Dissecação de órgãos reprodutivos de uma fêmea <ol><li> As fêmeas grávidas são sacrificados por asfixia CO 2, utilizando gás comprimido. </li><li> Coloque o animal em decúbito dorsal almofada absorvente e mergulhe-o em etanol 70% para reduzir o risco de contaminação a dissecção com cabelo mouse. </li><li> Aperte a pele e fazer uma pequena incisão lateral na linha média com tesouras cirúrgicas regulares. Segure a pele firmemente acima e abaixo da incisão e puxar a pele para além em direção à cabeça e cauda para expor o abdômen. </li><li> Segure o peritônio com uma pinça e corte para expor a cavidade abdominal. </li><li> Localize os órgãos reprodutivos na região dorsal da cavidade do corpo: dois cornos uterinos, o oviduto e os ovários. </li></ol> Primitive Streak estágio Dissection (6,5 dpc) <ol><li> Remover o corno uterino, segurando o útero abaixo do oviduto e cortá-la livre ao longo da mesométrio. Lugar útero dissecado em PBS gelado. <img src="/files/ftp_upload/old/160_2008_7_8_2/160_figure-1.jpg" alt="Figura 1" width="263" height="132" /> Figura 1 </li><li> Separe cada embrião cortando entre locais de implantação ao longo corno uterino. <img src="/files/ftp_upload/old/160_2008_7_8_3/160._figure-2.jpg" alt="Figura 2" width="575" height="171" /> Figura 2 </li><li> Segure o revestimento muscular uterina, deslizando forceps relojoeiro entre a camada muscular circunvizinho e do tecido envolvido decídua. Retire a camada muscular, expondo a decídua. <img src="/files/ftp_upload/old/160_2008_8_15_4/160_Figure-3.png" alt="Figura 3" width="593" height="166" /> Figura 3 </li><li> Clipe de fora de uma parcela da decídua expostas no ápice (aproximadamente 1 / 5 do tecido decídua), que irá expor a ponta midventral ou distal do embrião fechado. <img src="/files/ftp_upload/old/160_2008_8_15_5/160_Figure-4.png" alt="Figura 4" width="589" height="212" /> Figura 4 </li><li> O embrião pode ser descascado, utilizando as pontas de uma pinça. Pierce a decídua com uma pinça em torno do embrião e uma pinça aberta a lágrima decidua distante. <img src="/files/ftp_upload/old/160_2008_8_15_6/160_Figure-5.png" alt="Figura 5" width="249" height="200" /> Figura 5 </li><li> Uma vez que embrião é removido, a membrana Reichart ainda pode ser anexado, bem como o cone ectoplacental (trofoblasto). O embrião pode ser dissecada ainda por dissecção cuidadosa. <img src="/files/ftp_upload/old/160_2008_8_15_7/160_Figure-6.png" alt="Figura 6" width="356" height="222" /> Figura 6 </li></ol>

<ol>
	<li>Nagy, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Manipulating the mouse embryo: A laboratory manual third edition. , (2003).</li></ol>

Pós-implantação em ratos ocorre entre 4,5 dpc e nascimento. Este método de dissecação pode ser aplicada, essencialmente como descrito, para isolar mais cedo ou mais tarde embriões em estágio 5,5-8,5 dpc.

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		<div>
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		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Micro Dissecting Forceps serrated, straight</td>
<td>Tool</td>
<td>Roboz</td>
<td>RS-5130 </td>
<td>2 pairs</td>
</tr>
<tr>
<td>Micro Dissecting Tweezers Pattern #55 INOX</td>
<td>Tool</td>
<td>Roboz</td>
<td>RS-5010 </td>
<td>2 pairs</td>
</tr>
<tr>
<td>Dulbecco's Phosphate Buffered Saline (1X) </td>
<td>Reagent</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>14190 </td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Fisherbrand Sterile Polysytrene Petri Dish</td>
<td>Tool</td>
<td>Fisher Scientific</td>
<td>08-757-12 </td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>4% Paraformaldehyde in PBS</td>
<td>Reagent</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Straight Sharp-Pointed Dissecting Scissors</td>
<td>Tool</td>
<td>Fisher Scientific</td>
<td>08-940 </td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Pregnant female mice </td>
<td>Animal</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Dissecting Microscope</td>
<td>Microscope</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

dissection of 6.5 dpc mouse embryos

Análise dos padrões de expressão genética durante as fases iniciais do desenvolvimento embrionário de mamíferos pode fornecer pistas importantes sobre a interação gene função, célula-célula e mecanismos de sinalização que patterning guia embrionárias. No entanto, a dissecção do embrião de rato a partir da decídua, pouco após o implante pode ser um processo desafiador, e documentação passo-a-passo detalhado desse processo é inexistente. Aqui demonstramos como pós-implantação (6,5 dpc) embriões são isolados pela primeira dissecando o útero de um rato grávidas (detecção do plug vaginal foi designado coitum poist dias 0,5) e, posteriormente, dissecando o embrião da decídua materna. A dissecção da membrana Reichert é descrito, bem como a remoção do cone ectoplacental.

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Dissection of 6.5 dpc Mouse Embryos

Isolamento de pós-implantação de embriões em estágio permite uma padronização para estudar e analisar genes de células de linhagem processos de decisão durante o desenvolvimento embrionário, mas dissecção adequada do embrião em estágio inicial pode ser um desafio. Este protocolo descreve um método para isolar muito primitiva raia-estágio-embriões (~ 6,5 dias pós coitum [dpc]).

Dissecção de 6,5 embriões de camundongos dpc

Analysis of gene expression patterns during early stages of mammalian embryonic development can provide important clues about gene function, cell-cell ...

Research

JoVE Journal

Biology

38.0K visualizações.  Harvard Medical School. Isolamento de pós-implantação de embriões em estágio permite uma padronização para estudar e analisar genes de células de linhagem processos de decisão durante o desenvolvimento embrionário, mas dissecção adequada do embrião em estágio inicial pode ser um desafio. Este protocolo descreve um método para isolar muito primitiva raia-estágio-embriões (~ 6,5 dias pós coitum [dpc]).