Nós gostaríamos de agradecer o apoio do Programa do Governo de Victoria Apoio Operacional Infra-estrutura, o regime de Projetos Linkage Australian Research Council (com a Agilent Technologies), o Centro Australiano de Investigação Nacional de Saúde e Pesquisa Médica do Conselho, o banco de cérebros vitoriana, Cooperativa para a Saúde Mental eo Neuroproteomics instalação.

1. Preparação de buffers e Amostras <ol><li> Preparar 500 ml de tampão, 200 mM de nitrato de amónio de pH 7,6-7,8 (pH ajustado com hidróxido de amónio (NH4OH)) com césio (Cs) e antinomy (SB) adicionado a uma concentração final de 10 ppb. Use de césio e antinomy como padrões internos para acompanhar qualquer variação na resposta de ICP-MS. tampão de filtro, antes da utilização através de um filtro de 0,22 um. </li><li> Prepare a amostra dependendo do tipo de amostra: líquido, tecido ou cultura celular. <ol><li> Para as amostras que requerem homogeneização (por exemplo, tecido ou células), assegurar que eles não contêm detergente. Use tampões Tris para preparação de amostras. Como alternativa, use tampões de fosfato, mas eles podem afetar negativamente a metalloproteome com o tempo ou com ciclos de descongelamento congelamento 12. </li><li> Homogeneizar de tecido ou cultura de células de amostras de Dounce ou manual de ultra-sons durante 5 min, utilizando solução salina tamponada com Tris (Tris 50 mM, pH 8,0, cloreto de sódio 150 mM(NaCl) + ácido etilenodiaminotetra-acético (EDTA) os inibidores da protease livre). </li><li> Esclarecer homogenatos por centrifugação a 16000 xg durante 5 min. Recolhe-se o sobrenadante resultante. Manter as amostras a 4 ° C. Nota: Todas as amostras devem ser centrifugadas antes de carregar para a cromatografia líquida de alta eficiência (HPLC) frascos para prevenir as partículas de bloqueio da coluna de cromatografia de exclusão de tamanho (SEC). </li></ol></li><li> Normalizar a quantidade total de proteína aplicada na coluna entre as amostras. Determinar as concentrações de proteína a 280 nm utilizando um espectrofotómetro de UV micro volume de 13. Carga entre 20 e 150 ug de proteína. Use típicos volumes de injecção que variam 2-80 ul, dependendo da concentração da amostra. <ol><li> Limpe o braço de amostra do espectrofotômetro volume de UV micro com água destilada antes do carregamento da amostra. O braço de amostra é o local onde as amostras de proteína são carregados. </li><li> Em branco, o instrumento contra 2 l de thtampão de amostra e. Em seguida, carga de 2 ul de cada amostra para o braço e medir a absorvância a 280 nm. </li><li> Determinar as concentrações. Para as amostras de proteína bruta, usar um coeficiente de extinção de 1 Abs = 1 mg / ml. Para determinar a concentração de proteína nas amostras, usar a lei de Beer-Lambert, A = ε xlxc, em que A é a absorvância, ε é o coeficiente de extinção, L é o comprimento do caminho em centímetros e C é a concentração. </li></ol></li></ol> 2. Análise massa de metaloproteína padrões, usando plasma indutivamente acoplado - Espectrometria de Massa <ol><li> Warm-up e ajustar o instrumento utilizando os protocolos do fabricante. </li><li> Uma vez que instrumento é aquecido e ajustado, execute a granel ICP-MS. Nota: As soluções de reserva de metaloproteínas purificados geralmente necessitam de ser diluídas antes da medição. A concentração de metal do padrão pode ser estimada a partir da proteína conhecida: stochiometries metal ea Concentra proteína estimadação. Esta informação pode ser usada para determinar a diluição que irá ser adequado para cair dentro da gama da curva padrão gerada. <ol><li> Diluir padrões metaloproteínas, tiroglobulina, ferritina, ceruloplasmina, Cu / Zn SOD e a vitamina B 12, para garantir que eles caem dentro da gama de 0-500 ug / L, utilizando 1% de ácido nítrico. Para alcançar padrões dentro deste intervalo, não use diluições superiores a 1 em 20. Realizar diluições em série em água para diluir os estoques antes deste se necessário. </li><li> Configurar a ordem das injeções. Em primeiro lugar, analisar os sete níveis de calibração, as concentrações que variam 0-500 ug / L, seguido pelas normas metaloproteínas. Os sete níveis de calibração são 0, 1, 5, 10, 50, 100 e 500 ug / L. </li><li> Selecione elementos de interesse. Aqui, use Fe, Cu, Zn, Co e eu, como eles são os elementos que os padrões de proteínas são obrigados a. Selecione os elementos do método de aquisição ao abrir o separador de seletor de elemento e adicionando o eleme<html> NTS e respectivas massas de isótopos que estão a ser analisados. </li><li> Executar a análise da amostra com o instrumento e o software do instrumento cria automaticamente as curvas de calibração para cada um dos elementos a ser analisada. As curvas de calibração são criadas pelo software traçando a contagens / seg do metal detectado contra a quantidade de metal que o padrão se destina a conter, em ug / L. Use as curvas de calibração para determinar a concentração de metais nas amostras desconhecidas. Nota: A utilização da curva de calibração, o software determina a concentração de metais em cada um dos padrões metaloproteínas. </li><li> A partir dos resultados da análise de massa, gerar padrões de metaloproteínas que incluem os três elementos vestigiais mais abundantes em tecidos de mamífero, utilizando uma mistura de Cu, Zn superóxido dismutase (SOD), diluído a 200 ug / L de cobre e de zinco e ferritina (FTN) a uma definitiva concentração de 2000 ug / L de ferro. </li></ol></li></ol>jove_title &quot;&gt; 3. Configuração do Sistema HPLC e por exclusão de tamanho cromatografia em coluna de Equilíbrio Nota: Esta secção deve ser realizada em paralelo com o anterior, uma vez que ambos necessário cerca de 1-1,5 horas a completar. <ol><li> Bombas de HPLC de purga com tampão feito no passo 1.1 e purgar as bombas para 5 min a uma velocidade de fluxo de 5 ml / min. </li><li> Uma vez que o sistema é purgado, ajustar a taxa de fluxo a 0,1 ml / min e ligar a coluna de exclusão de tamanho (4,6 x 300 mm, 3 um, 150 A). Nota: Uma conexão molhada entre a tubagem e a coluna evita quaisquer bolhas de ar ficar aprisionado durante a conexão da coluna. </li><li> Ligar