Queremos agradecer Sorin Group (Milão, Itália) para nos fornecer custom made circuitos de perfusão renal. Além disso agradecemos XVIVO Perfusão Inc. (Gotemburgo, Suécia) para nos fornecer solução Steen, BBraun AG (Melsungen, Alemanha) para o fornecimento de bombas de seringa, e Rieber GmbH &amp; Co KG (Reutlingen, Alemanha).

Nota: Uma vista geral esquemática do protocolo de estudo é apresentado na Figura 1. <img alt="Figura 1" src="/files/ftp_upload/52909/52909fig1.jpg" /> Figura 1. Protocolo do Estudo. Este protocolo do estudo ex vivo normotérmica de perfusão renal baseia-se num modelo suíno. Após a dissecção cirúrgica dos vasos do enxerto renal e lavagem com 500 ml de histidina-triptofano-cetoglutarato (HTK), o enxerto pode ser recuperada. Após armazenamento a frio (SCS), durante 3 horas, o enxerto de rim, é perfundido ex vivo normotérmica (NEVKP) por várias horas até ao transplante designado. Todos os animais receberam cuidados de acordo com os &#39;&#39; Princípios do Laboratório Animal Care &#39;&#39; formuladas pela Sociedade Nacional de Pesquisa Médica e da &#39;&#39; Guia para o Cuidado de Animais de Laboratório &#39;&#39; publicado pelo National Institutes of Health,Ontário, Canadá. O Comité do Instituto Geral de Toronto Research Animal Care aprovado todos os estudos. 1. Os animais <ol><li> Use suínos machos Yorkshire (27-33 kg) neste protocolo. </li></ol> 2. Órgão Retrieval <ol><li> Procedimento pré-operatório <ol><li> Casa dos porcos Yorkshire do sexo masculino em um centro de pesquisa para pelo menos uma semana para reduzir o seu nível de estresse. Jejuar os suínos para um mínimo de 6 horas antes da indução da anestesia. </li><li> Iniciar anestesia do porco por uma injecção intramuscular de cetamina (25 mg / kg), a atropina (0,04 mg / kg) e midazolam (0,15 mg / kg). Posteriormente, o transporte do animal a partir da instalação de alojamento para a sala de cirurgia (OR). </li><li> Coloque o porco em decúbito dorsal sobre a mesa da OR. Deixá-lo respirar 2 L de oxigênio com 5% de isoflurano espontaneamente. Depois de relaxamento, expor as cordas vocais com um laringoscópio e pulverizá-los com lidocaína a 2% para evitar um espasmo causado pela intubação. AfTer intubação com um tubo de 6,5 milímetros, bloquear a braçadeira com 3-5 ml de ar. Nota: capnometria revela a posição correta do tubo traqueal. </li><li> Abaixe o gás isoflurano a 2,5%. Definir o ventilador para 14-16 respirações / min e o volume corrente de 10 - 15 ml / kg de peso corporal. Monitorar o porco de perto. A freqüência cardíaca e saturação de oxigênio são registradas por oximetria de pulso. </li><li> Sob condições estéreis, introduzir um 8.5 Fr. x 10 centímetros do cateter na veia jugular na técnica de Seldinger 13. Portanto, utilizar uma agulha para perfurar o recipiente venosa. Após a introdução de um fio, substitua a agulha com um cateter. Elimine o fio e fixar o cateter à pele. Administrar 200 ml de solução de Ringer com lactato por hora durante toda a cirurgia. </li></ol></li><li> Procedimento Cirúrgico <ol><li> Na sequência de desinfecção e cobertura do campo cirúrgico, realizar uma incisão na linha média do xifóide até sínfise púbica. Para melhorar a exposição, alargar a abordagem cirúrgica comuma incisão lateral esquerdo. Cubra os grandes e pequenos entranhas com uma toalha e posicioná-los para o lado esquerdo para o ideal acesso para o rim direito. </li><li> Separa-se a veia cava inferior (IVC) a partir da aorta abdominal. Ramos da aorta ligadura da parte de trás da aorta. </li><li> Após a dissecção aórtica completa para as costas, passe uma ligadura em torno da aorta cranial aos ramos renais. Além disso, coloque duas ligaduras cranianos da bifurcação ilíaca. Colocar um laço em torno da artéria renal esquerda. </li><li> Livre o rim direito do seu tecido aderente. Dissecar a veia renal, artéria, e ureter. </li><li> Abra o diafragma e administrar 1000 UI de heparina por kg de peso do doador para o coração. Para um modelo de DCD, injetar 40 mval de KCl intracardial 3 min após heparinização sistêmica para induzir uma parada cardíaca. A parada cardíaca é valorizado como ponto de isquemia quente de partida. </li><li> Enquanto isso, para a coleta de sangue, conecte as linhas de sacos CPDA (citrato, fosfato, dextrose, umdenosine) para o cateter introduzido na veia jugular esquerda superior. Realizar uma rotação suave (1.500 xg sem freio). Remover plasma e creme leucocitário sob condição estéril (classe biossegurança gabinete II) e armazenar os eritrócitos para transfusão. </li><li> Canular da aorta com uma linha de limpeza de órgãos acima da bifurcação ilíaca. Amarre as ligaduras na aorta e da artéria renal esquerda. </li><li> Lavar o rim com uma solução de histidina-triptofano-cetoglutarato (HTK) com uma pressão de 100 cm de H 2 O. Fixe a veia torácica e recolher o sangue através do cateter jugular. Cortar a cava abdominal abaixo da veia renal a garantir uma descarga óptima do rim. </li><li> Depois de um flush completa do rim direito, recuperar o enxerto com um segmento da aorta. Cortar a veia renal e deixar o ureter longo. </li></ol></li><li> Voltar Tabela Preparação do enxerto de rim para a perfusão <ol><li> Livre o rim a partir de tecido aderente. Feche a parte cranial da aorta com um laço de umnd canular a parte inferior com um &quot;x 3/8&quot; redutor 1/4. Amarrar ramos arteriais menores provenientes da aorta. </li><li> Canular a veia renal com um &quot;x 3/8&quot; redutor directamente 1/4. Entubar o ureter com um 8 Fr. tubo de alimentação. </li><li> Inserir o rim em gelo até ao início da NEVKP. </li></ol></li></ol> 3. Normotérmica Ex vivo rim Perfusão (NEVKP) <ol><li> Preparação do circuito de perfusão O circuito de perfusão neonatal consiste em equipamento de circulação extracorpórea (Figura 2). <img alt="Figura 2" src="/files/ftp_upload/52909/52909fig2.jpg" /> Figura 2. Desenho esquemático do circuito de perfusão. O circuito é composto por neonatal tecnologia de circulação extracorpórea. A solução de perfusão é recolhido no reservatório venoso. Uma bomba centrífuga impele a solução para o oxigenador, onde é enriquecido com oxigénio e aquecida a 37 ° C. Depois passing bolha do filtro arterial, o perfusado é conduzido com uma pressão de 60-80 mm Hg através da artéria renal no rim. O fluxo venoso (0-3 mmHg) leva o perfusato de volta para o reservatório venoso. As bombas de infusão de seringa e garantir o fornecimento de compostos adicionais. A urina é recolhida em toda a perfusão. Características do circuito de perfusão são registrados continuamente. Amostras de gás venoso e arterial de hora em hora, e marcadores de lesão renal são analisados. <ol> <li> Ligue o circuito de perfusão feitos para o dispositivo de perfusão renal. </li><li> Conecte a tubulação ao reservatório venoso e oxigenador. Conecte o tubo de linha arterial para a saída arterial do oxigenador e posicionar o filtro de espuma em seu titular. Ligue a linha de purga. Ligar o tubo de cateter venoso para a entrada do reservatório venoso. </li><li> Para a avaliação durante a perfusão, conecte a sonda de temperatura na tomada arterial, conectar o medidor de vazão e do busensor de Bble ao tubo da linha arterial, e conectar as linhas de pressão. Conecte o sensor de nível. </li><li> Ligue as linhas de amostra venosa e arterial para os portos de amostras venosas e arteriais. </li><li> Posicione a câmara de órgão em um carrinho e introduzir o tubo venoso e arterial através dos buracos preparados. Fixe a tubulação para a mesa e câmara com firmeza. </li><li> Inserir o tubo de sucção para a bomba de roletes e posicionar uma ponta na câmara para recolher os fluidos. </li><li> Ligar o tubo de oxigénio para o tanque de gás contendo 95% de O2 / 5% de CO 2 e o oxigenador. Ligar o tubo de unidade de aquecimento para o oxigenador e a câmara de órgão. </li><li> Use tubulação grampos para fechar as linhas de fluxo venoso e arterial. Aplique outra braçadeira tubulação para o escoamento do reservatório venoso. </li></ol></li><li> Preparação da solução de perfusão, suplementos adicionais, e Injeção do Circuito <ol><li> Usar uma bomba de infusão para substituir a urina produzida comRinger lactato. </li><li> Usar uma bomba de seringa para administrar a nutrição (glicose 0,5 ml / h, aminoácidos 0,5 ml / h) e insulina (5 UI / h) para o reservatório venoso. Utilizar uma segunda bomba de seringa para infundir um vasodilatador (verapamil, 0,25 mg / h) directamente na linha arterial. </li><li> Encha o reservatório venoso com a solução de perfusão. Portanto, derrame Lactato de Ringer (175 ml), solução STEEN (200 ml), dro (27 ml), heparina (1000 IU), bicarbonato de sódio para ajustar o pH, e o gluconato de cálcio para dentro do reservatório venoso. Finalmente, adicionar eritrócitos lavados (125 mL). </li><li> Ligue a máquina coração pulmão (HLM). Ative os painéis de pressão, temperatura, nível e sensores de bolha. Ative o Sistema de Gestão de Dados (DMS) para gravar os dados em toda a perfusão. Activar a unidade de aquecimento para aquecer a solução de perfusão e a câmara de órgãos a 37 ° C. Abra o fornecimento de O 2. </li><li> Abra a braçadeira de tubulação atrás do reservatório venoso e libertar a centrifugal cabeça da bomba de ar completamente. Iniciar a bomba centrífuga a 1000 rpm e permitir que a solução a ser impelido ao longo do circuito. Prender o tubo contornando o filtro arterial e liberar o ar do filtro arterial. </li><li> Zero as linhas de pressão. Activa as bombas de seringa e de infusão. </li></ol></li><li> Kidney Graft Perfusão <ol><li> Remover o rim a partir do gelo, e posicionar o rim no fundamento na câmara de órgão. Coloque o cateter de urina para o coletor de urina. Depois de garantir que o venoso e arterial da tubulação estão livres de ar, conecte os conectores para a tubulação. </li><li> Feche o atalho entre o arterial e linhas de tubos venosos. Definir a pressão arterial para 75 mmHg através da regulação da velocidade da bomba centrífuga. </li><li> Pressões de registro, fluxo arterial, temperatura e presença de bolhas continuamente com a DMS. Observar os valores cuidadosamente ao longo da perfusão. Durante a perfusão, vazamento de sangue para dentro da câmara é Collected através do tubo de sucção de volta para o reservatório venoso. </li><li> Anotar a quantidade de urina produzida. Recolha de sangue e urina amostras venosas horária. Monitorar a perfusão venosa e tomando amostras de gases no sangue arterial e aspartato aminotransferase (AST), e análise de lactato. </li><li> No final da perfusão, desconecte a tubulação da artéria e veia renal, lave o enxerto com frio HTK, e armazená-lo no gelo em um saco órgão estéril até o transplante. </li></ol></li></ol>

