Somos gratos ao Wadsworth Center do Departamento de Saúde do Estado de Nova York por apoiar este projeto.

O seguinte protocolo foi aprovado para o uso ético de amostras humanas pelo New York State Department of Health Wadsworth Center para desenvolvimento de ensaios, número de aprovação do protocolo #03-019.
1. Segurança
<ol><li>Use equipamentos de proteção individual (EPIs), no mínimo proteção ocular (óculos ou face shield), máscara cirúrgica e luvas sem látex.</li>
	<li>Certifique-se de que o pessoal está vacinado contra a raiva e que um título de ≥0,5 UI/mL foi demonstrado nos últimos 6 meses.</li>
</ol>2. Preparação da lâmina de antígeno
NOTA: Execute todas as manipulações de vírus, LCR e soro em um gabinete de biossegurança (BSC) usando precauções universais.
<ol><li>Preparar 20 mL de neuroblastoma de camundongo ou células BHK-21 para uma concentração de 3,0 x 105 células/mL em meio essencial mínimo de Eagle suplementado com 10% de soro fetal bovino (EGM) e manter frio até o uso.</li>
	<li>Preparar o vírus CVS-11 diluindo em EGM para uma diluição de trabalho de 1,0 x 106,5 50% dose infecciosa de cultura de tecido (TCID50) por mililitro e manter frio até estar pronto para uso. NOTA: TCID50 é determinado pelo método de Reed e Muench publicado anteriormente5.</li>
	<li>Limpe uma câmara de lâmina de umidade e lâminas de microscópio revestidas de politetrafluoretileno (PTFE) com etanol 70% e deixe secar ao ar no BSC.</li>
	<li>Adicione água destilada (dH2O) a tiras de papel absorvente na câmara deslizante para garantir que a umidade permaneça constante durante todo o procedimento.</li>
	<li>Usando um lápis, rotule cada slide a ser usado com o número do lote, data, tipo de célula e quaisquer outras informações de identificação necessárias para o armazenamento e coloque na câmara do slide. NOTA: A maioria dos marcadores, canetas ou etiquetas não resistirá à futura etapa de fixação da acetona (passo 2.9).</li>
	<li>Aplicar 50 μL de diluição viral em cada poço nas lâminas do microscópio com uma pipeta de repetição. Em seguida, aplique 50 μL de diluição celular em cada poço, tomando cuidado para não contaminar a ponta da pipeta com o vírus já no poço.</li>
	<li>Feche a câmara deslizante de umidade e coloque-a na incubadora úmida a 34-36 °C. Avaliar a infectividade celular após 24 h. Observação : execute as etapas 2.8-2.12 em apenas um slide.</li>
	<li>Retire a lâmina da câmara de umidade e aspirar cuidadosamente o sobrenadante. Lave a lâmina em um frasco de Coplin preenchido com solução salina tamponada com fosfato (PBS) por 2 minutos e, em seguida, deixe a lâmina secar ao ar.</li>
	<li>Coloque a lâmina no frasco Coplin e fixe a lâmina em acetona fria por um mínimo de 1 h em um freezer de -20 °C aprovado para materiais inflamáveis. Execute todos os procedimentos de derramamento de acetona e secagem ao ar em uma capela de fumaça.</li>
	<li>Deixe a acetona piscar e deslize para secar. Aplicar o conjugado de anticorpos fluorescentes diretos (IFD) contra a raiva preparado de acordo com as instruções do fabricante nos poços da lâmina e incubar por 30 min em uma incubadora úmida de 34-36 °C.</li>
	<li>Lave a lâmina em frascos Coplin de PBS duas vezes por 2 min cada. Seque o escorregador ao ar.</li>
