Os protocolos anteriores para modelos de diálise peritoneal em camundongos sofrem de limitações que impedem seu uso a longo prazo. Essas limitações, como enrolamento e deslocamento do cateter, são abordadas neste estudo. Essa técnica evita o mau funcionamento do cateter de DP por razões mecânicas, permitindo seu uso por mais tempo para estudar patologias, como a fibrose peritoneal.
Esta técnica fornecerá um melhor modelo de camundongo para investigar a patogênese molecular e novas terapêuticas da fibrose peritoneal. Uma limitação chave da DP em humanos. A DP é a base da terapia renal substitutiva em pacientes pediátricos com DRCT.
Este modelo otimizado fornecerá um melhor banco de testes para investigar todos os problemas com a DP em humanos. A geração de um modelo animal tem uma curva de aprendizado. Este vídeo passo-a-passo ajudará um indivíduo a implementar esta técnica para gerar um modelo durável para diálise peritoneal com sucesso.
Para começar, coloque o rato C57 preto/6J de oito a 12 semanas de idade totalmente anestesiado em posição lateral esquerda. Depois de raspar o rato, conforme especificado no manuscrito, desinfete a área cirúrgica expondo o flanco direito do rato à manta de aquecimento. Em seguida, coloque a cortina cirúrgica estéril sobre o rato.
Atribua o bolso da porta de acesso um centímetro acima da cauda do mouse. Segure o segmento de instalação com o indicador não dominante e o polegar sobre a área atribuída perto da cauda. Coloque o cateter acima da pele e estime o local para a inserção do tubo do cateter dentro da cavidade abdominal.
Em seguida, marque o local designado para a inserção do tubo, respeitando a flexão mínima do tubo perto da linha média anterior. Faça um furo lateral sobre a estrutura da seção do reservatório com o pichador auricular do mouse. Faça uma incisão horizontal de um centímetro de largura da pele um centímetro acima da cauda.
Em seguida, disseque sem rodeios o plano subcutâneo da camada muscular subjacente para fazer uma bolsa para a colocação do cateter para garantir que a porta de instalação resida livremente na bolsa da porta ideal. Passado o 3-0 sutura do orifício lateral personalizado. Fixe a porta de acesso ao leito muscular apertando a sutura passada, mantendo o curso da tubulação cefálico.
Faça uma incisão de um centímetro sobre a área formalmente marcada perto da linha média. Coloque uma sutura de corda de bolsa solta com sutura absorvível redonda 4-0 ao redor do músculo da parede abdominal incisada. Faça uma incisão de um centímetro sobre a camada muscular próxima à linha média direita e passe a sensação proximal do cateter dentro da incisão.
Passe o tubo do cateter através do trato preparado. Aperte a sutura da corda da bolsa preparada ao redor do tubo, mantendo o segundo sentido fora da corda da bolsa sobre a camada muscular, e feche a pele com suturas absorvíveis 3-0. Certifique-se de que o cateter colocado esteja funcional.
Verifique a função com uma seringa de um mililitro conectada à agulha Huber específica para a porta. Injete soro fisiológico normal na porta de instalação. Depois de confirmar um fluxo suave com tolerância zero à resistência, feche as incisões cutâneas ao redor do reservatório do porto com suturas absorvíveis 3-0.
Entre na porta com a agulha Huber e injete 100 microlitros de solução salina normal na porta para confirmar o curso da patente. Em seguida, injete 200 microlitros de lipopolissacarídeo, seguidos por 100 microlitros de solução salina para irrigação de tubos e certifique-se de que não haja resistência. Após sete dias de injeções de LPS e duas semanas de implantação do cateter, planeje a biópsia peritoneal.
Depois de confirmar a anestesia bem-sucedida, faça uma incisão na pele da linha média da bexiga ao subxifóide. Em seguida, perfunda o plano subfascial com PBS frio. Certifique-se de que o plano está completamente dissecado sem perturbar a integridade do peritônio.
A análise dos cortes corados com hematoxilina e eosina mostrou um aumento substancial da matriz extracelular, ou MEC, no espaço subperitoneal. A ECM média no espaço subperitoneal dos camundongos controle foi metade da dos camundongos expostos ao LPS. A coloração tricrômica de Masson detecta fibrose, medida à medida que a densidade de intensidade normalizada para a área de superfície.
A vascularidade alterada e o alargamento do espaço subperitoneal foram analisados usando o marcador de células endoteliais CD31 e medidos como densidade integrada em imagens de campo de alta potência selecionadas aleatoriamente. Em comparação com o controle, camundongos induzidos por LPS mostraram um aumento de três vezes na fibrose subperitoneal, aproximadamente oito a nove vezes de aumento na vascularidade e um aumento de duas vezes no espaço subperitoneal, marcado como SP, foram observados. Coloque o cateter acima da pele e marque o ponto para a inserção do cateter, evitando a flexão do tubo.
A inserção deve estar perto da linha média interior. Fornecer o método de colocação de cateter de DP murino mais durável permitirá que os pesquisadores projetem e executem experimentos de longo prazo para sondar e direcionar a falha da membrana peritoneal.