<ol>
	<li>Wolfe, R. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+mortality+in+all+patients+on+dialysis,+patients+on+dialysis+awaiting+transplantation,+and+recipients+of+a+first+cadaveric+transplant.">Comparison of mortality in all patients on dialysis, patients on dialysis awaiting transplantation, and recipients of a first cadaveric transplant.</a> The New England journal of medicine. 341 (23), 1725-1730 (1999).</li><li>Rabbat, C. G., Thorpe, K. E., Russell, J. D., Churchill, D. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+mortality+risk+for+dialysis+patients+and+cadaveric+first+renal+transplant+recipients+in+Ontario,+Canada.">Comparison of mortality risk for dialysis patients and cadaveric first renal transplant recipients in Ontario, Canada.</a> Journal of the American Society of Nephrology : JASN. 11 (5), 917-922 (2000).</li><li>Fuquay, R., Teitelbaum, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transplant+outcomes+and+dialysis+modality.">Transplant outcomes and dialysis modality.</a> Contributions to nephrology. 178, 251-257 (2012).</li><li>Ingsathit, A., Kamanamool, N., Thakkinstian, A., Sumethkul, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Survival+advantage+of+kidney+transplantation+over+dialysis+in+patients+with+hepatitis+C:+a+systematic+review+and+meta-analysis.">Survival advantage of kidney transplantation over dialysis in patients with hepatitis C: a systematic review and meta-analysis.</a> Transplantation. 95 (7), 943-948 (2013).</li><li>Davis, A. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+extent+and+predictors+of+waiting+time+geographic+disparity+in+kidney+transplantation+in+the+United+States.">The extent and predictors of waiting time geographic disparity in kidney transplantation in the United States.</a> Transplantation. 97 (10), 1049-1057 (2014).</li><li>Perico, N., Cattaneo, D., Sayegh, M. H., Remuzzi, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Delayed+graft+function+in+kidney+transplantation.">Delayed graft function in kidney transplantation.</a> Lancet. 364 (9447), 1814-1827 (2004).</li><li>Maggiore, U., Cravedi, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+marginal+kidney+donor.">The marginal kidney donor.</a> Current opinion in organ transplantation. 19 (4), 372-380 (2014).</li><li>Dittrich, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Influence+of+cold+storage+on+renal+ischemia+reperfusion+injury+after+non-heart-beating+donor+explantation.">Influence of cold storage on renal ischemia reperfusion injury after non-heart-beating donor explantation.</a> Nephron. Experimental nephrology. 96 (3), e97-e102 (2004).</li><li>Summers, D. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+donor+age+and+cold+storage+time+on+outcome+in+recipients+of+kidneys+donated+after+circulatory+death+in+the+UK:+a+cohort+study.">Effect of donor age and cold storage time on outcome in recipients of kidneys donated after circulatory death in the UK: a cohort study.</a> Lancet. 381 (9868), 727-734 (2013).</li><li>Hosgood, S. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=et+al.+pilot+study+assessing+the+feasibility+of+a+short+period+of+normothermic+preservation+in+an+experimental+model+of+non+heart+beating+donor+kidneys.">et al. pilot study assessing the feasibility of a short period of normothermic preservation in an experimental model of non heart beating donor kidneys.</a> The Journal of surgical research. 171 (1), 283-290 (2011).</li><li>Hosgood, S. A., Patel, M., Nicholson, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+conditioning+effect+of+ex+normothermic+perfusion+in+an+experimental+kidney+model.">The conditioning effect of ex normothermic perfusion in an experimental kidney model.</a> The Journal of surgical research. 182 (1), 153-160 (2013).</li><li>Nicholson, M. L., Hosgood, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Renal+transplantation+after+ex+vivo+normothermic+perfusion:+the+first+clinical+study.+American+journal+of+transplantation.">Renal transplantation after ex vivo normothermic perfusion: the first clinical study. American journal of transplantation.</a> official journal of the American Society of Transplantation and the American Society of Transplant Surgeons. 13 (5), 1246-1252 (2013).</li><li>Seldinger, S. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Catheter+replacement+of+the+needle+in+percutaneous+arteriography;+a+new+technique.">Catheter replacement of the needle in percutaneous arteriography; a new technique.</a> Acta radiologica. 39 (5), 368-376 (1953).</li><li>Stubenitsky, B. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Exsanguinous+metabolic+support+perfusion--a+new+strategy+to+improve+graft+function+after+kidney+transplantation.">Exsanguinous metabolic support perfusion--a new strategy to improve graft function after kidney transplantation.</a> Transplantation. 70 (8), 1254-1258 (2000).</li><li>Delpech, P. O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+warm+ischaemia+combined+with+cold+preservation+on+the+hypoxia-inducible+factor+1&#945;+pathway+in+an+experimental+renal+autotransplantation+model.">Effects of warm ischaemia combined with cold preservation on the hypoxia-inducible factor 1&#945; pathway in an experimental renal autotransplantation model.</a> The British journal of surgery. , (1002).</li><li>Cypel, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Normothermic+ex+vivo+lung+perfusion+in+clinical+lung+transplantation.">Normothermic ex vivo lung perfusion in clinical lung transplantation.</a> The New England journal of medicine. 364 (15), 1431-1440 (2011).</li><li>Knaak, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Subnormothermic+Ex+vivo+liver+perfusion+reduces+endothelial+cell+and+bile+duct+injury+after+DCD+pig+liver+transplantation.">Subnormothermic Ex vivo liver perfusion reduces endothelial cell and bile duct injury after DCD pig liver transplantation.</a> Liver transplantation : official publication of the American Association for the Study of Liver Diseases and the International Liver Transplantation Society. , (2014).</li><li>Hosgood, S. A., Nicholson, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ex+vivo+normothermic+perfusion+of+declined+human+kidneys+after+inadequate+in+situ+perfusion.">Ex vivo normothermic perfusion of declined human kidneys after inadequate in situ perfusion.</a> American journal of transplantation official journal of the American Society of Transplantation and the American Society of Transplant Surgeons. 14 (2), 490-491 (2014).</li><li>Op den Dries, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ex+vivo+normothermic+machine+perfusion+and+viability+testing+of+discarded+human+donor+livers.">Ex vivo normothermic machine perfusion and viability testing of discarded human donor livers.</a> American journal of transplantation official journal of the American Society of Transplantation and the American Society of Transplant Surgeons. 13 (5), 1327-1335 (2013).</li></ol>