	<li>Monte uma lamínula com Tris 0,05 M, NaCl 0,15 M (pH 9,0) e suporte de glicerol a 20% e leia a lâmina usando um microscópio fluorescente em aumento de 200x para avaliar a infectividade. Se as células não estiverem aproximadamente 50% infectadas, repita os passos 2.7-2.12 no dia seguinte até que a infectividade desejada seja atingida. NOTA: A infectividade celular é aproximada com base na avaliação visual da proporção de células negativas para células positivas para raiva no poço da lâmina. As células negativas aparecem na cor vermelha, enquanto as células positivas mostram coloração fluorescente verde.</li>
	<li>Remova as lâminas restantes da incubadora e da câmara de umidade. Aspirar cuidadosamente o sobrenadante de cada poço e, em seguida, colocar as lâminas em um frasco Coplin com PBS por 1-2 min. Seque as lâminas ao ar por aproximadamente 30 min. Conservar as lâminas a -80 °C até estarem prontas a utilizar.</li>
</ol>3. Preparo da amostra
<ol><li>Preparar diluições de amostras de soro ou LCR do paciente para teste. Preparar o conjugado necessário para uma concentração de trabalho adequada diluída em PBS com 0,05% de azul de Evans. NOTA: Mantenha o conjugado no escuro para manter a integridade do fluoróforo antes da aplicação</li>
</ol>4. Procedimento IFA
<ol><li>Remova o número necessário de lâminas de antígeno preparadas necessárias para cada ensaio e deixe as lâminas descongelarem e secarem completamente.</li>
	<li>Coloque as lâminas em um (s) frascos Coplin e fixe as lâminas em acetona fria por entre 2 h a pernoite em um freezer de -20 °C aprovado para materiais inflamáveis. Retire as lâminas da acetona e deixe secar ao ar.</li>
	<li>Coloque as lâminas em uma caixa de câmara de umidade dentro do BSC com tiras absorventes embebidas em dH2O para manter a umidade. Aplicar 50 μL de cada diluição da amostra, amostra de controle ou PBS no poço pré-determinado. NOTA: Cada lâmina deve conter um número apropriado de poços de amostra do paciente, controle positivo, controle negativo e poço de controle celular PBS.</li>
	<li>Coloque a câmara deslizante de umidade fechada em uma incubadora úmida de 37 °C, 5% CO2 . Incube as lâminas por 30 min, retire a câmara de deslizamento de umidade da incubadora e coloque-a em um BSC.</li>
	<li>Use uma ponta aspiradora para aspirar cuidadosamente o sobrenadante de cada poço, garantindo que não perturbe a monocamada celular. Use uma pipeta conta-gotas estéril para aplicar uma gota de PBS em cada poço.</li>
	<li>Repita a aspiração cuidadosa, em seguida, coloque cada lâmina em um frasco Coplin cheio de PBS e lave duas vezes por um total de 15 min.</li>
	<li>Coloque as lâminas de volta na caixa da câmara de umidade e aplique 50 μL de conjugado de anticorpos anti-humanos apropriados em cada poço. Repita as etapas 4.4 a 4.6.</li>
	<li>Deixe as lâminas secarem ao ar, monte uma tampa com mídia de montagem e leia as lâminas sob microscópio fluorescente.</li>
</ol>5. Análise de slides
<ol><li>Amostras de grau com base no padrão de coloração e intensidade de fluorescência em comparação com amostras de controle positivas com alto título de anticorpos antirrábicos confirmado.</li>
	<li>Classificar as amostras em uma escala negativa, 1+, 2+, 3+ e 4+, com um resultado negativo mostrando ausência de coloração fluorescente e 4+ representando uma fluorescência de cor verde brilhante da maçã com um padrão de coloração semelhante às amostras controle positivas1. NOTA: A cor verde da maçã aplica-se apenas aos anticorpos marcados com FITC; A cor varia dependendo da seleção de fluoróforos.</li>
	<li>Atribua às amostras um valor de ponto final representado pelo fator de diluição no qual a amostra exibe uma classe 1-2+. Ensaiar as amostras com um factor de diluição mais elevado se o ponto final não for atingido no ensaio inicial.</li>
</ol>

