Этот протокол может быть использован для количественной оценки сна и активности в любой популяции рыб и имеет потенциал для расширения числа модельных систем, используемых для изучения регулирования сна. Преимуществом этой техники является ее гибкость. Например, рыбу можно отслеживать в различных размерах арены или в отдельно расположенных или групповых экспериментах.
Сила измерения сна в этой системе является способность метода для высокой пропускной способности наркотиков или генетического скрининга. Мы применили этот метод к изучению эволюции сна в двух различных популяциях пещерных рыб, которые демонстрируют резко разные фенотипы сна. Хотя это может быть трудно создать систему для поведенческой визуализации, наша система обеспечивает экономически эффективный метод для изучения личинок и взрослых рыб.
Чтобы построить систему для точного отслеживания поведения локомотивов для изучения сна и циркадных ритмов в личинок A.mexicanus, используйте 0,33-сантиметровый белый акрил знака, чтобы построить платформу для системы отслеживания личинок. Поместите записывающую платформу поверх освещенной квадратной тепловой раковины, на которой будут находиться рыбосодержащие арены во время экспериментов по поведенческому слежению, и поместите второй акрил внутри коробки между огнями в корпусе животного, чтобы рассеять инфракрасный диапазон для оптимального освещения и контраста. Поместите всю стадию отслеживания личинок и освещение, установленные в закрытой пластиковой трубке.
Используйте роторный инструмент для удаления объектива с экспериментально подходящей веб-камеры. Удалите небольшие винты на задней части камеры, чтобы удалить внутренний корпус, и удалить небольшие винты внутри тела камеры, чтобы ослабить оставшуюся часть объектива. Используйте небольшую отвертку, чтобы удалить любые части объектива жилья, которые остались после резки объектива.
И удалите синий светоизлучающий диод на верхней части устройства, соединенного зарядом, или корпус ccD. Затем верните внутреннее жилище в его первоначальную ориентацию, прежде чем завинчить два внешних винта обратно в исходное положение. Используйте небольшую пилу, чтобы маршрут внутренней части камеры, чтобы камера была оснащена округлые пластиковые маршрутизации бит сглаживания дополнительных пластиковых до тех пор, пока он может сопровождать адаптер объектива.
Установите инфракрасный фильтр прохода внутри камеры как можно ближе к CCD, как это возможно, не делая прямого контакта с камерой, и винт адаптер 35-миллиметровый фиксированный объектив в передней части камеры в задней части объектива. Затем поместите камеру и объектив в отверстие, просверленное в крышку в верхней части трубки, в которой находится сцена и огни, и приложите USB к компьютеру, на котором животные будут записаны. Чтобы построить систему сна для взрослых рыб, сначала вырезать инфракрасные полосы примерно с интервалом в 46 сантиметров.
И поместите 46 на пять на 0,32-сантиметровый 9%light пройти белый знак акриловый лист прямо перед каждой инфракрасной световой полосы, чтобы рассеять инфракрасный свет. Затем поместите все танки на стойку, которая поддерживает заднее инфракрасное освещение, и использовать непрозрачные пластиковые разделители и 10-литровые стеклянные баки для создания отдельных арен. Для записи локомотивной активности мексиканской тетры рыбы место день от четырех до шести после оплодотворения рыбы в отдельных скважин 24-хорошо пластины ткани, и дней от 20 до 30 после оплодотворения в отдельных скважин из шести скважин ткани пластины.
Для записи взрослого тетра сна и активности в социальной установки дома до пяти взрослых на 10-литровый бак с или без разделителей. В этом репрезентативном эксперименте личинки рыбы из трех независимых популяций пещерных рыб показали значительное снижение сна по сравнению с поверхностными рыбами. Это производство сна является последовательным во всех возрастов испытания, как сон был также значительно сокращен во взрослых Pachon, Молино, и Тинаджа пещерных рыб по сравнению с поверхностными рыбами.
Примечательно, что социальное жилье сильно сократило сон в поверхностных рыб, не влияя на сон в пещере Пачо рыбы, вероятно, из-за подвала эффект в популяциях пещерных рыб. При записи рыбы следует принять меры для обеспечения того, чтобы освещение камеры является оптимальным для повышения сигнала рыбы по отношению к фону. Для этого протокола требуется некоторое базовое кодирование командной строки, которое полностью описано в тексте и должно быть подотменно для любых лабораторных настроек.
Этот протокол привел к многочисленным вопросам об эволюции сна и в настоящее время используется для экранов наркотиков, отслеживать поведение сна, и понять, как социальное поведение влияет на сон.