The authors have nothing to disclose.

Este estudo demonstra que NEVKP com uma solução baseada em eritrócitos pode ser realizada com excelentes resultados para um período de tempo prolongado num modelo suíno. Durante as 10 horas de perfusão ex vivo os rins demonstraram parâmetros estáveis ​​de perfusão, metabolismo renal activa, homeostase e lesão renal mínima. A produção de urina e a lesão renal dependerá da composição da solução de perfusão. É importante manter a pressão oncótica e osmolaridade do perfusato no intervalo fisiológico. Em particular, uma baixa pressão oncótica resultará numa produção unphysiologically alta urina com edema renal significativa e marcadores crescentes de lesão renal. STEEN solução contendo albumina é escolhido neste modelo para regular a pressão oncótica e para simular condições fisiológicas para o rim. O bicarbonato de sódio e gluconato de cálcio são adicionados ao sistema para conseguir valores fisiológicos de pH, HCO3 </sub&gt;, sódio, potássio, cálcio, cloreto e. A seleção e dosagem do vasodilatador é importante para garantir o fluxo de sangue suficiente e suprimento de oxigênio. A técnica de normotérmica ex vivo perfusão renal tem várias limitações. Ex vivo de perfusão não está associado com suporte hormonal do rim, o que poderia afectar negativamente os períodos mais longos de perfusão. Além disso, a nova tecnologia, neste ponto em tempo, está associada a um aumento dos custos. Futuras melhorias poderia simplificar a tecnologia e reduzir os custos. O desenvolvimento de um dispositivo de perfusão renal portátil pode permitir evitar completamente armazenamento frio renal no futuro. A escassez de órgãos grave e persistente leva a um aumento do uso de órgãos marginais (ECD ou DCD renais enxertos) 7. Atualmente, preservação de órgãos é baseado em armazenamento a frio estático ou máquina de perfusão hipotérmica. Como um tempo de isquemia fria prolongada tem um imp significativaagir sobre o resultado da função renal de critérios padrão 15 e enxertos marginais 8,9, novas técnicas de preservação minimizando armazenamento a frio são de particular interesse 16-19. Um dos principais obstáculos para usar enxertos marginais mais extensivamente é a incapacidade para avaliar a qualidade e a viabilidade de órgãos antes do transplante. Actualmente, somente parâmetros clínicos tais como a idade do dador, doenças relacionadas com doadores, e tempo de isquemia quente dos enxertos são utilizados para a decisão de um órgão é aceite ou recusado para transplante. Ao preservar o enxerto sob condições normotérmicas, a avaliação do enxerto com base nas características de perfusão e de dados é possível. Parâmetros em tempo real, tais como fluxo renal vascular, a pressão, a resistência intra-renal, a produção de urina, consumo de oxigênio e parâmetros de lesão renal (como AST e lactato) é suposto ser parâmetros úteis para avaliar a viabilidade do enxerto. Em additião, o metabolismo activo durante NEVKP permite a aplicação de estratégias para melhorar a reparação de enxertos renais marginais antes do transplante. Por exemplo, a inibição das vias pró-inflamatórias, imunomodulação, de transferência de genes, bem como a administração de células-tronco pode ser futuras técnicas para modificar enxertos renais, durante o tempo de preservação e melhorar resultado destinatário.