Detecção rápida e precoce de anticorpos antirrábicos para avaliar a resposta imune em um paciente

<ol>
	<li>Rupprecht, C. E., Fooks, A. R., Abela-Ridder, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Laboratory+Techniques+in+Rabies.+Volume+1.">Laboratory Techniques in Rabies. Volume 1.</a> World Health Organization. , 232-245 (2018).</li><li>Moore, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Challenges+of+rabies+serology:+defining+context+of+interpretation.">Challenges of rabies serology: defining context of interpretation.</a> Viruses. 13 (8), 1516 (2021).</li><li>Zajac, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+and+evaluation+of+a+rabies+enzyme-linked+immunosorbent+assay+(ELISA)+targeting+IgM+and+IgG+in+human+sera.">Development and evaluation of a rabies enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) targeting IgM and IgG in human sera.</a> Viruses. , 40-49 (2019).</li><li>Mills, D. J., Lau, C. L., Mills, C., Furuya-Kanamori, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term+persistence+of+antibodies+and+boostability+after+rabies+intradermal+pre-exposure+prophylaxis.">Long-term persistence of antibodies and boostability after rabies intradermal pre-exposure prophylaxis.</a> Journal of Travel Medicine. 29 (2), (2022).</li><li>Ramakrishnan, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Determination+of+50%+endpoint+titer+using+a+simple+formula.">Determination of 50% endpoint titer using a simple formula.</a> World Journal of Virology. 5 (2), 85-86 (2016).</li><li>Rudd, R. J., Appler, K. A., Wong, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Presence+of+cross-reactions+with+other+viral+encephalitides+in+the+indirect+fluorescent-antibody+test+for+diagnosis+of+rabies.">Presence of cross-reactions with other viral encephalitides in the indirect fluorescent-antibody test for diagnosis of rabies.</a> Journal of Clinical Microbiology. 51 (12), 4079-4082 (2013).</li><li>Fooks, A. R., Jackson, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Rabies: scientific basis of the disease and its management. , (2020).</li><li>Paldanius, M., Bloigu, A., Leinonen, M., Saikku, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measurement+of+Chlamydia+pneumoniae-specific+immunoglobulin+A+(IgA)+antibodies+by+the+microimmunofluorescence+(MIF)+method:+comparison+of+seven+fluorescein-labeled+anti-human+IgA+conjugates+in+an+in-house+MIF+test+using+one+commercial+MIF+and+one+enzyme+immunoassay+kit.">Measurement of Chlamydia pneumoniae-specific immunoglobulin A (IgA) antibodies by the microimmunofluorescence (MIF) method: comparison of seven fluorescein-labeled anti-human IgA conjugates in an in-house MIF test using one commercial MIF and one enzyme immunoassay kit.</a> Clinical and Diagnostic Laboratory Immunology. 10 (1), 8-12 (2003).</li><li>Rodriguez, M. C., Fontana, D., Garay, E., Prieto, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detection+and+quantification+of+anti-rabies+glycoprotein+antibodies:+current+state+and+perspectives.">Detection and quantification of anti-rabies glycoprotein antibodies: current state and perspectives.</a> Applied Microbiology and Biotechnology. 105 (18), 6547-6557 (2021).</li><li>Katz, I. S. S., Guedes, F., Fernandes, E. R., Dos Ramos Silva, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunological+aspects+of+rabies:+a+literature+review.">Immunological aspects of rabies: a literature review.</a> Archives of Virology. 162 (1), 3251-3268 (2017).</li><li>Moore, S. M., Hanlon, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rabies-specific+antibodies:+measuring+surrogates+of+protection+against+a+fatal+disease.">Rabies-specific antibodies: measuring surrogates of protection against a fatal disease.</a> PLoS Neglected Tropical Diseases. 4 (3), 595 (2010).</li></ol>

Os autores não têm nada a revelar.

