Este modelo de interface sangue-cérebro humano é útil para estudar a transferência de moléculas para o sistema neurológico. Assim como para estudar micróbios, alcance um tumor infectado de dor cerebral. A adição do mini cérebro a esta barreira cerebral sanguínea ou modelo BBB permite o estudo de nossos patógenos e moléculas que fazem com que o BBB se comporte no cérebro.
Demostrando o procedimento estará Florian Bakao, o doutorando do meu laboratório. Para configurar um dispositivo de inserção da cultura da membrana de poliéster mini cerebral BBB, diluir as células para cinco vezes 10 para as quatro células por inserção de concentração incompleta células endoteliais e adicionar o volume apropriado de células a cada cultura de membrana de poliéster inserir em uma placa de 12 poços. Em seguida, coloque as pastilhas e a incubadora de cultura celular até que as células atinjam 100% de confluência.
Segure uma placa de 12 poços com um mililitro de poli-D-lysine ela bem por quatro horas em temperatura ambiente. Seguido por um mililitro de laminina por poço durante a noite. Substitua a laminina por um mililitro de célula endotelial complementada com soro bovino fetal de 5%, ou FBS.
Coloque o lugar em uma incubadora por uma hora. Para preparar o mini grão, trippsinize suavemente os astrócitos dos neurônios humanos em CHME clonam cinco células. Associe as pelotas celulares com o meio celular endotelial completo.
Depois de contar em 3,6 vezes 10 para o quinto neurônios e astrócitos a 0,4 vezes 10 para o quinto clone CHME cinco células por poço têm uma placa de 12 poços. E semeou a placa de 12 poços. Para construir o mini cérebro BBB 24 horas após a semeadura substitua o meio usado por um meio de célula endotelial completo fresco e transfira a cultura da membrana de poliéster revestida de células micro vasculares cerebrais sobre as mini células cerebrais.
Em seguida, coloque o BBB com muitos dispositivos cerebrais na incubadora. Para validar a permeabilidade endotelial do cérebro BBB adicione 1,5 mililitros de tampão de transporte por poço a uma nova placa de 12 poços. E vire cada filtro de cabeça para baixo para remover cuidadosamente o meio sem afetar a barreira celular endotelial.
Coloque cada filtro em um poço da placa cheia de tampão de transporte e adicione 0,5 mililitros de amarelo Lúcifer em cada poço. Em seguida, coloque a placa na incubadora por 10 minutos antes de transferir os filtros para um novo tampão de transporte preenchido com 12 placas de poço. Depois de configurar um BBB muitos dispositivos cerebrais como demonstrado, adicione 3500 unidades de plataforma da cepa de vírus neurotrófico francês do vírus da febre amarela diluída e 50 microliters de 2%FPS células endoteliais média, com muito cuidado, em cima do compartimento luminal.
Inocular o controle do mini cérebro BBB com 50 microliters de 2%FBS endotelial médio sem vírus. Em seguida, coloque o vírus expondo BBB muitos dispositivos cerebrais na incubadora por 24 horas. No dia seguinte, remova as pastilhas para determinar a permeabilidade da célula endotelial e um companheiro, assim como demonstrado.
Salve um mililitro de amostra de cada poço para determinar o titulador do vírus no compartimento médio. Sob a inserção suavemente para evitar vazamento do compartimento luminal nos compartimentos abluminais. Para estudar o transporte de um neurônio direcionado biomolecular através da barreira cerebral do sangue, adicione a bio molécula de interesse às pastilhas e devolva a placa à incubadora de cultura celular.
Após 24 horas, insere remotamente e determina a permeabilidade endotelial. Em seguida, colorique as muitas células cerebrais com o anticorpo apropriado para detectar a presença da bio molécula de interesse dentro do mini cérebro. As micro células endoteliais cerebrais humanas expressam todos os subconjuntos de rececptors, transportadores Efflux ou transportadores que são proteínas relevantes para suas funções biológicas.
Alguma cepa de vírus neurotrópico francês do vírus da febre amarela pode atravessar a barreira cerebral do sangue em 24 horas. Os vírus então amplificam pelos próximos dois dias pela multiplicação do vírus dentro das células cerebrais. Além disso, a expressão de biomarcadores virais específicos é estimulada quando essa população viral neurovasiva é serialmente passagemda nas mini células cerebrais e estritamente correlacionada com a carga viral.
Depois de ser adicionado ao limite da molécula de penetração celular compartimental Neuro-Tag Neurovita atravessa a barreira cerebral do sangue e é capaz de atingir neurônios humanos. Molécula de penetração celular neuro tag Delta neurovita cruza a barreira celular endotelial, mas tem como alvo menos eficientemente os neurônios humanos. Após ser adicionada ao pequeno compartimento médio, a molécula de penetração celular Neuro-Tag Neurovita atravessa a barreira cerebral do sangue e é capaz de regenerar os axônios dos neurônios humanos, após o ferimento.
Em contraste com a molécula de penetração celular Neuro-Tag Neurovita Delta, a forma inativa de Neurovita. Quando aplicado após a molécula de penetração de células de axônio Neuro-Tag Neurovita desencadeia a proteção neurológica dos neurônios feridos e a regeneração x zonal. Estritamente por uma boa questão de práticas.
não use demais passagens de células I. Tente manter alguma semelhança de médias e regiões e verificar a ausência de mycoplasma. Interações entre o mini cérebro e as drogas são micróbios de interesse podem ser mais estudados por transcrição que quimicamente esta ou biologia clássica chamada técnicas.
