Infusão de glândula parotóide retrógrada através do duto de Stensen em um primata não humano para entrega de genes vetoriados

Este protocolo é importante porque demonstra o procedimento de infusão de glândula salivar retrógrada em detalhes. O procedimento pode ser usado por uma variedade de razões médicas, como imunoprofilaxia vetorial ou terapia genética. Esta técnica é fácil de aprender e reproduzir.

Os autores conseguiram realizar esse procedimento com sucesso em várias ocasiões, apesar de não serem cirurgiões orais, nem terem tal formação. Após anestesiar use lupas dentárias para ampliação e identifique a papila parótida ou a abertura do duto de Stenson na bochecha posterior adjacente ao molar superior segundo. Dilate suavemente a papila parótida colocando o ponto de um dilatador cônico no centro ou abertura da papila e gire o dilatador para frente e para trás por aproximadamente 20 a 30 segundos.

Em seguida, o uso de pinças segura a extremidade marcada do tubo de polietileno preso ao infundado contendo seringa a aproximadamente 0,5 centímetros da extremidade distal e insira suavemente a ponta do tubo na papila dilatada. Avance suavemente o tubo por pequenos movimentos rotativos para ajudar os tubos a deslizar, seguido de reajuste da pinça de 0,5 centímetros proximal para a aderência anterior. Repita este processo até que a marca de dois centímetros atinja a papila parótida.

Em seguida, para selar a papila parótida e reduzir o derramamento do infundido de volta na cavidade oral, aplique um cianoacrilato na bochecha ao redor da papila e no tubo inserido. Uma vez que o cianoacrilato seca, injete lentamente o infundido ao longo de cinco minutos a uma taxa de 100 microlitres por minuto. Após a infusão estar completa, deixe o tubo no lugar por pelo menos cinco minutos, mantendo assim o duto selado e permitindo que o infusor permaneça na glândula parótida.

Por fim, remova o tubo com tração suave e o cianoacrilato se soltará com o tubo. Fluoroscopia usando uma infusão de contraste de rádio demonstrou ramificação da solução através do duto de Stenson e na glândula parótida. A análise química da glândula parótida revelou coloração positiva para EGFP tanto nas células ductal quanto acinar indicando transdução e transcrição bem sucedidas em ambos os tipos de células.

O principal desafio neste procedimento é provavelmente introduzir o tubo de polietileno na papila, que deve ser feito muito suavemente e lentamente.