O sistema alimentar da Aplysia tem sido usado há muito tempo como um sistema modelo para o estudo do controle motor e da biomecânica do corpo macio. No entanto, os músculos no interior do agarrador de alimentação têm sido inacessíveis à manipulação in vivo. Esta cirurgia nos permite acessar esses músculos em animais de comportamento intactos.
Isso não só nos permite acesso in vivo pela primeira vez, mas a técnica envolve uma única incisão a uma única parte de uma lesma, o que significa que os danos às outras regiões são relativamente pequenos. A melhor preparação é fazer dissecções cuidadosas da massa bucal e conhecer-se completamente com a anatomia. Selecione um animal ativo oferecendo-lhe algas marinhas e confirmando que os intervalos de mordidas não são superiores a cinco segundos.
10 minutos após a anestesia, tente gentilmente inserir um pino na brânquia e no rinoceronte, verificando se estes não se retraem para garantir anestesia suficiente. Certifique-se de que os lábios da lesma são lisos, indicando que as mandíbulas estão totalmente relaxadas. Desta forma, o odontophore é exposto.
No caso em que a rugas aparece nos lábios, os lábios e a mandíbula do animal não são suficientemente relaxados para o procedimento cirúrgico. Consulte o manuscrito para obter dicas sobre como induzir relaxamento labial. Posicione a lesma para que a cabeça fique para baixo, permitindo que a massa bucal se acomode contra as mandíbulas.
Aplique pressão com o polegar e o dedo indicador para empurrar a massa bucal em direção às mandíbulas, segurando a massa bucal no lugar. Gire a mandíbula para que elas sejam visíveis. Ao mesmo tempo, mantenha a pressão sobre a massa bucal para que a proa da massa bucal seja visível através das mandíbulas.
Trabalhe suavemente as pontas das forças cegas na fissura do odontophore e use-as para alavancar a superfície radular através das mandíbulas. Se as mandíbulas não estiverem suficientemente relaxadas, use as fórceps para agarrar suavemente a borda da fissura para auxiliar nesse processo. Uma vez que a superfície é exposta, trabalhe as mandíbulas longe da porção anterior da superfície radular todo o caminho ao redor do perímetro.
Isso torna o odontophore menos propenso a se retrair. Certifique-se de que não mais da metade das paredes do odontophore está exposta. Uma vez que a superfície radular esteja totalmente exposta, organize a lesma sob um microscópio de dissecção para a cirurgia.
Para cientistas com menos experiência, use um elástico largo e uma terceira mão para estabilizar as mandíbulas e a superfície radular para a cirurgia. Posicione a superfície radular para que o lado da fissura fique de frente para o investigador. Segure suavemente a superfície radular perto da base radular para que uma dobra horizontal seja criada perpendicular ao vinco anatômico.
Use uma tesoura fina para cortar esta dobra, fazendo uma incisão ao longo do vinco anatômico. Amplie esta incisão inicial para três a cinco centímetros para permitir o acesso ao interior da massa bucal. Ajuste a luz para que ela aponte diretamente para trás através desta incisão.
Parte das bordas da incisão para que a parte de trás do lúmen do odontophore e os finos fios verticais do músculo I7 sejam visíveis. Entre na incisão. Segure os dois fios do I7 e puxe-os para cima através da incisão, onde a maior parte do músculo pode ser cortado como é prático.
Após a realização das lesões, segure os tentáculos anteriores e empurre-os para baixo na superfície radular para devolver a lesma à sua configuração original. Coloque animais pós-cirúrgicos em um ambiente protegido com bom fluxo de água. Certifique-se de que os animais estão alertas e responsivos no dia seguinte à cirurgia.
No primeiro ou segundo dia após a cirurgia, os animais começam a se alimentar. Para realizar a lesão de fibra sub-radular após a incisão cirúrgica, insira a ponta de uma pequena lâmina de bisturi reta através da incisão com a borda afiada inclinada para cima. Raspe suavemente as fibras musculares finas da parte inferior da superfície radular.
Em seguida, realize os cuidados pós-operatórios como anteriormente. Neste estudo anatômico, as lesões falsas não tiveram efeito significativo na largura da abertura no pico da mordida. Considerando que as lesões fibrosas I7 e sub-radular reduziram significativamente a largura da mordida.
A coisa mais importante a se lembrar é que os lábios e mandíbulas do animal estão totalmente relaxados antes de tentar empurrar o agarrador para fora através das mandíbulas. Provavelmente, tanto o I7 quanto as fibras sub-radulares são músculos multifuncionais e só identificamos certos aspectos do comportamento para o qual eles contribuem. Além disso, essa técnica de prolongar o odontophore dá acesso a porções inteiras da anatomia que antes eram inacessíveis.
Além de abrir regiões anatômicas e biomecânicas de corpo mole, esperamos que isso possa servir de base para outros investigadores que estão trabalhando com estruturas suaves que podem ser difíceis de investigar.