a extremidade oposta da coluna para o detector de UV regulado para medir a absorvância a 280 nm, utilizando tubagem de PEEK. </li><li> Aumentar gradualmente a taxa de fluxo da coluna em incrementos de 0,05-0,1 ml / min, até uma taxa de fluxo final de 0,4 mL / min é atingido. Enquanto isso está ocorrendo, verifique as conexões de tubos para a coluna se há algum vazamento. Monitorar a pressãodo sistema para garantir que ele não excede os requisitos de coluna, observando o traçado da pressão no cromatograma no software. </li><li> Deixar a coluna para equilibrar a taxa de fluxo necessária ao longo de 5 - 10 volumes de coluna. Depois que é equilibrada, ligar os instrumentos para permitir a análise da amostra para ocorrer. </li><li> Defina-se o método de HPLC para bombear tampão A através da coluna a 0,4 mL / min durante 15 min. </li></ol> 4. Configurando e executando Tamanho Exclusão - plasma indutivamente acoplado - Espectrometria de Massa Nota: os procedimentos operacionais podem variar entre os instrumentos e modelos. Fale com o especialista técnico instrumento para saber mais sobre como configurar o ICP-MS a ser utilizado. <ol><li> Coloque o ICP - MS em modo de espera antes de alterar a configuração de hardware. <ol><li> Uma vez no modo de espera, desligue a comunicação para o amostrador automático e alterar a introdução de exemplo para &quot;outro&quot;. Nota: Dependendo do software e difícilWare configuração de selecção &quot;HPLC&quot;, tal como uma fonte de introdução de amostras pode ser utilizado. Fale com o especialista técnico instrumento para saber se essa opção está disponível. </li></ol></li><li> Use tubagem de PEEK (ID 0.13 mm) para ligar o escoamento para fora a partir do detector de UV directamente para o nebulizador no ICP-MS. </li><li> Poder fazer backup do ICP - MS e permitir que o instrumento aquecer durante 10 - 20 min. </li><li> Após o plasma se inflamar, conectar o cabo afastado do ICP - MS para a parte de trás do amostrador automático de HPLC. Faça isso uma vez que o plasma tem inflamado; caso contrário, o sistema de HPLC irá desligar automaticamente uma vez que o ICP - MS não está ligado. </li><li> Alterar o método de ICP-MS para coletar dados para LC-ICP-MS. <ol><li> Alterar o método de aquisição de espectro a aquisição em tempo resolve (TRA). </li><li> Selecionar os elementos a serem analisados, Fe, Cu, Zn, Co, I, bem como quaisquer outros elementos de interesse, e tempos de integração (tipicamente entre 0,05-0,3 seg). Depois de os elementos de interesse umre escolhida, ajustar o tempo de aquisição para coincidir com o tempo de execução para a cromatografia (por exemplo, 900 segundos para um 15 min cromatografia run). </li><li> Sintonizar manualmente o ICP - MS para hélio celular sensibilidade e colisão (Ele) caudais de gás com o buffer de cromatografia de fluxo usando Cs e Sb incluídos no buffer. As taxas de fluxo de He ~ são tipicamente de 1 ml / min menos do que as utilizadas para a análise de grandes quantidades. Uma vez que as contagens de iões metálicos se estabilizaram e desvio padrão relativo (RSD) valores são inferiores a 5%, o sistema está pronto para uso. </li></ol></li><li> Faça amostra listas são executados em ambos os programas de software ICP-MS HPLC e. A lista de exemplos de execução contém a ordem em que cada uma das amostras deve ser injectada, bem como o nome pelo qual os dados serão guardados. Verifique se o número total de amostras no jogo lista entre os dois programas. </li><li> Inicie o lote de amostra para o ICP-MS antes da HPLC, tal como a injecção da amostra por HPLC irá desencadear a ICP - MS para iniciar a recolhadados. Se isso não for feito na ordem correta que irá resultar em dados perdidos. </li><li> Gerar pontos da curva de calibração através da injecção de diferentes volumes da SOD e RNT padrão misturado a partir de 200? G / L para 6,000 g / L injectados na coluna para o Cu e Zn e 2000 ug / L até 60.000 g / L para o Fe. Os volumes de injecção variam entre 1 e 30 ul. Nota: Estes intervalos de concentração abranger as concentrações de Fe, Cu e Zn, tipicamente observadas em homogenatos de complexos. Para as amostras que contêm apenas proteínas purificadas a faixa máxima da curva deve ser ajustado em conformidade. À medida que a quantidade de metal associada com a proteína pode necessitar de uma gama maior ou mais pequena, uma vez que há menos contaminação na amostra a partir de outros factores. </li><li> Analisar cada uma das culturas de tecidos amostras desconhecidas, plasma ou células. </li></ol> 5. Análise de Dados, manipulação e visualização <ol><li> Armazenar os dados no valor separados por vírgulas (CSV) formato de arquivo e carregá-into programas de processamento, conforme necessário. </li><li> A fim de controlar para o instrumento deriva, dividir as contagens por segundo para cada elemento pelas contagens por segundo para qualquer Cs ou Sb. </li><li> Gerar curvas de calibração para cada um dos elementos. <ol><li> Determinar a área sob o pico de metal que corresponde à metaloproteína que ele é obrigado a para cada uma das injecções através da realização de integração de picos no software de análise de dados preferida. </li><li> Traça-se a área sob o pico do metal contra a quantidade total do metal que foi injectada na coluna em cada série, de 200 - 6000 ug / L de Cu e Zn e 2000 - 60000 g / L de Fe. Realizar a análise de regressão linear de acordo com o protocolo de software. </li><li> Usar os resultados de inclinação a partir da análise de regressão linear, tal como um factor para converter contagens por segundo para pg / seg. Dividir cada uma das contagens por segundo pontos de dados em todo o cromatograma por o gradiente de um valor de linha. </li></ol></li><li> Representar graficamente os dados empg / seg contra o tempo cromatograma. Determinar a área sob os picos de interesse. A área sob o pico representa a quantidade total de metal que a proteína é ligada a, na pág. </li><li> Gerar uma calibração com base no peso molecular das metaloproteínas conhecidos e o momento em que eles eluem. Use isto para estimar o tamanho dos picos de proteína em amostras complexas. </li></ol>

