Uma metodologia padronizada para identificar e dissecar depósitos adiposos em todo o corpo é fundamental para a investigação de diferenças de caráter e função de adipócitos dentro de nichos anatômicos discretos. A principal vantagem dessa técnica é que ela é um método confiável e preciso para identificar e extirver tanto depósitos de adipose de roedores comuns quanto menos estudados. Para a identificação e isolamento do BAT interscapular, use uma tesoura de íris para cortar horizontalmente ao longo da borda inferior do tecido subcutâneo anterior de um rato eutanizado seguindo a borda natural do depósito.
Faça duas incisões verticais ao longo das bordas laterais do depósito seguindo as bordas naturais do tecido. Use fórceps para virar cuidadosamente o depósito para revelar o tecido adiposo marrom interscapular em forma de borboleta embutido no tecido adiposo branco. Em seguida, dissecar cuidadosamente o BAT longe do WAT circundante.
Armazene tecidos adiposos em recipientes apropriados para análise a jusante. Para a identificação e isolamento do WAT subcutâneo posterior, coloque o rato na posição supina e proteja os membros do animal. Use fórceps para levantar a pele na base do esterno e fazer uma incisão de pele de um milímetro.
Insira uma lâmina da tesoura de íris no corte e faça uma incisão de pele média de quatro a cinco centímetros começando na base do esterno e subindo até a base da cauda. Em seguida, faça duas incisões horizontais de um centímetro na parte superior da incisão vertical inicial estendendo-se lateralmente da linha média. Use os fórceps para retirar cuidadosamente a pele da cavidade peritoneal, use a perna para localizar o WAT subcutâneo posterior que deve permanecer associado à pele.
Fixar a pele estendida e extirpar completamente o depósito wat inguinal triangular da base da retalho traseira ventrally através da virilha. Para identificação e isolamento viscerais do depósito wat, use fórceps para levantar a fina parede da cavidade peritenêa na base do esterno e fazer uma incisão de um milímetro no tecido tented. Insira uma lâmina da tesoura de íris no corte e faça uma incisão vertical descendente de quatro a cinco centímetros do topo da cavidade peritoneal até o reto.
Faça duas incisões horizontais de um centímetro na parte superior e inferior da incisão vertical estendendo-se lateralmente da linha média e use os fórceps para retirar o peritônio para expor o conteúdo da cavidade abdominal. Em seguida, fixar o peritônio estendido na panela de dissecção para colher os depósitos wat contidos dentro da cavidade peritoneal. Para a identificação e isolamento do WAT gonadal visceral, localize as gôndas e use fórceps para levantar o WAT gonadal associado, em seguida, use a tesoura de íris para extirir cuidadosamente o WAT das gôndas.
Para extirer o depósito perirenal, localize o rim e use fórceps para levantar o tecido renal. Puxe o rim para a linha média para ver uma divisão clara entre os depósitos perirenal e retroperitoneal e extir essa a WAT diretamente associada aos rins. Em seguida, remova as glândulas suprarrenais localizadas acima dos rins do WAT.
Para identificação e isolamento de WAT retroperitoneal, levante o rim para a linha média novamente e use uma tesoura de íris para dissecar cuidadosamente o WAT retroperitoneal da parede peritoneal posterior. Para isolar o WAT popliteal, coloque a patela contra a panela de dissecção tomando cuidado para que a fossa popliteal na parte de trás do joelho esteja voltada para cima. Use a tesoura de íris para remover cuidadosamente a pele da base da mola traseira ao pé.
Use a tesoura de íris para fazer um corte na borda inferior das cabeças medial e lateral do músculo gastrocnemius, use os fórceps para levantar o músculo para revelar o depósito popliteal triangular. Em seguida, use uma tesoura de íris para extircular o depósito ao longo das bordas naturais do tecido. Aqui, são mostrados os locais anatômicos brutos de depósitos subcutâneos, marrons, viscerais e popliteais.
As características histológicas dos depósitos de adiposos subcutâneos, marrons, viscerais, popliteais, constitutivos e regulados da medula, depósitos de adiposos intramusculares e infrapatos podem ser avaliados pelos protocolos padrão de coloração de Hematoxylin e Eosin. Os tecidos adiposos isolados usando este protocolo podem ser usados para uma grande variedade de pontos finais experimentais, incluindo análise histológica, estudos moleculares e análise de expressão genética e proteica. A padronização em todo o campo da identificação de diversos depósitos adiposos nos ajudará, sem dúvida, a aprofundar nossa compreensão de suas características moleculares e metabólicas e suas contribuições diferenciais para estados patológicos locais e sistemáticos.
