A medição simultânea da reflexão da folha com a análise de fluorescência de clorofila utilizando o já conhecido modelo de planta mutante facilita o estabelecimento de novos parâmetros de reflexão. A construção de novos parâmetros de reflectância de folhas pelo nosso método permite o monitoramento em tempo real das mudanças de comportamentos das plantas em condições ambientais naturais. Antes de iniciar, um experimento configurou um sistema de medição como mostrado neste esquema.
Com um estágio amostral, fonte de luz, fluorômetro PAM e radiômetro espectral. Em seguida, conecte uma placa de aço quadrada de 10 cm com um orifício de um cm de diâmetro ao estágio de amostra feito sob medida. E coloque duas sondas de fibra finas bem juntas.
Enrole as sondas com fita plástica. Em seguida, use um suporte para prender as sondas gravadas no estágio da amostra. Posicione as sondas verticalmente ao estágio da amostra.
E anexar um guia de luz biforked feito de fibras de vidro à fonte de luz halógena. Em seguida, apaguei o estágio amostral de ambas as direções em ângulos de aproximadamente 45 graus. Ajustando a fonte de luz para que a luz ilumine uniformemente o estágio da amostra sem lançar sombras.
Para medição simultânea da reflexão esquerda e da análise de floresnce de clorofila montada, em uma sala escura com luz de celofane verde coloque uma planta de teste no suporte da folha do estágio da amostra e toque a folha contra o orifício da placa de aço no palco. Depois de desligar a luz verde fraca, ligue o fluorômetro PAM e apague a amostra da folha com uma luz de medição. Mova o ajustador para que a intensidade de floresnce mede aproximadamente 100 e meça a distância entre a sonda e a folha.
Corrija o ajustador no lugar e regise o valor da distância no ajustador. Em seguida, desligue a luz de medição e remova a planta de teste. Para medição da intensidade da luz actínica coloque um quantímetro leve na posição onde a folha de amostra será colocada.
E irradiar luz da fonte de luz halógena para medir a intensidade da fonte de luz. Determinar quais posições do mostrador de fonte de luz geram intensidade de 30, 60, 120, 240 e 480 prótons micromolar por metro quadrado por segundo. Coloque uma placa branca como padrão refletidor na posição da amostra da folha.
E ligue um radiômetro espectral. Ajuste a reflectância espectral entre 350 e 850 nanômetros. Não há dados espectrais neste momento, pois não há luz irradiante.
Ligue a lâmpada halógena para irradiar com 480 fótons micromolar por metro quadrado por segundo. A maior intensidade de irradiação neste teste e ajustar a força de detecção do radiômetro para evitar a saturação. Em seguida, registosete a espectroral sob iluminação com 30, 60, 120, 240 e 480 fótons micromolar por metro quadrado por segundo.
Para medição simultânea da reflexão da folha e análise de floresnce de clorofila, transfira a planta da câmara de crescimento para a sala escura com a mesma temperatura e umidade. Depois de uma hora coloque uma planta arabidopsis na posição da amostra de folhas. E fixar a folha de amostra na folha de modo que a superfície da folha seja perpendicular às sondas de detecção.
Ligue o fluorômetro PAM e inicie a gravação da curva. Esse valor é chamado de zero. Ligue a luz de medição e espere aproximadamente 30 segundos para que a curva responda.
Este valor foi chamado de F zero. Entregue um pulso saturado de 4.000 fótons micromolar por metro quadrado por segundo durante 0,8 segundos do PAM e obtenha o maior valor do pico na curva com maior intensidade de fluorescência. Este valor é chamado fm.Em seguida, use a fórmula para calcular o rendimento quântico máximo do sistema fotográfico dois no escuro.
Para medir comportamentos fotossintéticos em estado estável, após o registro de Fm irradie a amostra da folha com os 30 fótons micromolar por metro quadrado por segundo. Ao ligar o radiômetro espectral para monitorar a reflexão da folha. Espere pelo menos 20 minutos para que a reação fotossintética chegue a um estado estável.
Durante este período de reação, o pulso de saturação será fornecido em intervalos de um minuto. A intensidade florescente do estado estável é chamada Fs.O valor máximo de floresnce alcançado após 20 minutos de luz pulsada é chamado fm prime. Regisso-lo neste momento.
Para calcular a atividade da fotossíntese no estado estável calcule os rendimentos quânticos do sistema fotográfico dois que podem ser estimados irradiando com pulsos saturados sob luz actínica. Estime o fluxo de elétrons lineares do sistema fotográfico dois centro de reação. Em seguida, calcule a saciedação não fotoquímica e calcule o índice de reflectância fotoquímica de 531 e 570 nanômetros.
Depois de adquirir Fs e a reflexão da folha desligue a luz actínica e forneça um pulso saturado em intervalos de um minuto durante o relaxamento escuro. O valor máximo de floresnce induzido pelo pulso de saturação sob a escuridão é chamado fm duplo prime. E salve os dados primos duplos da Fm em dois e 10 minutos depois de desligar a luz actínica.
Para calcular os parâmetros da extinção não fotoquímica dos conectores de relaxamento, estime o qE com os dados primos duplos de adaptação escura de dois minutos. Calcule a saciedade dependente zanthoxylum, qZ, com a adaptação escura de 10 minutos Fm dados primos duplos. Então calcule o estado inibidor da foto.
Como próxima medição ligue a luz actínica a 60 fótons micromolar por metro quadrado por segundo e repita a mesma medição. Neste experimento representativo, foram comparadas plantas de arabidopsis selvagens e mutantes. A mudança no índice de reflectância fotoquímica, PRI, calculada a partir da reflexão da folha, foi plotada contra o fluxo de elétrons lineares dependentes da luz do sistema fotográfico dois, conforme estimado pelo fluorômetro PAM.
Neste experimento, a mudança no PRI foi negativamente correlacionada com o fluxo de elétrons lineares em plantas do tipo selvagem, mas não em plantas mutantes. qZ que representa o ciclo xanthophyll foi fracionado a partir do relaxamento escuro connectics de saciamento não fotoquímico e também foi plotado contra a mudança no PRI. Nesta análise, o qZ também foi fortemente correlacionado com a mudança no PRI para ambas as cepas de plantas, implicando que o PRI reflete o ciclo xanthophyll.
Para medição simultânea da mesma área da folha usando a mesma fonte ou intensidade de luz use a mesma fibra de detecção no dispositivo de fixação para posicionar a folha verticalmente. A espectroscopia de reflectância tem potencial para ser usada na análise de uma variedade de fenótipos, em plantas selvagens e mutantes para elucidar mecanismos moleculares vegetais.