Os rins são os órgãos sólidos transplantados com mais freqüência. Para os pacientes que sofrem de doença renal em estágio final, o transplante renal oferece uma melhor expectativa de vida e melhoria da qualidade de vida quando comparado à diálise 1-4. A falta de órgãos persistindo representa um problema grave no campo da medicina de transplantes (Tabela 1) 5. <table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0"><tbody><tr><td></td><td> Estados Unidos * </td><td> Região Eurotransplant ** </td></tr><tr><td> Os pacientes em lista de espera de transplante de rim </td><td> 101.563 (fevereiro de 2015) </td><td> 10.689 (dezembro de 2014) </td></tr><tr><td> Rins de doadores falecidos transplantado em 2014 </td><td> 10.650 </td><td> 3119 </td></tr><tr><td> A mediana do tempo de espera para transplante de doador de rim falecido (em anos) </td><td> Até 5 anos * </td><td> Até 4 anos ** </td></tr></tbody></table> Tabela 1. rimEscassez de enxerto nos EUA e Eurotransplant Região. O resultado do transplante renal é negativamente afetada pelo tempo de espera, com pior prognóstico para pacientes submetidos a diálise prolongada 6. Isso provocou interesse em enxertos renais marginais como uma fonte adicional de doadores, como rins de doadores mais velhos, doadores com múltiplas comorbidades (Extended critérios doadores (DPI) e rins doados após a morte cardíaca (DCD). Rins de doadores marginais que teriam sido recusou no passado agora são considerados para o transplante 7. Um dos principais obstáculos para a utilização de enxertos de rim marginais, é a técnica de preservação de armazenamento anóxica frio. Actualmente, os enxertos de rim são armazenados estaticamente em gelo ou perfundido a 4 ° C sem oxigénio. A técnica de conservação anóxica fria está associado com a lesão permanente do enxerto durante a preservação renal e não permite a avaliação do enxerto por causa da falta de metabolism e a produção de urina. Em particular, os enxertos de rim marginais tolerar armazenamento a frio mal, resultando em lesão renal significativa, e altos índices de função tardia do enxerto (DGF) 8,9. DGF é um fator prognóstico para a função do enxerto a longo prazo pobre. Extracorpórea perfusão renal é um método alternativo para a preservação, avaliação e reparação de órgãos. Em um modelo suíno, resultados benéficos foram apresentados para os rins perfundidos ex vivo em condições normotérmicas 10,11. O primeiro ensaio clínico realizado em 2013 demonstrou uma menor taxa de função tardia do enxerto quando rins recuperados de critérios estendidos doadores foram perfundidos por 1 hora imediatamente antes do transplante 12. Este artigo apresenta um modelo de normothermic ex vivo de perfusão renal (NEVKP). O objetivo deste estudo é a redução do tempo de isquemia fria aplicado ao mínimo e prorrogar o período de NEVKP. NEVKPé um método de conservação alternativa que tem por objectivo reduzir os danos que podem ser causados ​​por técnicas de armazenamento a frio.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Neonatal cardiopulmonary bypass technology</td>
			<td>SORIN GROUP Canada Inc (Markhan, Canada)</td>
			<td>Custom made</td>
			<td>Neonatal venous reservoir D100 (500 mL, 1/16&#34; in- and outflow), neonatal oxygenator D100, centrifugal pump head (Revolution), arterial bubble filter (D130)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heart lung machine, St&#246;ckert S3</td>
			<td>SORIN GROUP Canada Inc (Markhan, Canada)</td>
			<td>Custom made</td>
			<td>Centrifugal pump, roller pump, control panel (sensors for pressure, flow, temperature, bubbles, and level), oxygen blender, heater unit</td>
		</tr>
		<tr>
			<td rowspan="3">Tubing</td>
			<td>SORIN GROUP Canada Inc (Markhan, Canada)</td>
			<td>01906BPC SG XS</td>
			<td>3/16&#34;x 1/16&#34;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>019071PC SG XS</td>
			<td>1/4&#34;x 1/16&#34;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>019060PC SG XH</td>
			<td>3/8&#34;x 1/16&#34;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tubing connectors</td>
			<td>SORIN GROUP Canada Inc (Markhan, Canada)</td>
			<td></td>
			<td>Various sizes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>STEEN solution</td>
			<td>XVIVO (G&#246;teborg, SWE)</td>
			<td>19004</td>
			<td>200 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ringer&#39;s lactate</td>
			<td>Baxter (Mississauga, ON, CAN)</td>
			<td>JB2324</td>
			<td>175 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium bicarbonate</td>
			<td>Hospira (Montr&#233;al, QC, CAN)</td>
			<td>6625050</td>
			<td>pH dependent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Calcium gluconate</td>
			<td>Pharmaceutical Partners of Canada (Richmond Hill, ON)</td>
			<td>C31110</td>
			<td>Calcium dependent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heparin</td>
			<td>Sandoz Canada Inc (Toronto, ON, CAN)</td>
			<td>10750</td>
			<td>1000 IU</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Amino acid and glucose, Travasol 10%</td>
			<td>Baxter (Mississauga, ON, CAN)</td>
			<td>JB6760</td>
			<td>1 mL/h</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fast acting insulin, Novorapid</td>
			<td>Novo Nordisk Canada Inc (Mississauga, ON, CAN)</td>
			<td>DS6H748</td>
			<td>5 IE/h</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Verapamil</td>
			<td>Sandoz Canada Inc (Quebec, QC, CAN)</td>
			<td>52216</td>
			<td>0,25 mg/h</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

normothermic ex vivo kidney perfusion for the preservation of kidney grafts prior to transplantation

