이 프로토콜은 모든 물고기 집단에서 수면과 활동을 정량화하는 데 사용할 수 있으며 수면 조절을 연구하는 데 사용되는 모델 시스템의 수를 확장할 가능성이 있습니다. 이 기술의 장점은 유연성입니다. 예를 들어, 물고기는 다양한 경기장 크기 또는 노래가 보관된 또는 그룹 하우스 실험에서 추적할 수 있습니다.
이 시스템에서 수면을 측정하는 강도는 높은 처리량 약물 또는 유전자 스크리닝을 위한 방법의 편의성입니다. 우리는 극적으로 다른 수면 표현형을 보여주는 동굴물고기의 두 개의 다른 인구에서 수면의 진화의 연구에이 방법을 적용했습니다. 행동 화상 진찰을 위한 시스템을 설치하는 것은 어려울 수 있더라도, 우리의 시스템은 애벌레와 성인 물고기를 공부하기 위한 비용 효과적인 방법을 제공합니다.
larval A.mexicanus에서 수면과 circadian 리듬을 연구하기위한 운동 동작을 정확하게 추적하는 시스템을 구축하려면 0.33 센티미터 두께의 흰색 표지판 아크릴을 사용하여 애벌레 추적 시스템을위한 플랫폼을 구성하십시오. 동작 추적 실험 중에 물고기가 함유된 경기장이 있는 조명이 켜진 사각형 방열판 위에 레코딩 플랫폼을 배치하고, 동물 하우징의 조명 사이에 두 번째 아크릴을 배치하여 적외선을 확산하여 최적의 조명과 콘트라스트를 만듭니다. 전체 애벌레 추적 단계와 조명을 동봉 된 플라스틱 튜브 내에 설치합니다.
로터리 도구를 사용하여 실험적으로 적합한 웹캠에서 렌즈를 제거합니다. 카메라 뒤쪽의 작은 나사를 제거하여 내부 하우징을 제거하고 카메라 본체 내부의 작은 나사를 제거하여 렌즈의 나머지 부분을 느슨하게 합니다. 작은 드라이버가 렌즈를 절단한 후 남은 렌즈 하우징의 일부를 제거합니다.
그리고 충전 결합 장치 또는 CCD 하우징의 상단 부분에 파란색 발광 다이오드를 제거한다. 다음으로, 두 개의 외부 나사를 원래 위치로 다시 나사하기 전에 내부 하우징을 원래 방향으로 되돌려 보입니다. 작은 톱을 사용하여 카메라 내부를 라우팅하여 카메라가 렌즈 어댑터를 동반할 때까지 여분의 플라스틱을 부드럽게 하는 둥근 플라스틱 라우팅 비트가 장착될 수 있도록 합니다.
카메라와 직접 접촉하지 않고 카메라 내부에 적외선 패스 필터를 설치하고 카메라 앞쪽에 있는 35mm 고정 렌즈의 어댑터를 렌즈 뒤쪽으로 나사로 고정합니다. 그런 다음 무대와 조명이 있는 튜브 상단의 뚜껑에 뚫은 구멍에 카메라와 렌즈를 넣고 동물이 기록될 컴퓨터에 USB를 부착합니다. 성인 물고기를위한 수면 시스템을 구성하기 위해 먼저 약 46 센티미터 간격으로 적외선 스트립을 잘라냅니다.
그리고 적외선을 확산하기 위해 각 적외선 스트립 바로 앞에 흰색 사인 아크릴 시트를 46 by 5 ~ 0.32 센티미터 9 %의 라이트 패스. 그런 다음 모든 탱크를 후방 장착 적외선 조명을 지원하는 랙에 배치하고 불투명한 플라스틱 칸막이와 10리터 유리 탱크를 사용하여 개별 경기장을 만듭니다. 멕시코 테트라 어류장소의 운동 활성을 기록하기 위해 4일에서 6일 동안 수정 후 물고기를 24웰 티슈 플레이트의 개별 우물로 기록하고, 6웰 티슈 플레이트의 개별 우물에서 20~30일 후 수정을 기록한다.
칸막이가 있거나 없는 10리터 탱크당 성인 5명까지 성인 테트라 수면과 활동을 기록합니다. 이 대표적인 실험에서 3개의 독립적인 동굴 물고기 집단에서 온 애벌레 물고기는 표면 물고기에 비해 수면의 현저한 감소를 나타냈다. 이 수면 생산은 수면이 또한 표면 물고기에 비해 성인 파촌, 몰리노 및 티나야 동굴 물고기에서 현저하게 감소했기 때문에 시험된 모든 연령대에 걸쳐 일관됩니다.
특히, 사회 주택은 동굴 물고기 인구의 지하 효과로 인해 파초 동굴 물고기의 수면에 영향을 미치지 않고 표면 물고기의 수면을 강력하게 감소시다. 물고기주의를 녹음할 때 카메라 조명이 배경에 비해 물고기의 신호를 향상시키기 에 최적인지 확인하기 위해 주의를 기울여야 합니다. 텍스트에 완전히 설명되어 있고 모든 랩 설정에 따라 준수해야 하는 이 프로토콜에 대한 몇 가지 기본 명령줄 코딩이 필요합니다.
이 프로토콜은 수면 진화에 대한 수많은 질문을 주도하고 현재 약물 화면에 사용되고있다, 수면 행동을 추적, 사회적 행동이 수면에 미치는 영향을 이해.
