É a primeira vez que a recaída induzida pelo estresse à heroína é mostrada após a abstinência imposta pela punição. Esses métodos poderiam nos ajudar a entender o mecanismo neuronal subjacente à recaída induzida pelo estresse em humanos após a abstinência voluntária. Usando a privação alimentar e punição imposta abstinência, estamos imitando mais de perto a condição humana e trazendo validade ecológica para modelos animais de recaída.
Comece definindo as câmaras de condicionamento operantes como descrito no manuscrito. Após a recuperação da cirurgia, habite o rato na câmara de treinamento operante por 24 horas antes de iniciar o protocolo sem anexar o rato à mola metálica. Coloque o rato alojado nas câmaras operísticas durante todo o experimento.
Em seguida, conecte o conector de 5up ao tubo Tygon e à mola metálica. Inicie a sessão de treinamento no início da fase escura do ciclo de luz invertido. Para a autoadministração da heroína, a alavanca de tomada deve estar disponível sob a razão fixa um, ou FR um.
Programe cada ensaio para começar com a inserção da alavanca de tomada e acendendo a luz da casa. Uma vez que o rato pressione a alavanca de tomada uma vez, retraia a alavanca de tomada, liga a luz da deixa acima da alavanca e tonifica para um período de intervalo de 20 segundos. Desligue a luz da casa e permita a entrega de 0,13 mililitros de infusão de heroína a uma dose de 0,1 miligrama por quilograma.
Em seguida, programe um intervalo de intertridação de 30 segundos no qual não são apresentadas pistas, a luz da casa é desligada e a alavanca é retraída. Para o próximo teste, insira a alavanca de tomada e ligue a luz da casa. Para a autoadministração com a cadeia de busca em fr um, programe o sistema de treinamento operante para inserir apenas a alavanca de busca e acender a luz da casa para sinalizar o início da sessão com a alavanca de tomada em um estado retraído.
Uma vez que o rato pressiona uma vez na alavanca de busca, o programa retrai a alavanca de busca e insere a alavanca de tomada. Uma prensa na alavanca de tomada retrai a alavanca de tomada e inicia o procedimento de ligar a luz do sinalização, e um intervalo de 30 segundos de intertrial, como demonstrado anteriormente. Após o intervalo intertrial, programe o sistema de treinamento operante para inserir a alavanca de busca e acender a luz da casa para sinalizar o início do próximo ensaio.
Em seguida, programe todas as etapas para a autoadministração com uma cadeia de busca sob a proporção fixa um, como demonstrado anteriormente com a introdução de um intervalo variável de cinco por três dias como o novo cronograma de reforço na alavanca de busca. Configure o software para permitir que a primeira prensa na alavanca de busca ative o intervalo variável de cinco horários. Permita que o software selecione aleatoriamente um intervalo de uma lista de 0,1, 5 e 10 segundos, resultando em um intervalo médio de cinco segundos.
Após o intervalo selecionado ter transcorrido, a primeira prensa de alavanca de busca retrai a alavanca de busca e estende a alavanca de tomada. Depois de seguir as etapas para a alavanca de tomada, e como o ensaio termina, treine o rato por cinco dias sob o intervalo variável 30 horário para o link de busca. Para isso, permita que o software selecione aleatoriamente um tempo de uma lista de 15, 30 e 45 segundos por uma média de 30 segundos.
Em seguida, treine ratos por três dias sob intervalo variável 60 horários, permitindo que o software selecione aleatoriamente um tempo de uma lista de 45, 60 e 75 segundos. Para abstinência imposta pela punição, realize sessões de punição por oito dias com supervisão regular para garantir que os ratos não apresentem sinais de dor anormal ou quaisquer problemas de saúde. Inicie as sessões de punição com a inserção da alavanca de busca e acendendo a luz da casa.
Programe o sistema de treinamento operante para que após completar o link de busca no intervalo variável 60, a alavanca de busca se retrai, a luz da casa é desligada, e um leve choque no pé é administrado ao rato em 30% dos links de busca completas em vez de inserção da alavanca de tomada. A alavanca de tomada se estende sobre os outros 70% dos links de busca concluídos como no julgamento regular de autoadministração. Depois de programar um intervalo intertrial de sete minutos, coloque a intensidade de choque do pé em 0,2 miliamperes, e aumente em 0,1 miliamperes por dia de punição até 1,0 miliamperes.
Uma vez que o rato pressione a alavanca de tomada, repita a razão fixa um passo para retração da alavanca, entrega de infusão de heroína e apresentação das pistas seguidas de intervalo intertrial de sete minutos. Após o último dia da abstinência imposta pela punição, remova os funis alimentares das câmaras para ratos que passam por um teste de recaída induzido pela privação alimentar, e mantenha os funis de alimentos para o grupo saciado. Proporcionar acesso ilimitado à água em ambos os grupos e supervisionar a saúde dos animais.
Após 24 horas de privação alimentar, prossiga para um teste de busca de heroína induzido por privação alimentar de três horas sob um intervalo variável de 60 horários com um intervalo intertrial de sete minutos sem choque ou infusões de heroína sendo entregues. Após a sessão, devolva os alimentos aos ratos privados de comida. No dia seguinte, remova os funis de comida das câmaras dos ratos que foram saciados no primeiro teste de recaída.
Permita aos ratos anteriormente privados de alimentos acesso ilimitado aos alimentos antes e durante o teste. Após 24 horas de privação alimentar, realize três horas de teste de busca de heroína, como demonstrado anteriormente. No estudo, os ratos machos demonstraram um aumento nas prensas de alavanca de busca à medida que o cronograma de reforço aumentava.
Um número confiável e consistente de infusões de heroína foi observado durante os dias de treinamento. Durante a punição, os ratos diminuíram o número de pressões e infusões de alavancas de busca com o aumento da intensidade de choque do pé ao longo de oito dias de punição. No teste de busca de heroína, a condição de privação de alimentos aumentou significativamente a busca de heroína após a abstinência imposta pela punição, e nenhum efeito estatisticamente significativo foi observado para o tempo nem para a busca de drogas ao longo do tempo em condições de alimentação É importante ter tempo para treinar os animais para aprender na busca básica e tomar cadeia sob a FR um.
Sem esse passo, os animais não serão capazes de avançar nos experimentos. Depois de implementar o modelo, agora podemos projetar experimentos que analisam a neurobiologia da recaída induzida pelo estresse após abstinência voluntária.