Kidney transplantation has become a well-established treatment option for patients with end-stage renal failure. The persisting organ shortage remains a serious problem. Therefore, the acceptance criteria for organ donors have been extended leading to the usage of marginal kidney grafts. These marginal organs tolerate cold storage poorly resulting in increased preservation injury and higher rates of delayed graft function. To overcome the limitations of cold storage, extensive research is focused on alternative normothermic preservation methods.
Ex vivo normothermic organ perfusion is an innovative preservation technique. The first experimental and clinical trials for ex vivo lung, liver, and kidney perfusions demonstrated favorable outcomes.
In addition to the reduction of cold ischemic injury, the method of normothermic kidney storage offers the opportunity for organ assessment and repair. This manuscript provides information about kidney retrieval, organ preservation techniques, and isolated ex vivo normothermic kidney perfusion (NEVKP) in a porcine model. Surgical techniques, set up for the perfusion solution and the circuit, potential assessment options, and representative results are demonstrated.

Na sequência dos resultados de seis experimentos utilizando um modelo de recuperação de rim-coração batendo são apresentados. Depois de descarga situ e recuperação do rim, os enxertos foram armazenadas em gelo durante 3 h (SCS), enquanto que os eritrócitos foram preparados. Para a definição clínica, este simula o tempo necessário para a recuperação e a preparação da tabela de volta. NEVKP foi realizada durante 10 h. Para manter as condições fisiológicas e simular uma in vivo circundante, para o rim, a câmara de órgãos devem ser aquecidos e selados. Perfusão e solução de substituição de urina deve representar valores fisiológicos para análise de gás no sangue, pressão oncótica, e osmolaridade. Os valores normais (valores basais) obtidos a partir de porcos Yorkshire in situ, estão localizados em cada descrição da figura, respectivamente (Figuras 3-13). O objectivo da NEVKP é para assegurar que o enxerto é fornecido com oxigénio e de nutrição suficientes. Como isquemia cAusa vasoconstrição, aumentando assim a resistência intra-renal, alcançando um fluxo constante, com uma pressão estável é um bom indicador para a oxigenação adequada. Depois de a temperatura alvo de enxerto de 37 ° C, é alcançado através de reaquecimento do órgão após SCS, os valores de fluxo e resistência intra-renal permanecem estável, com uma pressão constante fisiológico de cerca de 60-80 mm Hg ao longo de toda a perfusão (Figuras 3 e 4). A quantidade de produção de urina depende principalmente da composição da solução de perfusão (Figura 5). Medições horárias de venosa e arterial pO 2 revelam a actividade metabólica do rins. O consumo de oxigênio foi calculada usando a equação ((pO 2 arte - pO 2 ven) x fluxo / peso) (Figura 6) 14. Durante a perfusão o pH, HCO 3, e electrólitos são estáveis ​​sem a necessidade de intervenções (Figuras 7-10). Em tempo real AST e medições de lactato servir para monitorar danos celulares. Não foi detectada nenhuma aumento dos parâmetros de danos nas células durante o período NEVKP (Figuras 11 e 12). A osmolaridade da solução de perfusão é estável (Figura 13). A avaliação histológica revela alterações menores (Figura 14-16). <img alt="Figura 3" src="/files/ftp_upload/52909/52909fig3.jpg" /> Figura 3. fluxo arterial média com desvio padrão (ml / min). Durante a perfusão o fluxo continua numa gama fisiológica. Valores fisiológicos de suíno, medidas in situ: significa art. fluxo: 170 ± 57 ml / min (intervalo 83-325 ml / min). <img alt="Figura 4" src="/files/ftp_upload/52909/52909fig4.jpg" /> Figura 4. resistência intrarrenal (TIR), média e desvio padrão (mmHg / </strong&gt; Ml / min). A pressão arterial média (MAP) permanece constante entre 60 e 80 mmHg. A resistência intra-renal é abaixo de 0,5 mm Hg / ml / min constantemente. <img alt="Figura 5" src="/files/ftp_upload/52909/52909fig5.jpg" /> Figura 5. O volume total de urina, média e desvio padrão (ml). O volume total de urina depende principalmente da composição da solução de perfusão. Quanto maior for a pressão oncótica e a osmolaridade, menor a produção de urina. <img alt="Figura 6" src="/files/ftp_upload/52909/52909fig6.jpg" /> Figura 6. consumo de oxigênio, média e desvio padrão (ml / min / g). <img alt="Figura 7" src="/files/ftp_upload/52909/52909fig7.jpg" /> Figura 7. venosa pH, média e desvio padrão. A rema pHins constante em uma faixa fisiológica sem a administração de bicarbonatos. Suínos valores fisiológicos, medidas in situ: pH 7,46 ± 0,06 (faixa de 7,34-7,63). <img alt="Figura 8" src="/files/ftp_upload/52909/52909fig8.jpg" /> Figura 8. HCO 3 venosa, média e desvio padrão (mmol / l). O HCO 3 permanece numa gama fisiológica, sem administração de bicarbonatos. Suínos valores fisiológicos, medidos in situ: HCO 3 30,3 ± 2,4 mmol / L (intervalo 21,6-35,8 mmol / L). <img alt="Figura 9" src="/files/ftp_upload/52909/52909fig9.jpg" /> Figura 9. concentração de sódio venoso, média e desvio padrão (mmol / L). O sódio permanece numa gama fisiológica. Valores fisiológicos de suíno, medidas in situ: 137,1 &amp;# 177; 3,8 mmol / L (gama 118,7-140,9 mmol / L). <img alt="Figura 10" src="/files/ftp_upload/52909/52909fig10.jpg" /> Figura 10. concentração de potássio venosa, média e desvio padrão (mmol / L). O potássio permanece constante numa gama fisiológica. Suínos valores fisiológicos, medidos in situ: 3,85 ± 0,46 mmol / L (gama 3,5-5,36 mmol / L). <img alt="Figura 11" src="/files/ftp_upload/52909/52909fig11.jpg" /> Figura 11. venoso aspartato aminotransferase, média e desvio padrão. (AST; U / L) Na ex vivo de perfusão renal normotérmica, AST demonstra um marcador de lesão celular. Valores AST são baixos em toda a perfusão. <img alt="Figura 12" src="/files/ftp_upload/52909/52909fig12.jpg" /> Figura 12: Lactato<html> , Média e desvio padrão (mmol / L). No ex vivo perfusão renal normotérmica, lactato representa um marcador de lesão celular. Os valores são estáveis ​​durante a perfusão. <img alt="Figura 13" src="/files/ftp_upload/52909/52909fig13.jpg" /> Figura 13:. Osmolaridade do soro, média e desvio padrão (mOsm / L) Uma osmolaridade constante na solução de perfusão assegura produção baixa, mas constante de urina. Suínos valores fisiológicos, medidos in situ: 282 ± 1,7 mOsm / L (intervalo de 279-283 mOsm / l). <img alt="Figura 14" src="/files/ftp_upload/52909/52909fig14.jpg" /> Figura 14:. Histologia (H &amp; E) 50X / 200X ampliação da junção corticomedular mostrando vacuolização tubular leve. Não havia sinais de necrose.arget = &quot;_ blank&quot;&gt; Clique aqui para ver uma versão maior desta figura. <img alt="Figura 15" src="/files/ftp_upload/52909/52909fig15.jpg" /> Figura 15: Histologia (PAS) 50X / 200X ampliação da junção corticomedular mostrando vacuolização tubular leve.. Sem sinais de necrose. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/52909/52909fig15large.jpg" target="_blank">Por favor clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a> <img alt="Figura 16" src="/files/ftp_upload/52909/52909fig16.jpg" /> 25X / 200X ampliação Histologia (TUNEL coloração): Figura 16.. Muito ocasionalmente núcleos são corados demonstrando taxas muito baixas de apoptose. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/52909/52909fig16large.jpg" target="_blank">Por favor clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>

