Cultura não fracionada em massa de músculo esquelético de camundongo para recapitular nicho e quiescência de células-tronco

Nossa pesquisa envolve o estudo do músculo esquelético saudável e doente, com especial ênfase nas células satélites. Um dos aspectos fundamentais que estamos explorando é a identificação de intensificadores transcricionais que coordenam a expressão gênica celular específica. Esse protocolo permite a realização de testes rápidos para determinação da especificidade.

No campo da pesquisa do músculo esquelético, abordagens de sequenciamento de RNA de célula única e núcleo único são frequentemente usadas para estudar diferentes populações de células na homeostase, regeneração e doença. Além disso, as células satélites podem ser isoladas por classificação celular ativada por fluorescência, ou FACS, e cultivadas para testes de hipóteses e validação de resultados de sequenciamento. O estudo in vitro de células satélites representa um desafio significativo.

Estudos recentes destacaram o papel do nicho de células satélites em sua fisiologia. Embora seja comum cultivar células satélites isoladas de FACS, a replicação do nicho de células satélites in vitro ainda não foi alcançada. Nosso protocolo fornece uma maneira eficiente e prática de cultivar todo o tecido muscular, incluindo células não miogênicas, como células endoteliais e progenitores fibroedoprogenéticos.

Mostramos que células quiescentes aparecem dentro de uma semana após a cultura. Esse protocolo também poderia ser usado para estudar a influência que outras células têm no restabelecimento desse pool quiescente.