Das Fütterungssystem von Aplysia wird seit langem als Modellsystem für die Untersuchung der Motorsteuerung und der Weichkörperbiomechanik verwendet. Die Muskeln tief im Inneren des Futtergreifers waren jedoch für in vivo-Manipulationen unzugänglich. Diese Operation ermöglicht es uns, diese Muskeln bei ansonsten intakten, sich verhaltenden Tieren zu erreichen.
Dies ermöglicht uns nicht nur zum ersten Mal in vivo-Zugang, sondern die Technik beinhaltet auch einen einzigen Schnitt zu einem einzelnen Teil einer Schnecke, was bedeutet, dass der Schaden für die anderen Regionen relativ gering ist. Die beste Vorbereitung ist, sorgfältige Abschnitte der bukkalen Masse zu machen und sich gründlich mit der Anatomie vertraut zu machen. Wählen Sie ein aktives Tier aus, indem Sie es Algen anbieten und bestätigen, dass die Bissintervalle nicht mehr als fünf Sekunden betragen.
10 Minuten nach der Anästhesie, versuchen Sie vorsichtig, einen Stift in die Kieme und Rhinophore einzufügen, um zu überprüfen, dass diese nicht zurückziehen, um eine ausreichende Anästhesie zu gewährleisten. Stellen Sie sicher, dass die Lippen der Schnecke glatt sind, was darauf hinweist, dass die Backen vollständig entspannt sind. Auf diese Weise wird Odontophore ausgesetzt.
In dem Fall, in dem Falten auf den Lippen auftritt, sind die Lippen und der Kiefer des Tieres nicht ausreichend entspannt für den chirurgischen Eingriff. Im Manuskript finden Sie Tipps zur Induktion der Lippenentspannung. Positionieren Sie die Schnecke so, dass der Kopf nach unten hängt, so dass sich die bukkale Masse gegen die Kiefer absetzen kann.
Drücken Sie mit Daumen und Zeigefinger, um die bukkale Masse in Richtung der Backen zu schieben und die bukkale Masse an Ort und Stelle zu halten. Drehen Sie den Kiefer so, dass er sichtbar ist. Zur gleichen Zeit, halten Sie den Druck auf die bukkale Masse, so dass der Spannweite der bukkalen Masse durch die Backen sichtbar ist.
Arbeiten Sie die Spitzen der stumpfen Zange vorsichtig in den Spalt des Odontophores und hebeln Sie sie, um die radförmige Oberfläche durch die Backen zu hebeln. Wenn die Backen nicht ausreichend entspannt sind, verwenden Sie die Zange, um sanft die Kante der Spalte zu greifen, um diesen Prozess zu unterstützen. Sobald die Oberfläche frei ist, arbeiten Sie die Backen frei von dem vorderen Teil der Radularoberfläche den ganzen Weg um den Umfang.
Dies macht die Odontophore weniger wahrscheinlich, sich zurückzuziehen. Stellen Sie sicher, dass nicht mehr als die Hälfte der Wände des Odontophores freigelegt ist. Sobald die raduläre Oberfläche vollständig belichtet ist, ordnen Sie die Schnecke unter einem Seziermikroskop für die Operation an.
Für Wissenschaftler mit weniger Erfahrung, verwenden Sie ein breites Gummiband und eine dritte Hand, um die Kiefer und die Radularoberfläche für die Operation zu stabilisieren. Positionieren Sie die Radularfläche so, dass die Spaltenseite dem Prüfer zuzeigt. Greifen Sie die Radularfläche in der Nähe der Radularbasis vorsichtig, so dass eine horizontale Falte senkrecht zur anatomischen Falte erzeugt wird.
Verwenden Sie eine feine Schere, um diese Falte zu durchschneiden, so dass ein Schnitt entlang der anatomischen Falte. Erweitern Sie diesen anfänglichen Schnitt auf drei bis fünf Zentimeter, um den Zugang zum Inneren der bukkalen Masse zu ermöglichen. Stellen Sie das Licht so ein, dass es durch diesen Schnitt direkt zurück zeigt.
Teilen Sie die Ränder des Einschnitts so, dass die Rückseite des Lumens des Odontophores und die dünnen vertikalen Stränge des I7-Muskels sichtbar sind. Greifen Sie in den Schnitt. Greifen Sie beide Stränge von I7 und ziehen Sie sie durch den Schnitt, wo so viel des Muskels weggeschnitten werden kann, wie praktisch ist.
Nachdem Läsionen durchgeführt wurden, greifen Sie die vorderen Tentakel und drücken Sie sie auf die raduläre Oberfläche, um die Schnecke wieder in ihre ursprüngliche Konfiguration zu bringen. Platzieren Sie postoperative Tiere in einer geschützten Umgebung mit gutem Wasserfluss. Stellen Sie sicher, dass die Tiere am Tag nach der Operation wachsam und reaktionsfähig sind.
Am ersten oder zweiten Tag nach der Operation beginnen die Tiere zu füttern. Um nach dem chirurgischen Schnitt eine subraduläre Faserläsion durchzuführen, legen Sie die Spitze einer kleinen, geraden Skalpellklinge durch den Schnitt mit der scharfen Kante nach oben. Kratzen Sie die feinen Muskelfasern vorsichtig von der Unterseite der Radularoberfläche.
Führen Sie dann die postoperative Pflege wie bisher durch. In dieser anatomischen Studie hatten Scheinläsionen keinen signifikanten Einfluss auf die Breite der Öffnung auf dem Höhepunkt des Beißens. Während sowohl I7 als auch subraduläre Faserläsionen die Bissbreite deutlich reduzierten.
Das Wichtigste, was man sich merken sollte, ist, dass die Lippen und Kiefer des Tieres vollständig entspannt sind, bevor man versucht, den Greifer durch die Kiefer zu schieben. Wahrscheinlich sind sowohl I7 als auch die subradularen Fasern multifunktionale Muskeln und wir haben nur bestimmte Aspekte des Verhaltens identifiziert, zu denen sie beitragen. Darüber hinaus ermöglicht diese Technik der Langwierigen des Odontophores den Zugang zu ganzen Teilen der Anatomie, die zuvor unzugänglich waren.
Neben der Öffnung anatomischer Regionen und der Biomechanik des weichen Körpers hoffen wir, dass dies als Grundlage für andere Forscher dienen könnte, die mit weichen Strukturen arbeiten, die sonst schwer zu untersuchen wären.