Watch this Scientific Journal Video about Normothermic Ex Vivo Kidney Perfusion for the Preservation of Kidney Grafts prior to Transplantation at JoVE.com

Normothermic Ex Vivo Kidney Perfusion for the Preservation of Kidney Grafts prior to Transplantation

A escassez de órgãos grave resultou em aumento do uso de enxertos de rim marginais para transplante. Isso provocou interesse em métodos alternativos de armazenamento, uma vez que os enxertos marginais especialmente tolerar armazenamento a frio mal. A técnica de normothermic ex vivo de perfusão renal (NEVKP) representa um método de conservação de enxertos de rim romance antes do transplante.

Normotérmica<em&gt; Ex Vivo</em&gt; Perfusão rim para a Preservação do rim Os enxertos antes do transplante

Kidney transplantation has become a well-established treatment option for patients with end-stage renal failure. The persisting organ shortage remains a ...

normothermic-ex-vivo-kidney-perfusion-for-preservation-kidney-grafts

Research

JoVE Journal

Medicine

Normothermic Ex Vivo Kidney Perfusion for the Preservation of Kidney Grafts prior to Transplantation

18.9K visualizações.  Toronto General Hospital.  A escassez de órgãos grave resultou em aumento do uso de enxertos de rim marginais para transplante. Isso provocou interesse em métodos alternativos de armazenamento, uma vez que os enxertos marginais especialmente tolerar armazenamento a frio mal. A técnica de normothermic ex vivo de perfusão renal (NEVKP) representa um método de conservação de enxertos de rim romance antes do transplante. 

Vídeo: Normothermic Ex Vivo Kidney Perfusion for the Preservation of Kidney Grafts prior to Transplantation

A Method for Murine Islet Isolation and Subcapsular Kidney Transplantation

Since the early pioneering work of Ballinger and Reckard demonstrating that transplantation of islets of Langerhans into diabetic rodents could normalize their blood glucose levels, islet transplantation has been proposed to be a potential treatment for type 1 diabetes 1,2. More recently, advances in human islet transplantation have further strengthened this view 1,3. However, two major limitations prevent islet transplantation from being a widespread clinical reality: (a) the requirement for large numbers of islets per patient, which severely reduces the number of potential recipients, and (b) the need for heavy immunosuppression, which significantly affects the pediatric population of patients due to their vulnerability to long-term immunosuppression. Strategies that can overcome these limitations have the potential to enhance the therapeutic utility of islet transplantation.
Islet transplantation under the mouse kidney capsule is a widely accepted model to investigate various strategies to improve islet transplantation. This experiment requires the isolation of high quality islets and implantation of islets to the diabetic recipients. Both procedures require surgical steps that can be better demonstrated by video than by text. Here, we document the detailed steps for these procedures by both video and written protocol. We also briefly discuss different transplantation models: syngeneic, allogeneic, syngeneic autoimmune, and allogeneic autoimmune.

Transplantation of isolated islets has been proposed to be a potential treatment for type 1 diabetes. Here we describe a method to isolate islets from mouse pancreata and transplant them to the subcapsular space of the kidney.

Um método para isolamento de ilhotas murino e transplante renal subcapsular

Since the early pioneering work of Ballinger and Reckard demonstrating that transplantation of islets of Langerhans into diabetic rodents could normalize ...

Medicina

Steps for the Autologous Ex vivo Perfused Porcine Liver-kidney Experiment

The use of ex vivo perfused models can mimic the physiological conditions of the liver for short periods, but to maintain normal homeostasis for an extended perfusion period is challenging. We have added the kidney to our previous ex vivo perfused liver experiment model to reproduce a more accurate physiological state for prolonged experiments without using live animals. Five intact livers and kidneys were retrieved post-mortem from sacrificed pigs on different days and perfused for a minimum of 6 hr. Hourly arterial blood gases were obtained to analyze pH, lactate, glucose and renal parameters. The primary endpoint was to investigate the effect of adding one kidney to the model on the acid base balance, glucose, and electrolyte levels. The result of this liver-kidney experiment was compared to the results of five previous liver only perfusion models. In summary, with the addition of one kidney to the ex vivo liver circuit, hyperglycemia and metabolic acidosis were improved. In addition this model reproduces the physiological and metabolic responses of the liver sufficiently accurately to obviate the need for the use of live animals. The ex vivo liver-kidney perfusion model can be used as an alternative method in organ specific studies. It provides a disconnection from numerous systemic influences and allows specific and accurate adjustments of arterial and venous pressures and flow.

Steps for the Autologous Ex vivo Perfused Porcine Liver-kidney Experiment

Study of the animal organ physiology can be achieved by performing an experimental ex vivo perfusion system. The addition of a porcine kidney, as a homeostatic organ to our previously developed ex vivo liver perfusion model can be a principal step to achieve a better physiological environment.

The use of ex vivo perfused models can mimic the physiological conditions of the liver for short periods, but to maintain normal homeostasis for an ...

