Este protocolo pode ser usado para quantificar o sono e a atividade em qualquer população de peixes e tem o potencial de expandir o número de sistemas de modelos usados para estudar a regulação do sono. A vantagem dessa técnica é sua flexibilidade. Por exemplo, os peixes podem ser rastreados em uma variedade de tamanhos de arena ou em experimentos de casas e agrupadas.
Uma força de medir o sono neste sistema é a comodidade do método para medicamentos de alta produtividade ou triagem genética. Aplicamos este método ao estudo da evolução do sono em duas populações diferentes de peixes-caverna que demonstram fenótipos de sono dramaticamente diferentes. Embora possa ser difícil estabelecer um sistema de imagem comportamental, nosso sistema fornece um método econômico para estudar larvas e peixes adultos.
Para construir o sistema para rastrear com precisão o comportamento locomotor para estudar o sono e ritmos circadianos em larval A.mexicanus, use acrílico de sinal branco de 0,33 centímetros de espessura para construir uma plataforma para o sistema de rastreamento larval. Coloque a plataforma de gravação em cima da pia de calor quadrada iluminada sobre a qual as arenas contendo peixes residam durante os experimentos de rastreamento comportamental, e coloque um segundo acrílico dentro da caixa entre as luzes da carcaça animal para difundir o infravermelho para uma iluminação e contraste ideais. Coloque todo o estágio de rastreamento larval e iluminação configurada dentro de um tubo plástico fechado.
Use uma ferramenta rotativa para remover a lente de uma webcam experimentalmente adequada. Remova os pequenos parafusos na parte de trás da câmera para remover a carcaça interna e remova os pequenos parafusos dentro do corpo da câmera para soltar o restante da lente. Use uma pequena chave de fenda para remover todas as porções da carcaça da lente que restam após o corte da lente.
E remova o diodo emissor de luz azul na parte superior do dispositivo acoplado por carga ou carcaça CCD. Em seguida, devolva a carcaça interna à sua orientação original antes de aparafusar os dois parafusos externos de volta às suas posições originais. Use uma pequena serra para rodar o interior da câmera para permitir que a câmera seja equipada com um bit de roteamento de plástico arredondado alisando o plástico extra até que ele possa acompanhar um adaptador de lente.
Instale um filtro de passagem infravermelho dentro da câmera o mais próximo possível do CCD sem fazer contato direto com a câmera, e enrosque o adaptador de uma lente fixa de 35 milímetros na parte frontal da câmera na parte de trás da lente. Em seguida, coloque a câmera e a lente no orifício perfurado na tampa na parte superior do tubo que abriga o palco e as luzes, e conecte o USB ao computador no qual os animais serão gravados. Para construir um sistema de sono para peixes adultos, primeiro corte tiras infravermelhas em intervalos de aproximadamente 46 centímetros.
E coloque uma folha de acrílico de 46 por 5 por 0,32 centímetros de luz 9% de luz diretamente na frente de cada faixa de luz infravermelha para difundir a luz infravermelha. Em seguida, coloque todos os tanques em um rack que suporta iluminação infravermelha montada na traseira, e use divisores de plástico opacos e tanques de vidro de 10 litros para criar arenas individuais. Para registrar a atividade locomotor do peixe tetra mexicano coloque o quarto a seis peixes pós-fertilização em poços individuais de uma placa de tecido de 24 poços, e dias 20 a 30 pós-fertilização em poços individuais de uma placa de tecido de seis poços.
Para registrar o sono e a atividade tetra adulto em uma casa de configuração social até cinco adultos por tanque de 10 litros com ou sem os divisores. Neste experimento representativo, peixes larvais de três populações independentes de peixes-caverna apresentaram uma redução significativa no sono em comparação com os peixes superficiais. Esta produção de sono é consistente em todas as idades testadas, pois o sono também foi significativamente reduzido em peixes adultos da caverna Pachon, Molino e Tinaja em comparação com peixes superficiais.
Notavelmente, a habitação social reduziu robustamente o sono em peixes superficiais sem afetar o sono em peixes da caverna pacho provavelmente devido a um efeito de porão nas populações de peixes das cavernas. Ao gravar o peixe deve-se tomar cuidado para garantir que a iluminação da câmera seja ideal para melhorar o sinal do peixe em relação ao fundo. Alguma codificação básica da linha de comando é necessária para este protocolo que é totalmente descrito no texto e deve ser favorável a qualquer configuração de laboratório.
Este protocolo levou a inúmeras perguntas sobre a evolução do sono e atualmente está sendo usado para telas de drogas, rastrear o comportamento do sono e entender como o comportamento social afeta o sono.