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E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+Plasma+Copper+Proteins+Speciation+by+Size+Exclusion+Chromatography+Coupled+to+Inductively+Coupled+Plasma+Mass+Spectrometry.+Solutions+for+Columns+Calibration+by+Sulfur+Detection.">Human Plasma Copper Proteins Speciation by Size Exclusion Chromatography Coupled to Inductively Coupled Plasma Mass Spectrometry. Solutions for Columns Calibration by Sulfur Detection.</a> Anal Chem. 82, 6904-6910 (2010).</li><li>Desjardins, P., Hansen, J. B., Allen, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microvolume+Protein+Concentration+Determination+using+the+NanoDrop+2000c+Spectrophotometer.">Microvolume Protein Concentration Determination using the NanoDrop 2000c Spectrophotometer.</a> J Vis Exp. , e1610 (2009).</li></ol>

The authors have nothing to disclose

Garantir o estado nativo da proteína significa atenção especial aos padrões usados ​​e armazenamento da amostra são necessários. Nem todas as técnicas de cromatograf ia ou técnicas de preparação da amostra podem ser empregues. É importante que os tampões utilizados durante toda a preparação da amostra e são desprovidos de cromatografia de quelantes metálicos e utilização tampões que imitam o pH e concentração de sal fisiológico. Outras condições a evitar incluem aquecimento da amostra ou adição de desnaturantes de proteínas (por exemplo, ureia). É crítico para minimizar o número de ciclos de descongelamento congelamento. A capacidade do tampão escolhido para se ligar metais divalentes é também importante e é um motivo que Tris ou tampões de amónio nitrato são escolhidos entre tampões à base de fosfato. A resolução e baixa capacidade de pico da cromatograf ia de exclusão por tamanho em relação a outras formas de cromatograf ia é uma grande limitação desta técnica. No entanto, a natureza gentil de exclusão de tamanho chromatograPHY é importante para manter o estado nativo da proteína e, assim, conservar as ligações de metal-proteína relativamente fracas. O requisito para manter o estado nativo de proteínas exige uma especial atenção para o tratamento das amostras, incluindo a limitação do número de ciclos de descongelamento congelamento, evitando quelantes de metais (por exemplo, EDTA) ou os seus sais caotrópicos e detergentes. Esta baixa resolução desta técnica impactos a capacidade de quantificar a quantidade de metal associada a uma proteína específica se for numa amostra complexa como os picos observados irá conter mais do que uma proteína. Portanto, a quantidade de metal determinada usando o pico de integração seria uma indicação da quantidade total de metal associado com todas as proteínas eluindo neste ponto de tempo e não apenas uma proteína específica. A fim de superar esta limitação a proteína de interesse teria que ser ainda purificado sob condições nativas. Isto permitiria a quantificação deo metal associados com esta proteína a ser comunicados com um grau mais elevado de certezas. Outra limitação potencial desta técnica seria a perda de proteína devido a ligação não reversíveis para a coluna. A fim de determinar se isto está a acontecer uma experiência de recuperação deve ser levada a cabo por meio de que a quantidade de proteína eluindo da coluna é analisado para determinar se esta corresponde à quantidade injectada. O mesmo pode ser feito por medição do teor de metal do material de eluição e do material de partida por grandes quantidades de ICP-MS. Coluna de recuperação pode diferir dependendo das condições usadas, mas demonstrou-se que a recuperação completa de proteínas a partir de uma coluna de exclusão por tamanho é possível 9. Assim, é importante verificar se há ou não qualquer perda nas condições de operação que está sendo usado. As modificações introduzidas no protocolo pode ser relacionada com as normas metaloproteínas que são utilizados, bem como os elementos analisados. O tipo de padrão metaloproteína nósed irá variar de acordo com os elementos que são de interesse. Para elementos, tais como Cu, Fe e Zn proteínas, SOD e ferritina são empregados. Qualquer outro metaloproteína que têm stoichometries conhecidos também pode ser utilizado e alguns exemplos foram mostrados aqui. Uma das principais complicações que podem surgir de usar esta técnica é a acumulação de cristais de sal na tocha do ICP-MS. Para evitar a acumulação de cristais de sal, o maçarico é lavada com água destilada a cada 500 - 1000 ml de tampão que foi passado através do sistema, ou quando é determinado por inspecção visual que a tocha seja lavada. Outro problema que pode surgir é um declínio mais rápido na limpeza das amostras e extração cones. Estes precisam ser limpos regularmente seguindo os protocolos do fabricante. A preparação da amostra inicial é a etapa mais crítica no protocolo. Se houver qualquer alteração na proteína - complexo de metal do informação gerado não será válida. Esta é uma das principais limitações da técnica; Além disso, o uso de baixa resolução, coluna de exclusão de tamanho produz uma vista detalhada limitada da verdadeira complexidade de metaloproteínas em biologia. A técnica aqui descrita permite a expansão do conhecimento do metalloproteome de um organismo. análise de massa só dá uma indicação bruta de mudanças para a quantidade de metal dentro de uma amostra. Além das considerações gerais que precisam de ser tomadas em consideração, esta técnica fornece uma ferramenta que pode ser usada para quantificar a quantidade de metal associados a proteínas, bem como para identificar metaloproteínas que diferem pela comparação dos traços obtidos. A utilização desta técnica pode ser empregue para identificar diferenças entre os estados de doença. As metaloproteínas identificados, em seguida, pode ser investigado para ajudar a determinar o papel que desempenham nos processos de doença. A aplicação de hífen ICP-MS tem um crescimentofuturo para determinar o papel dos fármacos que possuem um heteroátomo, tal como a platina, o iodo ou o cobre como o ICP-MS pode ser utilizada para identificar as proteínas que se ligam a droga.