Technique of Subnormothermic Ex Vivo Liver Perfusion for the Storage, Assessment, and Repair of Marginal Liver Grafts

The success of liver transplantation has resulted in a dramatic organ shortage. In most transplant regions 20-30% of patients on the waiting list for liver transplantation die without receiving an organ transplant or are delisted for disease progression. One strategy to increase the donor pool is the utilization of marginal grafts, such as fatty livers, grafts from older donors, or donation after cardiac death (DCD). The current preservation technique of cold static storage is only poorly tolerated by marginal livers resulting in significant organ damage. In addition, cold static organ storage does not allow graft assessment or repair prior to transplantation.
These shortcomings of cold static preservation have triggered an interest in warm perfused organ preservation to reduce cold ischemic injury, assess liver grafts during preservation, and explore the opportunity to repair marginal livers prior to transplantation. The optimal pressure and flow conditions, perfusion temperature, composition of the perfusion solution and the need for an oxygen carrier has been controversial in the past.
In spite of promising results in several animal studies, the complexity and the costs have prevented a broader clinical application so far. Recently, with enhanced technology and a better understanding of liver physiology during ex vivo perfusion the outcome of warm liver perfusion has improved and consistently good results can be achieved.
This paper will provide information about liver retrieval, storage techniques, and isolated liver perfusion in pigs. We will illustrate a) the requirements to ensure sufficient oxygen supply to the organ, b) technical considerations about the perfusion machine and the perfusion solution, and c) biochemical aspects of isolated organs.

Technique of Subnormothermic Ex Vivo Liver Perfusion for the Storage, Assessment, and Repair of Marginal Liver Grafts

Marginal grafts, such as fatty livers, grafts from older donors, or livers retrieved after cardiac death (DCD) tolerate conventional, cold static storage only poorly. We developed a novel model of subnormothermic ex vivo liver perfusion for preservation, assessment, and repair of marginal liver grafts prior to transplantation.

Técnica de Subnormothermic<em&gt; Ex Vivo</em&gt; Fígado de Perfusão para o armazenamento, Avaliação e Reparação de enxertos de fígado Marginal

The success of liver transplantation has resulted in a dramatic organ shortage. In most transplant regions 20-30% of patients on the waiting list for ...

Mouse Kidney Transplantation: Models of Allograft Rejection

Rejection of the transplanted kidney in humans is still a major cause of morbidity and mortality. The mouse model of renal transplantation closely replicates both the technical and pathological processes that occur in human renal transplantation. Although mouse models of allogeneic rejection in organs other than the kidney exist, and are more technically feasible, there is evidence that different organs elicit disparate rejection modes and dynamics, for instance the time course of rejection in cardiac and renal allograft differs significantly in certain strain combinations. This model is an attractive tool for many reasons despite its technical challenges. As inbred mouse strain haplotypes are well characterized it is possible to choose donor and recipient combinations to model acute allograft rejection by transplanting across MHC class I and II loci. Conversely by transplanting between strains with similar haplotypes a chronic process can be elicited were the allograft kidney develops interstitial fibrosis and tubular atrophy. We have modified the surgical technique to reduce operating time and improve ease of surgery, however a learning curve still needs to be overcome in order to faithfully replicate the model. This study will provide key points in the surgical procedure and aid the process of establishing this technique.

Here, we present a protocol to study the immunology of rejection. The surgical model presented reports a short operating time and a concise technique. Depending on the donor-recipient strain combination, the transplanted kidney may develop acute cellular rejection or chronic allograft damage, defined by interstitial fibrosis and tubular atrophy.

Rato Transplante Renal: Modelos de rejeição de enxertos

Rejection of the transplanted kidney in humans is still a major cause of morbidity and mortality. The mouse model of renal transplantation closely ...

Ex Situ Normothermic Machine Perfusion of Donor Livers

In contrast to conventional static cold preservation (0-4 &#176;C), ex situ machine perfusion may provide better preservation of donor livers. Continuous perfusion of organs provides the opportunity to improve organ quality and allows ex situ viability assessment of donor livers prior to transplantation. This video article provides a step by step protocol for ex situ normothermic machine perfusion (37 &#176;C) of human donor livers using a device that provides a pressure and temperature controlled pulsatile perfusion of the hepatic artery and continuous perfusion of the portal vein. The perfusion fluid is oxygenated by two hollow fiber membrane oxygenators and the temperature can be regulated between 10 &#176;C and 37 &#176;C. During perfusion, the metabolic activity of the liver as well as the degree of injury can be assessed by biochemical analysis of samples taken from the perfusion fluid. Machine perfusion is a very promising tool to increase the number of livers that are suitable for transplantation.

Ex Situ Normothermic Machine Perfusion of Donor Livers

Here we present a protocol describing oxygenated ex situ machine perfusion of donor liver grafts. This article contains a step by step protocol to procure and prepare the liver graft for machine perfusion, prepare the perfusion fluid, prime the perfusion machine and perform oxygenated normothermic machine perfusion of the liver graft.

Ex Situ Normotérmica máquina de perfusão de fígados doados

In contrast to conventional static cold preservation (0-4 &#176;C), ex situ machine perfusion may provide better preservation of donor livers. Continuous ...

Murine Kidney Transplant Technique

The first mouse kidney transplant technique was published in 19731 by the Russell laboratory. Although it took some years for other labs to become proficient in and utilize this technique, it is now widely used by many laboratories around the world. A significant refinement to the original technique using the donor aorta to form the arterial anastomosis instead of the renal artery was developed and reported in 1993 by Kalina and Mottram 2 with a further advancement coming from the same laboratory in 1999 3. While one can become proficient in this model, a search of the literature reveals that many labs still experience a high proportion of graft loss due to arterial thrombosis. We describe here a technique that was devised in our laboratory that vastly reduces the arterial thrombus reported by others 4,5. This is achieved by forming a heel-and-toe cuff of the donor infra-renal aorta that facilitates a larger anastomosis and straighter blood flow into the kidney.

The goal of this manuscript is to describe the steps required to perform a kidney transplant in a mouse, paying particular attention to the details of the arterial anastomosis.

Rim murino técnica de transplante

The first mouse kidney transplant technique was published in 19731 by the Russell laboratory. Although it took some years for other labs to become ...

A Small Animal Model of Ex Vivo Normothermic Liver Perfusion

There is a significant shortage of liver allografts available for transplantation, and in response the donor criteria have been expanded. As a result, normothermic ex vivo liver perfusion (NEVLP) has been introduced as a method to evaluate and modify organ function. NEVLP has many advantages in comparison to hypothermic and subnormothermic perfusion including reduced preservation injury, restoration of normal organ function under physiologic conditions, assessment of organ performance, and as a platform for organ repair, remodeling, and modification. Both murine and porcine NEVLP models have been described. We demonstrate a rat model of NEVLP and use this model to show one of its important applications &#8212; the use of a therapeutic molecule added to liver perfusate. Catalase is an endogenous reactive oxygen species (ROS) scavenger and has been demonstrated to decrease ischemia-reperfusion in the eye, brain, and lung. Pegylation has been shown to target catalase to the endothelium. Here, we added pegylated-catalase (PEG-CAT) to the base perfusate and demonstrated its ability to mitigate liver preservation injury. An advantage of our rodent NEVLP model is that it is inexpensive in comparison to larger animal models. A limitation of this study is that it does not currently include post-perfusion liver transplantation. Therefore, prediction of the function of the organ post-transplantation cannot be made with certainty. However, the rat liver transplant model is well established and certainly could be used in conjunction with this model. In conclusion, we have demonstrated an inexpensive, simple, easily replicable NEVLP model using rats. Applications of this model can include testing novel perfusates and perfusate additives, testing software designed for organ evaluation, and experiments designed to repair organs.

