Este protocolo descreve todas as etapas-chave para estabelecer com sucesso um modelo de auto-transplante ortotópico ortotópico de rim porcino usando um tempo de preservação de órgãos de 24 horas e monitoramento telemétrico peri-operatório. A maior vantagem desse grande modelo de autoco transplante animal em relação aos estudos ex-vivos sobre modelos animais de pequeno porte são as semelhanças anatômicas cirúrgicas e fisiopatosiológicas com o cenário clínico. Nossa equipe do hospital universitário RWTH Aachen estará demonstrando os procedimentos.
Depois de confirmar o nível apropriado de sedação em uma porca adulta em jejum durante a noite, faça uma incisão de três a cinco centímetros na virilha e disseque a artéria femoral de forma de 360 graus. Use um bisturi número 11 para fazer uma arteriotomia e inserir o sensor arterial do dispositivo de telemetria. Depois de fazer uma bolsa subcutânea no flanco esquerdo, túnel o transponder de telemetria para o flanco e fixar o transponder para a fáscia muscular com uma sutura de nó único de polipropileno 3-O.
Em seguida, faça duas pequenas incisões no lado esquerdo e direito do tórax e túnel os eletrodos ECG vermelho e branco para sua localização designada. Quando os eletrodos tiverem sido protegidos, inicie o registro dos dados de telemetria. Após a aquisição de sinal estável, feche a incisão da virilha com suturas e spray de filme e coloque uma jaqueta suína de tamanho adequado sobre o animal.
14 dias após a primeira cirurgia, faça uma incisão de quatro a cinco centímetros no sulco jugular no lado direito do animal anestesiado e disseca o tecido subcutâneo e muscular para expor a veia malabarista. Use um introdutor de folhas descascadas ou o método Seldinger para inserir o cateter jugular. Fixar o cateter com uma sutura de polipropileno 5-0 e fechar a incisão em duas camadas.
Após a desinfecção cirúrgica e draping estéril, realize uma laparotomia média para abrir o abdômen e use um retrátil abdominal padrão para expor o campo cirúrgico. Abra a camada peritoneal e use um cautery monopolar, fórceps bipolares e uma tesoura fina para dissecar o rim esquerdo e o ureter de qualquer tecido aderente. Em seguida, use uma sutura de poliglactina 3-0 para ligar e dividir o ureter esquerdo pelo menos 10 centímetros distal ao hilum renal.
Para recuperar o rim do enxerto, use grampos vasculares para fechar a artéria renal e a veia próxima à aorta e vena cava. E cortar os vasos acima dos moluscos. Em seguida, dê o rim para a equipe de mesa de trás para preparação adicional e use uma sutura de polipropileno 5-0 para fechar o toco da artéria renal e da veia renal.
Imediatamente após a recuperação, use um cateter periférico padrão de 14 bitola para cannular a artéria renal e lavar o rim com pelo menos 500 mililitros de solução de preservação de órgãos gelados. Após a descarga, enrole o enxerto em sacos de órgãos estéreis para armazenamento em solução de preservação de órgãos com um tempo isquêmico frio alvo de 24 horas a quatro graus Celsius usando um circuito de resfriamento controlado por computador. Dois a cinco minutos antes da fixação vascular, injete por via intravenosa 100 unidades internacionais por quilograma de heparina de natrium e, posteriormente, remova o rim direito contralateral como demonstrado e reabra a laparotomia mediana.
Dois a cinco minutos antes da fixação vascular, injete por via intravenosa 100 unidades internacionais por quilograma de heparina de natrium e, posteriormente, remova o rim direito contralateral como demonstrado. Coloque o rim de enxerto preservado no campo cirúrgico e inicie a administração de 0,1 a 1 micrograma por quilograma por minuto de norepinefrina como infusão contínua utilizando a pressão arterial média e a frequência cardíaca para monitorar a eficiência. Para a anastomose de ponta a ponta da veia renal, use 5-0 polipropileno para colocar dois pontos de canto e suturar a parede traseira de forma contínua.
Depois de completar a parede traseira, use uma extremidade do ponto de canto craniano para suturar a parede dianteira em uma direção craniocaudal e lave a veia com uma unidade internacional de 100 por mililitro de solução salina heparinizada. Para anastomose de ponta a ponta da artéria renal, use um ponto de canto cranial de polipropileno 6-0 antes de usar a técnica de paraquedas para suturar a parede traseira de forma contínua, como demonstrado. Sutura a parede dianteira com a outra extremidade da sutura de polipropileno 6-0 armada dupla e lave a artéria com 100 unidades internacionais por mililitro de solução salina heparinizada.
Após a conclusão da anastomose, amarre os dois fios no canto caudal e abra sequencialmente os grampos vasculares e arteriais venosos para permitir a reperfusão do rim. Após a reperfusão, administrou topicamente cinco mililitros de papaverina na parede externa da artéria renal e administra por via intravenosa 250 mililitros de solução de glicose de 20% em uma única dose de 80 miligramas de Furosemida. Em seguida, passe um cateter de urina pediátrico 12 francês através da parede abdominal e da pele e use ligaduras para fixar o cateter ao ureter.
Feche a camada peritoneal sobre o rim para evitar a luxação do enxerto e a torção da anastomose vascular. E feche o abdômen em quatro camadas como demonstrado. Por fim, use o ultrassom doppler colorido para garantir a perfusão arterial e venosa adequada do enxerto renal antes de devolver o animal totalmente reclinável ao centro de habitação.
Neste conjunto representativo de cinco experimentos de autoco transplante ortotópico ortotópico de rim, os procedimentos de implantação de transponder e autoco transplante foram bem sucedidos em cada animal com sinais de telemetria suficientes registrados durante o período de observação. Após o fechamento abdominal, o ultrassom doppler colorido revelou uma perfusão arterial e venosa satisfatória do rim em todos os casos. Os valores de potássio e creatina do soro atingiram o pico nos dias pós-operatórios de três a quatro dias e apresentaram recuperação gradual posteriormente.
O pH sanguíneo permaneceu dentro da faixa normal e a saída de urina se recuperou para valores normais nos primeiros quatro dias pós-operatórios. Este protocolo pode ser usado para responder a várias perguntas sobre os efeitos de técnicas de preservação de órgãos ou terapias ex-vivo ou in vivo em um modelo animal clinicamente significativo.