metais essenciais desempenham um papel fundamental em funções biológicas normais, incluindo as vias de segundo mensageiro, vias do metabolismo e das funções de organelos. 30% de todas as proteínas são pensados ​​para ser metaloproteínas 1 e 50% de todas as enzimas 2. Metaloenzimas usar esses traços de metais como cofatores para catalisar reações químicas, estabilizar a estrutura da proteína, e para as funções reguladoras, como mensageiros secundários. Alguns dos oligoelementos mais estudadas no que diz respeito a neurodegeneração são de cobre, ferro e zinco 3. Eles são pensados ​​para ser envolvida em muitas vias de doença onde por dyshomeostasis pode ter efeitos adversos. Por exemplo, o estado de metal de superóxido dismutase (SOD) directamente impactos o tempo de vida e do fenótipo dos modelos de ratinhos transgénicos de tipo familiar de esclerose lateral amiotrófica (ALS) 4. Na doença de Alzheimer, metalloproteomics técnicas têm sido utilizadas para descobrir uma diminuição no estado de metal de transferrina em pLasma 5. Estes estudos destacam os importantes metaloproteínas papel pode desempenhar na doença. O estudo de metaloproteínas directamente a partir de tecidos biológicos é um campo em desenvolvimento. Embora alguns metaloenzimas foram identificados, a maioria ainda permanecem descaracterizados ou desconhecida 6. Um dos grandes desafios na metaloproteínas de medição é o requisito para manter o estado nativo da proteína 7. Classical bottom-up técnicas proteômicas contar com a digestão das proteínas em peptídeos. Este processo interrompe a interacção não-covalente de metais e suas proteínas. Assim, nenhuma informação sobre o estado de metal de uma proteína é obtida. Uma maneira de superar esse problema é usando cromatografia de exclusão de tamanho emparelhado com plasma indutivamente acoplado - 8,9 espectrometria de massa (SEC-ICP-MS). Isto gera informação sobre o tamanho aproximado da proteína, assim como quaisquer metais que são Associated com ele 10. Além disso, de exclusão por tamanho é uma técnica cromatográfica suave que pode preservar o estado nativo de um complexo enzimático ou proteína-proteína. Uma vantagem do uso de plasma acoplado indutivamente - espectrometria de massa (ICP-MS) é a natureza quantitativa da tecnologia. Utilizando um conjunto de padrões de metaloproteínas é possível fornecer de metaloproteínas quantificação absoluta de amostras biológicas 9,11. Isto é conseguido através da geração de uma curva padrão através da injecção de metaloproteínas conhecidos ao longo de um intervalo de concentrações de metal. Este protocolo mostra um exemplo de como isto pode ser conseguido por uma variedade de padrões de metaloproteínas. Neste trabalho pretendemos criar curvas padrão para metais que são amplamente investigadas em áreas biológicas, incluindo ferro (Fe), cobre (Cu), zinco (Zn), iodo (I), e cobalto (Co).

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Agilent 1290 Infinity Binary Pump</td>
			<td>Agilent</td>
			<td>G4220A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agilent 1290 Infinity Autosampler</td>
			<td>Agilent</td>
			<td>G4226A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agilent 1200 Series Autosampler Thermostat</td>
			<td>Agilent</td>
			<td>G1330B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agilent 1290 Infinity Thermostatted Column Compartment</td>
			<td>Agilent</td>
			<td>G1316C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agilent 1290 Infinity Variable Wavelength Detector</td>
			<td>Agilent</td>
			<td>G1314E</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agilent 7700 ICP-MS</td>
			<td>Agilent</td>
			<td>G3282A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#160;Ammonium hydroxide trace metal basis&#160;&#160;&#160;</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>338818</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#160;Ammonium nitrate&#160;</td>
			<td>Sigma&#160;</td>
			<td>256064</td>
			<td>Make fresh 200mM solution on day of experiment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#160;Antinomy&#160;</td>
			<td>Choice analytical&#160;</td>
			<td>10002-3&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#160;Ceruloplasmin&#160;</td>
			<td>Sigma</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#160;Cesium&#160;</td>
			<td>Choice analytical&#160;</td>
			<td>100011-1&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#160;Complete, EDTA free protease inhibitors&#160;&#160;</td>
			<td>Roche</td>
			<td>11873580001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#160;Conalbumin&#160;</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>C7786</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#160;Concanavalin A from Canavalia ensiformis (Jack bean)&#160;</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>L7647</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#160;Cu, Zn Superoxide dismutase&#160;</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S9697</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#160;Ferritin&#160;</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>F4503</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#160;ICP-MS multielemental calibration standards&#160;</td>
			<td>AccuStandard</td>
			<td></td>
			<td>Made up to required concentrations in 1% nitric acid</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#160;Microvolume UV spectrophotometer&#160;</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#160;65% Nitric acid&#160;</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>100441</td>
			<td>Diluted to 1% for use</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#160;Peek tubing&#160;&#160;</td>
			<td>Agilent</td>
			<td>5042-6461</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#160;Size exclusion column BioSEC-3 PLC. column, 4.6x300mm, 3&#956;m, 150&#197;&#160;</td>
			<td>Agilent</td>
			<td>5190-2508</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#160;Sodium Chloride&#160;</td>
			<td>Chem Supply</td>
			<td>SA046</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#160;Tris Hydrochloride&#160;</td>
			<td>ICN Biomedicals inc.&#160;</td>
			<td>103130</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#160;Thyroglobulin&#160;</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>T9145</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#160;Vitamin B12&#160;</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>V2876</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

standards for quantitative metalloproteomic analysis using size exclusion icp-ms

Metals are essential for protein function as cofactors to catalyze chemical reactions. Disruption of metal homeostasis is implicated in a number of diseases including Alzheimer's and Parkinson's disease, but the exact role these metals play is yet to be fully elucidated. Identification of metalloproteins encounters many challenges and difficulties. Here we report an approach that allows metalloproteins in complex samples to be quantified. This is achieved using size exclusion chromatography coupled with inductively coupled plasma - mass spectrometry (SEC-ICP-MS). Using six known metalloproteins, the size exclusion column can be calibrated and the respective trace elements (iron, copper, zinc, cobalt, iodine) can be used for quantification. SEC-ICP-MS traces of human brain and plasma are presented. The use of these metalloprotein standards provides the means to quantitatively compare metalloprotein abundances between biological samples. This technique is poised to help shed light on the role of metalloproteins in neurodegenerative disease as well as other diseases where imbalances in trace elements are implicated.

