Nosso protocolo descreve um procedimento cirúrgico para remover a faixa aórtica ascendente em um modelo de rato de hipertensão pulmonar devido a doença cardíaca esquerda, que leva à reversão da hipertensão pulmonar. Esta técnica apresenta uma ferramenta valiosa para estudar mecanismos de remodelação fisiológica reversa na circulação pulmonar e no ventrículo direito. Pode ajudar no desenvolvimento de estratégias para o tratamento da hipertensão pulmonar.
Após a preparação dos instrumentos cirúrgicos, coloque um rato anestesiado em posição supina em uma mesa cirúrgica esterilizada. Em seguida, fixar o abdômen e os membros do animal com uma fita adesiva, e desinfetar a pele animal com solução povidone-iodo/iodophor. Note cicatrizes e suturas da primeira cirurgia de banda aórtica cirúrgica, ou AoB, cirurgia.
Depois de garantir a profundidade adequada da anestesia com beliscar o dedo do pé, remova as suturas da cirurgia aoB primária. Em seguida, realize uma traqueotomia fazendo uma incisão cervical cervical de 7 a 10 milímetros de comprimento com uma tesoura fina. Com a ajuda de um par de fórceps contundentes, disseca o tecido mole cervical para expor os músculos infraidóides.
Então, dividindo os músculos na linha média, visualize a traqueia. Quando terminar, faça uma incisão de traqueia de dois milímetros entre dois anéis cartilaginosos usando uma tesoura de mola noyes angular para inserir a cânula traqueal de diâmetro externo de dois milímetros na traqueia. Em seguida, segure a cânula com uma sutura de seda 4-0.
Conecte a outra extremidade da cânula traqueal a um ventilador mecânico, mantendo o mínimo de espaço morto. Mantenha a ventilação pulmonar perioperatória a uma taxa respiratória de 90 respirações por minuto a um volume de maré de 8,5 mililitros por quilograma de peso corporal. Para a debandada aórtica, faça uma incisão de pele de 20 milímetros entre a segunda e a terceira costelas usando uma tesoura fina.
Com a ajuda de uma tesoura cirúrgica menor, espalhe e corte os músculos camada por camada, seguido por fazer uma incisão lateral de 10 milímetros ao longo do espaço intercostal entre a segunda e a terceira costela. Use um espalhador de costela para expandir o espaço intercostal entre a segunda e a terceira costela, para criar uma janela cirúrgica. Com a ajuda de fórceps contundentes, separe o timo do coração e artérias de conduítes para visualizar a aorta com o clipe.
Segure o clipe com a ajuda dos fórceps, seguido da remoção do tecido conjuntivo ao redor do clipe para expor a aorta. Abra o clipe com um suporte de agulha e remova o clipe da cavidade torácica. Antes de fechar o tórax, abra a atelectasia pulmonar e garanta o recrutamento adequado do pulmão sem distensão com ventilação mecânica, com um volume de maré de 9,5 mililitros por quilograma de peso corporal por 10 minutos, e retorne a um volume de maré de 8,5 mililitros por quilograma de peso corporal.
Mais tarde, feche os músculos profundos por uma simples sutura interrompida usando seda 4-0, e conecte os músculos superiores com uma sutura contínua simples. Em seguida, feche a pele com uma sutura contínua simples. Desconecte a cânula traqueal da máquina de ventilação enquanto observa o rato para respirar espontâneo.
Se o animal não respirar espontaneamente após a desconexão, reconecte o ventilador e continue ventilando por mais cinco minutos antes de repetir o procedimento. Após a respiração espontânea ser restabelecida, remova a cânula da traqueia e limpe o líquido ao redor da traqueia com pontos de esponja. Feche a traqueia com uma sutura simples usando 6-0 Prolene, e feche os músculos infraidóides em uma simples sutura interrompida usando seda 4-0.
Conecte a pele em uma sutura contínua simples, seguida pela limpeza e desinfeturação dos músculos e da pele no processo com solução povidone-iodo/iodophor. Após completar o procedimento cirúrgico, mova um único animal para uma gaiola de recuperação com oxigênio suplementar e uma lâmpada infravermelha, e coloque a máscara de oxigênio perto do focinho do rato. No estudo, foi visualizada a posição do clipe na aorta ascendente nos animais aoB e sua ausência após a debandada, ou Deb, a cirurgia.
Além disso, o fluxo sanguíneo aórtico foi avaliado por imagens doppler de ondas pulsadas antes e depois do clipe em animais aoB antes da debandada e em segmentos aórticos correspondentes após a cirurgia de Deb. Os resultados mostraram atenuação acentuada do gradiente de fluxo sanguíneo em consonância com a debandada funcional. Na quinta semana, os ratos Deb expressaram peptídeo natriurético cerebral, ou BNP, em níveis comparáveis aos animais falsos, indicando a reversão do ventrículo esquerdo, ou LV, falha pela debandada aórtica.
A avaliação da função LV por ecocardiografia transtorácica revelou uma maior fração de ejeção de LV e volume de LV nos animais Deb em comparação com os ratos aoB. A cirurgia de desbandada realizada na terceira semana após o AoB resultou em uma redução significativa da pressão sistólica ventricular esquerda e hipertrofia lv em comparação com os animais aoB. Comparados aos ratos aoB na semana três e semana cinco, os animais Deb também apresentaram uma redução significativa na pressão sistólica ventricular direita e hipertrofia ventricular direita, demonstrando uma reversão bem sucedida da hipertensão pulmonar devido a doença cardíaca esquerda.
Os passos mais críticos neste procedimento são a remoção do clipe e o recrutamento do pulmão após a debandada aórtica. Essas etapas, quando corretamente realizadas, aumentam a sobrevivência animal.
