 1X media for BNL 1ME A.7R.1 cells</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Seru8m</td>
			<td>Thermo Fischer Scientific</td>
			<td>35-010-CV</td>
			<td>FBS</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin Streptomycin Solution, 100X</td>
			<td>Thermo Fischer Scientific</td>
			<td>30-002-Cl</td>
			<td>Penicillin Streptomycin</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sorvall Biofuge pico</td>
			<td>Thermo Fischer Scientific</td>
			<td align="right">75002411</td>
			<td>13000rpm Centrifuge</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

isolation and propagation of circulating tumor cells from a mouse cancer model

Cancer metastasis is the foremost cause of cancer-associated deaths. Recent studies have shown that circulating tumor cells (CTCs) are important in cancer metastasis. Indeed, the number of CTCs correlates with tumor size. Here, a detailed description is provided of a methodology for isolation and propagation of CTCs from a syngeneic mouse model of hepatocellular carcinoma (HCC) which allows for downstream analysis of potentially important molecular mechanisms of solid organ tumor metastasis. This method is efficient and reproducible. It is a non-invasive technique and, therefore, has potential to replace the invasive biopsy of tissues from humans which may be associated with complications. Therefore, the method discussed here allows for the isolation and propagation of CTCs from whole blood samples such that they can be examined and characterized. This has potential for future adaptation for clinical applications such as diagnosis, and personalized targeted therapy.

A metodologia aqui descrita CTC mostrou que pode ser isolado. Os ratos foram sacrificados aos experimental humanamente de ponto final. O processo envolveu asfixia dióxido de carbono, sangria intra-cardíaca e deslocamento cervical. Um esquema de fases principais do processo são ilustrados na Figura 2. As amostras de sangue total coletado por sangria intra-cardíaca foram processados ​​utilizando o protocolo descrito acima. Após o que, a centrifugação foi usada para determinar a...

Watch this Scientific Journal Video about Isolation and Propagation of Circulating Tumor Cells from a Mouse Cancer Model at JoVE.com

Isolation and Propagation of Circulating Tumor Cells from a Mouse Cancer Model

Circulating tumor cells (CTCs) have been shown to play an important role in tumor metastasis. Here, a method for the isolation and propagation of CTCs from the whole blood of a syngeneic mouse tumor model of hepatocellular carcinoma (HCC) metastasis is described.

Isolamento e propagação de células tumorais circulantes de um cancro do modelo do rato

Cancer metastasis is the foremost cause of cancer-associated deaths. Recent studies have shown that circulating tumor cells (CTCs) are important in cancer ...

isolation-propagation-circulating-tumor-cells-from-mouse-cancer

Research

JoVE Journal

Medicine

11.9K visualizações.  Hunter College of The City University of New York. Circulating tumor cells (CTCs) have been shown to play an important role in tumor metastasis. Here, a method for the isolation and propagation of CTCs from the whole blood of a syngeneic mouse tumor model of hepatocellular carcinoma (HCC) metastasis is described.