O uso de padrões de metaloproteínas permite a calibração da coluna de exclusão de tamanho. A Figura 1A mostra o perfil de eluição para os padrões tiroglobulina, ferritina, ceruloplasmina, Cu / Zn SOD e a vitamina B 12, com base no metal que está ligado a (Fe, co, Cu, Zn e I). a Figura 1B mostra a curva de calibração para a coluna de exclusão por tamanhos com base no peso molecular de padrões de proteína e o seu tempo de eluição, apresentada sob a forma de volume de eluição (Ve), dividido pelo volume vazio do coluna (Vo). As proteínas utilizadas para gerar esta curva padrão são concanavalina A, conalbumina, ceruloplasmina, a ferritina, a SOD e a tireoglobulina. A Figura 2A mostra a eluição da ferritina ao longo de um intervalo de 2.000 - 60.000 pg de Fe injectado na coluna e a figura 2D representa a análise de regressão efectuada utilizando párea de EAK. As Figuras 2B e 2C são os perfis de eluição de Cu / Zn SOD para o Cu e Zn e 2E e 2F são as análises de regressão gerado usando as áreas dos picos. Os resultados da análise de regressão são utilizadas para converter os dados em bruto em contagens / seg para pg / seg de modo que a quantidade de metal associada com a proteína pode ser determinada quantitativamente. A conversão é feito dividindo as contagens / seg por o declive da regressão linear (por exemplo, 334,6 (contagens / s) x (seg / pg) de cobre). Como foi dito, esta técnica pode ser usada para identificar metaloproteínas em amostras biológicas complexas. O cérebro humano e de plasma foram submetidas a esta técnica e as Figuras 3 e 4, respectivamente, mostram os resultados obtidos. O cérebro humano separados por SEC-ICP-MS é mostrado nas Figuras 3A-3C, cada um dos quais representa um metal diferente do<html> interesse (Cu, Zn ou Fe). Figuras 4A-4C mostram os traços obtidos quando o plasma humano é submetido a esta técnica. A complexidade e abundância da amostra terá impacto sobre o número de picos que são vistos. Como plasma esperado é dominado por algumas metaloproteínas incluindo ceruloplasmina e transferrina. <img alt="figura 1" src="/files/ftp_upload/53737/53737fig1.jpg" /> Figura 1. A calibração de cromatografia de exclusão de tamanho - Plasma Indutivamente Acoplado - Espectrometria de Massa Usando conhecido perfil Metaloproteínas (A) A eluição para os padrões de metaloproteínas em função dos respectivos metais.. (B) curva de calibração de peso molecular para proteínas padrão tiroglobulina (I), ferritina (II), ceruloplasmina (III), conalbumina (IV), Cu / Zn SOD (v) e concanavalina A (VI).&quot;Target =&quot; _ blank &quot;&gt; Clique aqui para ver uma versão maior desta figura. <img alt="Figura 2" src="/files/ftp_upload/53737/53737fig2.jpg" /> Figura 2. Uso de ferritina e Cu / Zn SOD como metaloproteína Normas para determinar a quantidade de Cu, Fe ou Zn Associated com Metaloproteínas em uma amostra biológica Complex (A) perfil de eluição para ferritina em toda a gama de injeção de 2.000 -. 60.000 mg / L de ferro. (B) e (C) para o perfil de eluição de Cu / Zn SOD através da injecção gama de 200 - 6000 ug / L de cobre e zinco, respectivamente. (D), (E) e (F) mostram os resultados da análise de regressão de metais de ferro, cobre e zinco, respectivamente. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/53737/53737fig2large.jpg" target="_blank">Por favor clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a> Figura 3. Cu, Fe e Zn Metalloproteome de Cérebro humano. (A) traço de cobre (B) traço de ferro (C) Zinc vestígios. Eluição dos padrões de proteína para cada metal é mostrado pelo traço preto com seu peso molecular indicado no gráfico. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/53737/53737fig3large.jpg" target="_blank">Por favor clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a> <img alt="Figura 4" src="/files/ftp_upload/53737/53737fig4.jpg" /> Figura 4. Cu, Fe e Zn Metalloproteome para o plasma humano. (A) traço de cobre (B) traço de ferro (C) Zinc vestígios. A eluição dos padrões de proteína para cada metal é mostrado pelo traço negro com o seu peso molecular emdicated sob o gráfico. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/53737/53737fig4large.jpg" target="_blank">Por favor clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>

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Standards for Quantitative Metalloproteomic Analysis Using Size Exclusion ICP-MS

Size exclusion chromatography hyphenated with inductively coupled plasma - mass spectrometry (ICP-MS) is a powerful tool to measure changes in the abundance of metalloproteins directly from biological samples. Here we describe a set of metalloprotein standards used to estimate molecular mass and the amount of metal associated with unknown proteins.

Normas para Análise Quantitativa Metalloproteomic Usando Tamanho Exclusão ICP-MS

Metals are essential for protein function as cofactors to catalyze chemical reactions. Disruption of metal homeostasis is implicated in a number of ...

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15.0K visualizações.  The Florey Institute of Neuroscience and Mental Health. Size exclusion chromatography hyphenated with inductively coupled plasma - mass spectrometry (ICP-MS) is a powerful tool to measure changes in the abundance of metalloproteins directly from biological samples. Here we describe a set of metalloprotein standards used to estimate molecular mass and the amount of metal associated with unknown proteins. 