O teste de IFA aproveita um complexo antígeno-anticorpo, permitindo um local de marcação para visualizar anticorpos específicos da raiva. Células de neuroblastoma ou BHK são semeadas em lâminas de microscópio revestidas com PTFE multipoço e inoculadas com a cepa CVS-11 de laboratório do vírus da raiva. Uma vez confluente a monocamada e atingida a infectividade desejada de aproximadamente 50%, as lâminas são armazenadas até ficarem prontas para uso6.
O soro...

O teste de anticorpos fluorescentes indiretos (RIFI) antirrábicos é usado para detectar vários isotipos de anticorpos específicos da raiva no soro ou no líquido cefalorraquidiano. É um dos muitos testes disponíveis para o acompanhamento de um paciente antirrábico antemortem. É especialmente útil para a detecção precoce de anticorpos para avaliar a resposta imune de um paciente à infecção por raiva. Quando usado em conjunto com outros testes, história do caso e status de vacinação do paciente, o teste de IFA pode ajudar a determinar a exposição ao vírus da raiva ou a uma vacina1. Como o teste de RIFI mede IgM e/ou IgG, os valores do anticorpo específico podem indicar um período de tempo aproximado da exposição ao antígeno1. Esse teste pode ser útil nos aplicativos listados ou em outros ainda não explorados.
Existem vários ensaios sorológicos para raiva disponíveis. O teste rápido de inibição de foco fluorescente (RFFIT), o teste de neutralização do vírus de imunofluorescência (FAVN) ou modificações destes são os principais métodos para medir anticorpos neutralizantes contra o vírus da raiva (RNVR)1. No entanto, esses testes não diferenciam anticorpos IgM e IgG. Quando diferenciar o isotipo de anticorpos é importante no monitoramento da resposta imune da raiva, os testes de IFA antirrábica e ELISA (enzyme-linked immunosorbent assay) da raiva são usados, mas não medem RVNAs. Embora os testes de RIFI e ELISA possam ser usados para determinar a presença de anticorpos específicos contra a raiva em uma amostra, existem algumas diferenças na forma como são executados. O teste de IFA utiliza um vírus vivo cultivado em células como substrato antigênico, enquanto um ELISA típico para detecção de raiva utiliza uma ou mais proteínas virais. Em um ambiente de laboratório onde o vírus da raiva pode ser cultivado, o teste de IFA pode ser mais facilmente realizado em vez de comprar ou cultivar proteínas virais individuais para o ELISA. A finalidade do teste e as informações obtidas a partir dos resultados de qualquer ensaio sorológico antirrábico devem ser consideradas ao determinar qual escolher2.
A IgM é a primeira a responder, aumentando até que a mudança de classe seja observada por volta do 28º dia, quando a IgG se torna o anticorpo circulante predominante3. Assim, a IgM só seria esperada por um período limitado de tempo após a exposição ao vírus da raiva ou à vacinação. O teste do soro e do líquido cefalorraquidiano (LCR) pode indicar se a exposição foi por meio de vacinação, na qual os anticorpos seriam vistos apenas no soro, ou de uma infecção viral, que potencialmente mostraria anticorpos no LCR1.
Foi estabelecido que os anticorpos antirrábicos persistem por vários anos após a profilaxia pré-exposição (PrEP)4. O teste de IFA pode ser uma ferramenta útil para demonstrar isso em diferentes momentos após a vacinação ou exposição.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>25x55mm glass cover slips</td>
			<td>Any</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acetone</td>
			<td>Any</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-Human IgG Labeled Conjugate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>F9512</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-Human IgM Labeled Conjugate</td>
			<td>SeraCare</td>
			<td>5230-0286</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Aspirating pipette tip</td>
			<td>Any</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BHK-21 Cells</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>CCL-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BION IFA Diluent</td>
			<td>MBL BION</td>
			<td>DIL-9993</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell Culture water</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>W3500</td>
			<td>EGM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Coplin Jars</td>
			<td>Any</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum&#160;</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>F2442</td>
			<td>EGM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluorescent microscope with FITC filter</td>
			<td>Any</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glycerol</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>G7893</td>
			<td>Mountant</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gullsorb IgM inactivation reagent</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>23-043-158</td>
			<td>IgG Inactivation Reagent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Glutamine</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>G-7513</td>
			<td>EGM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Minimum Essential Media Eagle &#8211; w/Earle&#8217;s salts, L-glutamine, and non-essential amino acids, w/o sodium bicarbonate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>M0643</td>
			<td>EGM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse Neuroblastoma Cells</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>CCL-131</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Multi-well Teflon coating glass slides</td>
			<td>Any</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS</td>
			<td>Any</td>
			<td></td>
			<td>pH 7.6&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P-3032</td>
			<td>EGM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rabies Direct Fluorescent Antibody Conjugate</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>5100, 5500 or 6500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium bicarbonate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S-5761</td>
			<td>EGM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Chloride crystals</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S5886</td>
			<td>Mountant</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile dropper</td>
			<td>Any</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Streptomycin sulfate salt</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S9137</td>
			<td>EGM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trizma pre-set crystals pH 9.0</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S9693</td>
			<td>Mountant</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tryptose Phosphate Broth</td>
			<td>BD</td>
			<td>260300</td>
			<td>EGM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vitamin mix</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>M6895</td>
			<td>EGM</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