A Small Animal Model of Ex Vivo Normothermic Liver Perfusion

There is a significant liver donor shortage, and criteria for liver donors have been expanded. Normothermic ex vivo liver perfusion (NEVLP) has been developed to evaluate and modify organ function. This study demonstrates a rat model of NEVLP and tests the ability of pegylated-catalase, to mitigate liver preservation injury.

Um pequeno modelo Animal de perfusão de fígado normotérmica Ex Vivo

There is a significant shortage of liver allografts available for transplantation, and in response the donor criteria have been expanded. As a result, ...

Orthotopic Kidney Auto-Transplantation in a Porcine Model Using 24 Hours Organ Preservation And Continuous Telemetry

In the present era of organ transplantation with critical organ shortage, various strategies are employed to expand the pool of available allografts for kidney transplantation (KT). Even though, the use of allografts from extended criteria donors (ECD) could partially ease the shortage of organ donors, ECD organs carry a potentially higher risk for inferior outcomes and postoperative complications. Dynamic organ preservation techniques, modulation of ischemia-reperfusion and preservation injury, and allograft therapies are in the spotlight of scientific interest in an effort to improve allograft utilization and patient outcomes in KT.
Preclinical animal experiments are playing an essential role in translational research, especially in the medical device and drug development. The major advantage of the porcine orthotopic auto-transplantation model over ex vivo or small animal studies lies within the surgical-anatomical and physiological similarities to the clinical setting. This allows the investigation of new therapeutic methods and techniques and ensures a facilitated clinical translation of the findings. This protocol provides a comprehensive and problem-oriented description of the porcine orthotopic kidney auto-transplantation model, using a preservation time of 24 hours and telemetry monitoring. The combination of sophisticated surgical techniques with highly standardized and state-of-the-art methods of anesthesia, animal housing, perioperative follow up, and monitoring ensure the reproducibility and success of this model.

Large animal models play an essential role in preclinical transplantation research. Due to its similarities to the clinical setup, the porcine model of orthotopic kidney auto-transplantation described in this article provides an excellent in vivo setting for the testing of organ preservation techniques and therapeutic interventions.

Auto-transplante ortotópico de rim em um modelo suíno usando preservação de órgãos 24 horas e telemetria contínua

In the present era of organ transplantation with critical organ shortage, various strategies are employed to expand the pool of available allografts for ...

Digital Home-Monitoring of Patients after Kidney Transplantation: The MACCS Platform

The MACCS (Medical Assistant for Chronic Care Service) platform enables secure sharing of key medical information between patients after kidney transplantation and physicians. Patients provide information such as vital signs, well-being, and medication intake via smartphone apps. The information is transferred directly into a database and electronic health record at the kidney transplant center, which is used for routine patient care and research. Physicians can send an updated medication plan and laboratory data directly to the patient app via this secure platform. Other features of the app are medical messages and video consultations. Consequently, the patient is better-informed, and self-management is facilitated. In addition, the transplant center and the patient's local nephrologist automatically exchange notes, medical reports, laboratory values, and medication data via the platform. A telemedicine team reviews all incoming data on a dashboard and takes action, if necessary. Tools to identify patients at risk for complications are under development. The platform exchanges data via a standardized secure interface (Health Level 7 (HL7), Fast Healthcare Interoperability Resources (FHIR)). The standardized data exchange based on HL7 FHIR guarantees interoperability with other eHealth solutions and allows rapid scalability to other chronic diseases. The underlying data protection concept is in concordance with the latest European General Data Protection Regulation. Enrollment started in February 2020, and 131 kidney transplant recipients are actively participating as of July 2020. Two large German health insurance companies are currently funding the telemedicine services of the project. The deployment for other chronic kidney diseases and solid organ transplant recipients is planned. In conclusion, the platform is designed to enable home monitoring and automatic data exchange, empower patients, reduce hospitalizations, and improve adherence, and outcomes after kidney transplantation.

The MACCS platform&#160;is a comprehensive telemedicine concept aiming at better outcomes after kidney transplantation by sharing key medical information between patients and physicians. A telemedicine team reviews incoming data to detect potential complications and to improve adherence in kidney transplant recipients to achieve better long-term outcomes.

Monitoramento domiciliar digital de pacientes após transplante renal: a plataforma MACCS

The MACCS (Medical Assistant for Chronic Care Service) platform enables secure sharing of key medical information between patients after kidney ...

Robot-Assisted Kidney Transplantation

This paper describes robot-assisted kidney transplantation (RAKT) from a living donor. The robot is docked between the parted legs of the patient, placed in the supine Trendelenburg position. Kidney allografts are provided by a living donor. Before vascular anastomosis, the kidney allograft is prepared by inserting a double-J stent in the ureter, and the temperature for the anastomosis is lowered by wrapping it in an ice-packed gauze. A 12 mm or 8 mm port for the robotic camera and three 8 mm ports for robotic arms are placed. A peritoneal pouch is created for the kidney allograft by raising the peritoneal flaps on both sides over the psoas muscle before dissecting the iliac vessels and bladder. A 6 cm Pfannenstiel incision is made to insert the kidney into the peritoneal pouch, lateral to the right iliac vessels. 
After clamping the external iliac vein with Bulldogs clamps, a venotomy is performed, and the graft renal vein is anastomosed to the external iliac vein in an end-to-side continuous manner with a 6/0 polytetrafluoroethylene suture. After clamping the graft renal vein, the iliac vein is declamped. This is followed by clamping of the external iliac artery, arteriotomy, arterial anastomosis with a 6/0 polytetrafluoroethylene suture, clamping of the graft renal artery, and declamping of the external iliac artery. Reperfusion is then carried out, and ureteroneocystostomy is performed using the Lich-Gregoir technique. The peritoneum is closed at a few locations with polymer locking clips, and a closed-suction drain is placed through one of the working ports. After deflating the pneumoperitoneum, all incisions are closed.

This paper provides technical details for robot-assisted kidney transplantation from a living donor.

Transplante Renal Assistido por Robô

This paper describes robot-assisted kidney transplantation (RAKT) from a living donor. The robot is docked between the parted legs of the patient, placed ...