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Quantitative Proteomics Using Reductive Dimethylation for Stable Isotope Labeling

Stable isotope labeling of peptides by reductive dimethylation (ReDi labeling) is a method to accurately quantify protein expression differences between samples using mass spectrometry. ReDi labeling is performed using either regular (light) or deuterated (heavy) forms of formaldehyde and sodium cyanoborohydride to add two methyl groups to each free amine. Here we demonstrate a robust protocol for ReDi labeling and quantitative comparison of complex protein mixtures. Protein samples for comparison are digested into peptides, labeled to carry either light or heavy methyl tags, mixed, and co-analyzed by LC-MS/MS. Relative protein abundances are quantified by comparing the ion chromatogram peak areas of heavy and light labeled versions of the constituent peptide extracted from the full MS spectra. The method described here includes sample preparation by reversed-phase solid phase extraction, on-column ReDi labeling of peptides, peptide fractionation by basic pH reversed-phase (BPRP) chromatography, and StageTip peptide purification. We discuss advantages and limitations of ReDi labeling with respect to other methods for stable isotope incorporation. We highlight novel applications using ReDi labeling as a fast, inexpensive, and accurate method to compare protein abundances in nearly any type of sample.

Stable isotope labeling of peptides by reductive dimethylation (ReDi labeling) is a rapid, inexpensive strategy for accurate mass spectrometry-based quantitative proteomics. Here we demonstrate a robust method for preparation and analysis of protein mixtures using the ReDi approach that can be applied to nearly any sample type.

Proteômica quantitativa utilizando redutora dimetilação para Stable Isotope Labeling

Stable isotope labeling of peptides by reductive dimethylation (ReDi labeling) is a method to accurately quantify protein expression differences between ...

Química

Quantitative and Qualitative Examination of Particle-particle Interactions Using Colloidal Probe Nanoscopy

Colloidal Probe Nanoscopy (CPN), the study of the nano-scale interactive forces between a specifically prepared colloidal probe and any chosen substrate using the Atomic Force Microscope (AFM), can provide key insights into physical interactions present within colloidal systems. Colloidal systems are widely existent in several applications including, pharmaceuticals, foods, paints, paper, soil and minerals, detergents, printing and much more.1-3 Furthermore, colloids can exist in many states such as emulsions, foams and suspensions. Using colloidal probe nanoscopy one can obtain key information on the adhesive properties, binding energies and even gain insight into the physical stability and coagulation kinetics of the colloids present within. Additionally, colloidal probe nanoscopy can be used with biological cells to aid in drug discovery and formulation development. In this paper we describe a method for conducting colloidal probe nanoscopy, discuss key factors that are important to consider during the measurement, and show that both quantitative and qualitative data that can be obtained from such measurements.

Colloidal probe nanoscopy can be used within a variety of fields to gain insight into the physical stability and coagulation kinetics of colloidal systems and aid in drug discovery and formulation sciences using biological systems. The method described within provides a quantitative and qualitative means to study such systems.

O exame quantitativo e qualitativo dos Interações partícula-partícula coloidal Usando Probe Nanoscopia

Colloidal Probe Nanoscopy (CPN), the study of the nano-scale interactive forces between a specifically prepared colloidal probe and any chosen substrate ...

Au-Interaction of Slp1 Polymers and Monolayer from Lysinibacillus sphaericus JG-B53 - QCM-D, ICP-MS and AFM as Tools for Biomolecule-metal Studies

In this publication the gold sorption behavior of surface layer (S-layer) proteins (Slp1) of Lysinibacillus sphaericus JG-B53 is described. These biomolecules arrange in paracrystalline two-dimensional arrays on surfaces, bind metals, and are thus interesting for several biotechnical applications, such as biosorptive materials for the removal or recovery of different elements from the environment and industrial processes. The deposition of Au(0) nanoparticles on S-layers, either by S-layer directed synthesis 1 or adsorption of nanoparticles, opens new possibilities for diverse sensory applications. Although numerous studies have described the biosorptive properties of S-layers 2-5, a deeper understanding of protein-protein and protein-metal interaction still remains challenging. In the following study, inductively coupled mass spectrometry (ICP-MS) was used for the detection of metal sorption by suspended S-layers. This was correlated to measurements of quartz crystal microbalance with dissipation monitoring (QCM-D), which allows the online detection of proteinaceous monolayer formation and metal deposition, and thus, a more detailed understanding on metal binding.
The ICP-MS results indicated that the binding of Au(III) to the suspended S-layer polymers is pH dependent. The maximum binding of Au(III) was obtained at pH 4.0. The QCM-D investigations enabled the detection of Au(III) sorption as well as the deposition of Au(0)-NPs in real-time during the in situ experiments. Further, this method allowed studying the influence of metal binding on the protein lattice stability of Slp1. Structural properties and protein layer stability could be visualized directly after QCM-D experiment using atomic force microscopy (AFM). In conclusion, the combination of these different methods provides a deeper understanding of metal binding by bacterial S-layer proteins in suspension or as monolayers on either bacterial cells or recrystallized surfaces.

Au-Interaction of Slp1 Polymers and Monolayer from Lysinibacillus sphaericus JG-B53 - QCM-D, ICP-MS and AFM as Tools for Biomolecule-metal Studies

To obtain basic information on the sorption and recycling of gold from aqueous systems the interaction of Au(III) and Au(0) nanoparticles on S-layer proteins were investigated. The sorption of protein polymers was investigated by ICP-MS and that of proteinaceous monolayers by QCM-D. Subsequent AFM enables the imaging of the nanostructures.

Au-Interação de Slp1 Polímeros e monocamada de<em&gt; Lysinibacillus sphaericus</em&gt; JG-B53 - QCM-D, o ICP-MS e AFM como Ferramentas para Estudos biomolécula metal-

In this publication the gold sorption behavior of surface layer (S-layer) proteins (Slp1) of Lysinibacillus sphaericus JG-B53 is described. These ...

Using Capillary Electrophoresis to Quantify Organic Acids from Plant Tissue: A Test Case Examining Coffea arabica Seeds

Carboxylic acids are organic acids containing one or more terminal carboxyl (COOH) functional groups. Short chain carboxylic acids (SCCAs; carboxylic acids containing three to six carbons), such as malate and citrate, are critical to the proper functioning of many biological systems, where they function in cellular respiration and can serve as indicators of cell health. In foods, organic acid content can have significant impact on taste, with increased SCCA levels resulting in a sour or &#34;acid&#34; taste. Because of this, methods for the rapid analysis of organic acid levels are of particular interest to the food and beverage industries. Unfortunately, however, most methods used for SCCA quantification are dependent on time-consuming protocols requiring the derivatization of samples with hazardous reagents, followed by costly chromatographic and/or mass spectrometric analyses. This method details an alternate method for the detection and quantification of organic acids from plant material and food samples using free zonal capillary electrophoresis (CZE), sometimes simply referred to as capillary electrophoresis (CE). CZE provides a cost-effective method for measuring SCCAs with a low limit of detection (0.005 mg/ml). This article details the extraction and quantification of SCCAs from plant samples. While the method provided focuses on measurement of SCCAs from coffee beans, the method provided can be applied to multiple plant-based food materials.

