O objetivo geral deste método é a visualização da função da artéria coronária descendente anterior esquerda em ratos usando ecocardiografia para calcular a reserva de fluxo coronário. Este método oferece uma importante ferramenta de avaliação para o diagnóstico de disfunção microvascular em corações doentes e para avaliação de tratamentos potenciais ao longo do estudo. Embora a terapia de reperfusão tenha sido demonstrada para salvar o miocárdio comprometido e melhorar a função ventricular esquerda, anormalidades funcionais de pequenos vasos coronários podem ocorrer após a recanalização da artéria coronária.
Este método pode fornecer informações sobre a microcirculação coronária de ratos, bem como em outros modelos, incluindo infarto do miocárdio, e sobrecarga de volume de pressão do ventrículo esquerdo. Antes da cirurgia de reperfusão pré-isquemia, confirme a falta de resposta ao aperto do dedo do pé em um rato Fischer 344 anestesiado. Raspe o cabelo do peito.
Aplique pomada aos olhos do animal e coloque o animal na posição supina em uma plataforma de aquecimento incorporada de 37 a 38 graus Celsius. Conecte a sonda linear de 13 a 24 mega-hertz à máquina de ultrassom. Defina a pré-configuração do aplicativo para a configuração de imagem cardíaca e use o sistema ferroviário para posicionar a sonda para obter a visão do eixo curto parasternal.
Use o micromanípulador do eixo XY para mover a sonda na direção rostral para localizar a artéria pulmonar. Mova a sonda, tornando o ventrículo esquerdo mais facilmente visível. Uma vez que a imagem do modo B tenha sido capturada e Cine Armazenada, clique na cor Doppler e visualize a artéria coronária no eixo curto.
A cor vermelha, como observado em tempo real, é indicativa da direção do fluxo. Depois de visualizar a artéria coronária descendente anterior inferior no modo Doppler colorido, mude o modo para a onda de pulso e procure a presença de uma linha indicadora amarela na artéria coronária. Coloque a linha de onda de pulso amarela no meio da artéria coronária, tomando cuidado para que o ângulo seja paralelo à direção do fluxo e use a Cine Store para capturar a velocidade do fluxo coronário descendente anterior e a diástola de pico das formas de onda.
Depois de obter a velocidade de fluxo descendente anterior, coloque uma pequena faixa de gaze ao redor da base da cauda e use hemostatas para agarrar e torcer o torniquete para aplicar pressão, fazendo com que a veia aumente. Coloque cuidadosamente uma agulha borboleta de infusão de 25 bitolas presa a uma seringa de 10 mililitros carregada com dobutamina na veia da cauda dilatada e estabilize a agulha com cola e um pedaço de fita cirúrgica. Quando a linha de infusão estiver fixada, remova os hemostatos e o torniquete para recuperar o fluxo e coloque a seringa em uma bomba de infusão definida para injetar 20 microgramas por quilograma por minuto.
Durante a infusão, monitore cuidadosamente o pico da artéria descendente anterior esquerda e a frequência cardíaca, registrando periodicamente os picos de onda de pulso da artéria descendente anterior esquerdo no modo Doppler sob as condições de estresse induzidas por dobutamina. Após os picos de artéria coronária descendente anterior e a frequência cardíaca terem se estabilizado durante o desafio, pare a infusão, remova o conjunto de infusão da veia da cauda e remova o animal da plataforma. Em seguida, use a ferramenta de velocidade máxima para obter as velocidades diatólicas máximas das imagens e calcular o índice de reserva de fluxo coronariano como a razão da velocidade de fluxo diastólico de tensão da artéria descendente anterior anterior para a velocidade de fluxo diastólico de ressarcimento anterior da artéria descendente anterior.
Utilizando uma fonte de luz de fibra óptica, entubar o rato com um cateter IV de calibre 18 e conectar-se ao cateter a um ventilador. Em seguida, use um 8-0 sutura monofilamento para ligar a artéria descendente anterior esquerda através de uma abertura de 15 milímetros no quinto espaço intercostal com um nó simples por 30 minutos. No final do período isquemia, confirme visualmente a isquemia através da descoloração da superfície do coração e libere a ligadura.
A reperfusão pode ser verificada pelo vermelhidão da área anteriormente descolorida do músculo cardíaco. 72 horas após a cirurgia, meça o fluxo coronário e a reserva de fluxo coronário como demonstrado, e compare as medidas às obtidas antes da lesão. Neste experimento representativo, antes da cirurgia de reperfusão da isquemia, a velocidade da artéria coronária descendente anterior foi medida como aproximadamente 423 milímetros por segundo para mais do que o dobro da velocidade após a infusão de dobutamina.
72 horas após a reperfusão da isquemia, a velocidade da artéria coronária descendente anterior foi significativamente maior em comparação com a velocidade da artéria coronária descendente anterior antes da cirurgia. A resposta ao estresse a um teste de dobutamina após a lesão foi significativamente reduzida em comparação com a resposta antes das respostas da cirurgia. A reserva de fluxo coronariano é calculada como a razão da velocidade de fluxo de pico durante o estresse para a velocidade de fluxo de repouso e foi aproximadamente 2,1 em ratos jovens antes da cirurgia, mas significativamente reduzida 72 horas após a lesão.
Além disso, não houve alterações significativas na função sistólica do ventrículo esquerdo 72 horas após a lesão. Após seu desenvolvimento, essa técnica permitirá que os pesquisadores explorem e usem imagens de ultrassom de artérias coronárias em pequenos modelos animais que imitam com precisão as condições da doença humana. Depois de assistir a este vídeo, você deve ter uma compreensão muito boa de como medir o fluxo sanguíneo coronário e avaliar a microcirculação coronariana em um modelo de doença cardíaca animal de pequeno porte.
