A Degeneração Macular Relacionada à Idade é considerada uma das principais causas de perda da visão central. A degeneração progressiva e disfunção da camada de EPR é uma característica da forma precoce da DMRI. Apesar dos avanços na terapia das doenças retinianas, o desenvolvimento de uma modalidade de tratamento eficaz permanece desafiador.
Um dos conceitos de tratamento mais promissores é a substituição do EPR por células de EPR cultivadas in vitro de diferentes origens. Os EPR foram geralmente entregues no espaço sub-retiniano na forma de uma suspensão celular, a folha celular autoportante ou uma monocamada celular suportada por um transportador artificial. A principal vantagem dos dois métodos tardios é que, após o implante, as células são encontradas em um estado de monocamada diferenciada no espaço sub-retiniano.
Estudos pré-clínicos em animais realizados in vivo visam estabelecer um procedimento cirúrgico reprodutível e seguro em um modelo animal de olho grande, a fim de obter dados que possam ser úteis e potencialmente aplicáveis em humanos. Com este protocolo, pretendemos relatar os princípios da técnica cirúrgica sub-retiniana utilizada para implante in vivo sub-retiniano de um carreador celular em modelo animal de grande porte que possa ser utilizado para estudos experimentais in vivo com implante de diferentes tipos de células e carreadores celulares. Com este vídeo, gostaríamos de apresentar um protocolo passo-a-passo do procedimento cirúrgico de implante sub-retiniano do portador de células nos olhos do miniporco Libekov.
Insira o espéculo da tampa. Abrir a conjuntiva do lado nasal a dois a três milímetros do limbo para expor a esclera para esclerotomias. Insira os três trocárteres de calibre 25 a três milímetros do limbo na área da pars plana.
Mantenha a córnea úmida ou cubra-a com metilcelulose durante toda a cirurgia para evitar o edema osmótico da córnea. Remova a porção média do corpo vítreo com a abordagem padrão de vitrectomia pars plana de três portas. Remova cuidadosamente o vítreo atrás da lente na área da futura esclerotomia grande.
Utilizar a injeção intravítrea de acetonido de triancinolona para coloração do vítreo posterior, que permanece geralmente aderente à retina, a fim de realizar um descolamento controlado do vítreo posterior. Em seguida, realizar lentamente uma injeção sub-retiniana de SBS com uma cânula de calibre 41 mais centralmente, evitando a formação da bolha em direção à periferia. Reduzir a pressão intraocular do sistema de irrigação até 15 milímetros de mercúrio durante a injeção sub-retiniana, a fim de evitar a oclusão vascular transitória da retina.
Realizar uma grande endodiatermia linear da retina com a sonda de endodiatermia de calibre 27 próximo à base da bolha nasal. Em seguida, faça uma retinotomia de três milímetros de largura usando uma lâmina MVR de calibre 25, ou tesoura vertical com ajuste de pressão intraocular elevada do sistema de irrigação até 60 milímetros de mercúrio por três a cinco minutos. Em seguida, faça uma esclerotomia de três milímetros de largura a três milímetros do limbo usando uma faca de faco de 2,75 milímetros.
Preste atenção à exodiatermia de possível sangramento dos vasos esclerais e corpo ciliar dentro da grande esclerotomia. Remova o corpo vítreo prolapsado no lado da grande esclerotomia com o vitretor. Em seguida, insira suavemente o injetor com uma mão dominante na cavidade vítrea através da grande esclerotomia.
Implantar o carreador celular através da retinotomia no espaço sub-retiniano. Retire o injetor do olho e feche a grande esclerotomia com um 8-0 Sutura de vicryl para evitar complicações associadas à hipotonia intraocular. Realizar uma troca fluido-ar completa com a cânula com ponta de silicone.
Depois disso, injete o óleo de silicone na cavidade vítrea até que a pressão intraocular esteja normal. Ao final da cirurgia, retirar os trocárteres e fechar as três esclerotomias e a conjuntiva com 8-0 Suturas de vicryl. Para mais detalhes, consulte a seção Procedimento cirúrgico.
Limpe a área periocular. Use a pinça e a tesoura para remover a pálpebra superior e inferior. Retire a terceira pálpebra.
Corte a conjuntiva. Corte os músculos oculares com uma tesoura. Proceder ao corte circularmente da superfície até à profundidade.
Corte o nervo óptico. Remova o olho da órbita. A clareza da cavidade vítrea preenchida com óleo de silicone permite visualizar a condição da retina com células sub-retinianas portadoras a qualquer momento do período pós-operatório.
As imagens sem vermelho mostram que a refletividade das células de EPR humanas cultivadas dentro da estrutura portadora de células não difere da refletividade da camada de EPR suína nativa. A imagem de OCT in vivo revela que o carreador celular implantado no espaço sub-retiniano não aumenta significativamente toda a espessura da retina. A membrana do Bruch parece permanecer intacta também.
O quadro da portadora de célula causa apenas um pequeno sombreamento do sinal da OCT. O estudo histológico de cortes criogênicos post-mortem da retina demonstra a formação da camada contínua e irregular de células pigmentadas na área do EPR humano primário implantado, o que comprova a sobrevivência do cultivado sobre as células carreadoras celulares. A análise imunoistoquímica do corte tecidual mostra as células humanas do EPR, que estão presentes na área da implantação, e expressam o marcador típico do EPR semelhante às células nativas do EPR do miniporco.
Apesar disso, as células de EPR implantadas não aparecem como uma monocamada celular. Ainda assim, essas células estão localizadas dentro do espaço sub-retiniano definido. Um modelo animal de olho grande de miniporcos, no caso, miniporcos Libekov, consideramos ser um dos modelos mais adequados para a futura aplicação de novos conceitos para o tratamento de doenças degenerativas da retina, devido à sua semelhança com a anatomia e fisiologia do olho humano.
Essas semelhanças permitem desenvolver as técnicas cirúrgicas e instrumentais para implante sub-retiniano de carreador celular, e esta técnica poderia ser facilmente transferida para o tratamento de doenças oculares humanas. É importante assegurar que as cirurgias em miniporcos sejam realizadas com a mesma instrumentação, incluindo ferramentas de entrega de implantes, que também seriam utilizadas em cirurgias humanas, tornando assim a aplicação da experiência e know-how adquiridos em humanos sem dificuldades. A descrição detalhada dos cuidados pré-operatórios e pós-operatórios pode ser útil para estudos futuros, aumentando a geração de dados de forma eficiente e padronizada.