Using Capillary Electrophoresis to Quantify Organic Acids from Plant Tissue: A Test Case Examining Coffea arabica Seeds

This article presents a method for the detection and quantification of organic acids from plant material using free zonal capillary electrophoresis. An example of the potential application of this method, determining the effects of a secondary fermentation on organic acid levels in coffee seeds, is provided.

Usando Eletroforese Capilar para quantificar ácidos orgânicos a partir de tecido da planta: um caso de teste de exame<em&gt; Coffea arabica</em&gt; Sementes

Carboxylic acids are organic acids containing one or more terminal carboxyl (COOH) functional groups. Short chain carboxylic acids (SCCAs; carboxylic ...

Measurement of Particle Size Distribution in Turbid Solutions by Dynamic Light Scattering Microscopy

A protocol for measuring polydispersity of concentrated polymer solutions using dynamic light scattering is described. Dynamic light scattering is a technique used to measure the size distribution of polymer solutions or colloidal particles. Although this technique is widely used for the assessment of polymer solutions, it is difficult to measure the particle size in concentrated solutions due to the multiple scattering effect or strong light absorption. Therefore, the concentrated solutions should be diluted before measurement. Implementation of the confocal optical component in a dynamic light scattering microscope1 helps to overcome this barrier. Using such a microscopic system, both transparent and turbid systems can be analyzed under the same experimental setup without a dilution. As a representative example, a size distribution measurement of a temperature-responsive polymer solution was performed. The sizes of the polymer chains in an aqueous solution were several tens of nanometers at a temperature below the lower critical solution temperature (LCST). In contrast, the sizes increased to more than 1.0 &#181;m when above the LCST. This result is consistent with the observation that the solution turned turbid above the LCST.

A protocol for the direct measurement of particle size distribution in concentrated solutions using dynamic light scattering microscopy is presented.

Medição do Tamanho de Partículas Distribuição em turvas Solutions pela Dynamic dispersão de luz Microscopia

A protocol for measuring polydispersity of concentrated polymer solutions using dynamic light scattering is described. Dynamic light scattering is a ...

Fabrication and Testing of Photonic Thermometers

In recent years, a push for developing novel silicon photonic devices for telecommunications has generated a vast knowledge base that is now being leveraged for developing sophisticated photonic sensors. Silicon photonic sensors seek to exploit the strong confinement of light in nano-waveguides to transduce changes in physical state to changes in resonance frequency. In the case of thermometry, the thermo-optic coefficient, i.e., changes in refractive index due to temperature, causes the resonant frequency of the photonic device such as a Bragg grating to drift with temperature. We are developing a suite of photonic devices that leverage recent advances in telecom compatible light sources to fabricate cost-effective photonic temperature sensors, which can be deployed in a wide variety of settings ranging from controlled laboratory conditions, to the noisy environment of a factory floor or a residence. In this manuscript, we detail our protocol for the fabrication and testing of photonic thermometers.

We describe the process of fabrication and testing of photonic thermometers.

Fabricação e teste dos termómetros fotônicos

In recent years, a push for developing novel silicon photonic devices for telecommunications has generated a vast knowledge base that is now being ...

Nanosponge Tunability in Size and Crosslinking Density

We describe a protocol for the synthesis of linear polyesters containing pendant epoxide functionality and their incorporation into a nanosponge with controlled dimensions. This approach begins with synthesis of a functionalized lactone which is key to the pendant functionalization of the resulting polymer. Valerolactone (VL) and allyl-valerolactone (AVL) are then copolymerized using ring-opening polymerization. Post-polymerization modification is then used to install an epoxide moiety on some or all of the pendant allyl groups. Epoxy-amine chemistry is employed to form nanoparticles in a dilute solution of both polymer and small molecule diamine crosslinker based on the desired nanosponge size and crosslinking density. Nanosponge sizes can be characterized by transmission electron microscopy (TEM) imaging to determine the dimension and distribution. This method provides a pathway by which highly tunable polyesters can create tunable nanoparticles, which can be used for small molecule drug encapsulation. Due to the nature of the backbone, these particles are hydrolytically and enzymatically degradable for a controlled release of a wide range of hydrophobic small molecules.

This article describes a process for tuning the size and crosslinking density of covalently crosslinked nanoparticles from linear polyesters containing pendant functionality. By tailoring synthesis parameters (polymer molecular weight, pendant functionality incorporation, and crosslinker equivalents), a desired nanoparticle size and crosslinking density can be achieved for drug delivery applications.

Ajustabilidade de Nanoesponjas em Tamanho e Densidade Reticular

We describe a protocol for the synthesis of linear polyesters containing pendant epoxide functionality and their incorporation into a nanosponge with ...

Disentangling High Strength Copolymer Aramid Fibers to Enable the Determination of Their Mechanical Properties

Traditionally, soft body armor has been made from poly(p-phenylene terephthalamide) (PPTA) and ultra-high molecular weight polyethylene. However, to diversify the fiber choices in the United States body armor market, copolymer fibers based on the combination of 5-amino-2-(p-aminophenyl) benzimidazole (PBIA) and the more conventional PPTA were introduced. Little is known regarding the long-term stability of these fibers, but as condensation polymers, they are expected to have potential sensitivity to moisture and humidity. Therefore, characterizing the strength of the materials and understanding their vulnerability to environmental conditions is important for evaluating their use lifetime in safety applications. Ballistic resistance and other critical structural properties of these fibers are predicated on their strength. To accurately determine the strength of the individual fibers, it is necessary to disentangle them from the yarn without introducing any damage. Three aramid-based copolymer fibers were selected for the study. The fibers were washed with acetone followed by methanol to remove an organic coating that held the individual fibers in each yarn bundle together. This coating makes it difficult to separate single fibers from the yarn bundle for mechanical testing without damaging the fibers and affecting their strength. After washing, fourier transform infrared (FTIR) spectroscopy was performed on both washed and unwashed samples and the results were compared. This experiment has shown that there are no significant variations in the spectra of poly(p-phenylene-benzimidazole-terephthalamide-co-p-phenylene terephthalamide) (PBIA-co-PPTA1) and PBIA-co-PPTA3 after washing, and only a small variation in intensity for PBIA. This indicates that the acetone and methanol rinses are not adversely affecting the fibers and causing chemical degradation. Additionally, single fiber tensile testing was performed on the washed fibers to characterize their initial tensile strength and strain to failure, and compare those to other reported values. Iterative procedural development was necessary to find a successful method for performing tensile testing on these fibers.

