O principal objetivo deste estudo é utilizar modelo de camundongo de ligadura cecal e sepse induzida por punção para avaliar biomarcadores sanguíneos confiáveis de sepse. A ligadura e punção cecal, ou CLP em suma, é um modelo clinicamente relevante de sepse. A FLP é um modelo comumente usado na pesquisa de sepse.
A histona H3 citrulinada, ou CitH3, origina-se da NETose induzida por sepse. Nosso estudo anterior demonstra que o CitH3 é um biomarcador diagnóstico confiável de sepse. Selecione camundongos machos C57BL/6.
Pesar o rato e anestesiar o rato por inalação de 1,5%isoflurano. Fixe o mouse em uma almofada de aquecimento. Aplique creme depilatório no abdômen e deixe por não mais de um minuto antes de remover o creme e o cabelo.
Prepare instrumentos cirúrgicos estéreis adequados para cirurgia de animais roedores. Desinfete a pele abdominal com iodo pelo menos três vezes. Cubra a área cirúrgica operatória com a cortina cirúrgica estéril adequada.
Use tesouras cirúrgicas estéreis para fazer uma incisão de aproximadamente dois centímetros na parede abdominal, ao longo da linha alba. Identifique e isole o ceco para fora da cavidade peritoneal com pinças estéreis. Ligue 75 volume do ceco com sutura de seda 4-0.
Não ligue os vasos sanguíneos mesentéricos. A ser observado, diferentes porcentagens de ceco ligado determinam a gravidade da sepse. 25% leva a uma sepse de baixo grau, 50% leva à sepse de grau médio e 75% leva a uma sepse de alto grau.
Perfure o ceco por uma perfuração através de uma perfuração com uma agulha de calibre 21 no ponto médio entre a extremidade da cauda e a ligadura. Esprema suavemente as fezes para fora do ceco através de orifícios de penetração. A ser observado, a quantidade de fezes espremidas na cavidade peritoneal deve ser consistente, uma vez que as fezes também determinam a gravidade da sepse.
Substitua o ceco, bem como as fezes na cavidade abdominal suavemente. Feche a camada muscular abdominal e a camada de pele com sutura de seda 6-0. Desinfete a incisão com iodo.
A injeção de cetoprofeno, cinco miligramas por quilograma, deve ser realizada no quadrante inferior esquerdo do abdômen para evitar o ceco. Coloque o mouse em uma almofada de aquecimento até a recuperação completa. O rato está alojado numa sala com temperatura controlada e tem acesso gratuito a alimentos e água.
Os animais serão eutanasiados por overdose de dióxido de carbono com sintomas de sepse, relevantes para os nossos desfechos predefinidos com base em nosso estudo apresentado. Os ratos são divididos aleatoriamente no grupo simulado, grupo FLP e CLP mais Cl-amidina ou grupo de tratamento YW3-56. Camundongos no grupo simulado recebem todos os procedimentos de FLP, exceto ligadura e punção do ceco.
Colher sangue periférico 24 horas de pós-operatório e preparar o soro através de centrifugação. A concentração de CitH3 foi determinada por western blotting e um kit ELISA autodesenvolvido. Como mostrado na figura dois, nenhum CitH3 foi detectado no grupo simulado.
Os níveis de CitH3 foram elevados após a inserção da FLP, o que foi atenuado pela inibição da DAP significativamente. Com base em nossos dados, concluímos que a CitH3 circulante é um biomarcador diagnóstico confiável de sepse.