The primary goal of the study is to develop a protocol to prepare consistent specimens for accurate mechanical testing of high strength copolymer aramid fibers, by removing a coating and disentangling the individual fiber strands without introducing significant chemical or physical degradation.

Desembaraçar as fibras de aramida de copolímero de alta resistência para permitir a determinação de suas propriedades mecânicas

Traditionally, soft body armor has been made from poly(p-phenylene terephthalamide) (PPTA) and ultra-high molecular weight polyethylene. However, to ...

Application of Voltage in Dynamic Light Scattering Particle Size Analysis

Dynamic light scattering (DLS) is a common method for characterizing the size distribution of polymers, proteins, and other nano- and microparticles. Modern instrumentation permits measurement of particle size as a function of time and/or temperature, but currently there is no simple method for performing DLS particle size distribution measurements in the presence of applied voltage. The ability to perform such measurements would be useful in the development of electroactive, stimuli-responsive polymers for applications such as sensing, soft robotics, and energy storage. Here, a technique using applied voltage coupled with DLS and a temperature ramp to observe changes in aggregation and particle size in thermoresponsive polymers with and without electroactive monomers is presented. The changes in aggregation behavior observed in these experiments were only possible through the combined application of voltage and temperature control. To obtain these results, a potentiostat was connected to a modified cuvette in order to apply voltage to a solution. Changes in polymer particle size were monitored using DLS in the presence of constant voltage. Simultaneously, current data were produced, which could be compared with particle size data, to understand the relationship between current and particle behavior. The polymer poly(N-isopropylacrylamide) (pNIPAM) served as a test polymer for this technique, as pNIPAM's response to temperature is well-studied. Changes in the lower-critical solution temperature (LCST) aggregation behavior of pNIPAM and poly(N-isopropylacrylamide)-block-poly(ferrocenylmethyl methacrylate), an electrochemically active block-copolymer, in the presence of applied voltage are observed. Understanding the mechanisms behind such changes will be important when trying to achieve reversible polymer structures in the presence of applied voltage.

Here, a protocol to apply voltage to solution during dynamic light scattering particle size measurements with the intent to explore the effect of voltage and temperature changes on polymer aggregation is presented.

Aplicação da tensão na análise dinâmica do tamanho da partícula de dispersão de luz

Dynamic light scattering (DLS) is a common method for characterizing the size distribution of polymers, proteins, and other nano- and microparticles. ...

Setup of Capillary Electrophoresis-Inductively Coupled Plasma Mass Spectrometry (CE-ICP-MS) for Quantification of Iron Redox Species (Fe(II), Fe(III))

Dyshomeostasis of iron metabolism is accounted in the pathophysiological framework of numerous diseases, including cancer and several neurodegenerative conditions. Excessive iron results in free redox-active Fe(II) and can cause devastating effects within the cell like oxidative stress (OS) and death by lipid peroxidation known as ferroptosis (FPT). Therefore, quantitative measurements of ferrous (Fe(II)) and ferric (Fe(III)) iron rather than total Fe-determination is the key for closer insight into these detrimental processes. Since Fe(II)/(III) determinations can be hampered by fast redox-state shifts and low concentrations in relevant samples, like cerebrospinal fluid (CSF), methods should be available that analyze quickly and provide low limits of quantification (LOQ). Capillary electrophoresis (CE) offers the advantage of fast Fe(II)/Fe(III) separation and works without a stationary phase, which could interfere with the redox balance or cause analyte sticking. CE combined with inductively coupled plasma mass spectrometry (ICP-MS) as a detector offers further improvement of detection sensitivity and selectivity. The presented method uses 20 mM HCl as a background electrolyte and a voltage of +25 kV. Peak shapes and concentration detection limits are improved by conductivity-pH-stacking. For reduction of 56[ArO]+, ICP-MS was operated in the dynamic reaction cell (DRC) mode with NH3 as a reaction gas. The method achieves a limit of detection (LOD) of 3 &#181;g/L. Due to stacking, higher injection volumes were possible without hampering separation but improving LOD. Calibrations related to peak area were linear up to 150 &#181;g/L. Measurement precision was 2.2% (Fe(III)) to 3.5% (Fe(II)). Migration time precision was &#60;3% for both species, determined in 1:2 diluted lysates of human neuroblastoma (SH-SY5Y) cells. Recovery experiments with standard addition revealed accuracy of 97% Fe(III) and 105 % Fe(II). In real-life bio-samples like CSF, migration time can vary according to varying conductivity (i.e., salinity). Thus, peak identification is confirmed by standard addition.

Setup of Capillary Electrophoresis-Inductively Coupled Plasma Mass Spectrometry CE-ICP-MS for Quantification of Iron Redox Species FeII, FeIII

This iron redox speciation method is based on capillary electrophoresis-inductively coupled plasma mass spectrometry with sample stacking combined with short analysis in one run. The method quickly analyzes and provides low limits of quantification for iron redox species across a diverse range of tissues and biofluid samples.

Configuração da Espectrometria de Massa de Plasma Acoplada de Eletroforese Capilar (CE-ICP-MS) para quantificação de espécies de redox de ferro (Fe(II), Fe(III))

Dyshomeostasis of iron metabolism is accounted in the pathophysiological framework of numerous diseases, including cancer and several neurodegenerative ...