detection of rabies igg and igm antibodies using the rabies indirect fluorescent antibody test

O teste de imunofluorescência indireta (RIFI) antirrábica foi desenvolvido para detectar vários isotipos de anticorpos específicos contra a raiva no soro ou no líquido cefalorraquidiano. Este teste fornece resultados rápidos e pode ser usado para detectar anticorpos antirrábicos em vários cenários diferentes. O teste de IFA antirrábica é especialmente útil para a detecção rápida e precoce de anticorpos para avaliar a resposta imune em um paciente que desenvolveu raiva. Embora outros métodos para o diagnóstico antemortem da raiva tenham precedência, este teste pode ser utilizado para demonstrar a exposição recente ao vírus rábico através da detecção de anticorpos. O teste de IFA não fornece um título de anticorpos neutralizantes do vírus (VNA), mas a resposta de profilaxia pré-exposição (PrEP) pode ser avaliada através da presença de anticorpos positivos ou negativos. Este teste pode ser utilizado em várias situações e pode fornecer resultados para vários alvos diferentes. Neste estudo, usamos várias amostras de soro pareadas de indivíduos que receberam PrEP e demonstramos sua presença de anticorpos antirrábicos ao longo do tempo usando o teste de RIFI.

The rabies indirect fluorescent antibody (IFA) test is used to detect various rabies-specific antibody isotypes in sera or cerebral spinal fluid. It is one of an arsenal of tests available for monitoring an antemortem rabies patient. It is especially useful for the early detection of antibodies to evaluate a patient's immune response to rabies infection. When used in conjunction with other tests, case history, and the patient's vaccination status, the IFA test can assist in determining exposure to rabies virus or a vaccine1. As the IFA test measures IgM and/or IgG, the values of the specific antibody can indicate an approximate time frame from exposure to the antigen1. This test may be useful in the listed applications or others not yet explored.
There are several rabies serological assays available. The rapid fluorescent focus inhibition test (RFFIT), fluorescent antibody virus neutralization (FAVN) test, or modifications of these are the primary methods for measuring rabies virus neutralizing antibodies (RVNAs)1. However, these tests do not differentiate IgM and IgG antibodies. When differentiating antibody isotype is important in monitoring the rabies immune response, the rabies IFA and the rabies enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) tests are used, but they do not measure RVNAs. Although the IFA and ELISA tests can be used to determine the presence of rabies-specific antibodies in a sample, there are some differences in how they are executed. The IFA test utilizes a cell-cultured live virus as its antigen substrate, whereas a typical ELISA for rabies detection uses one or more of the viral proteins. In a laboratory setting where the rabies virus can be cultured, the IFA test may be more easily performed instead of purchasing or cultivating individual viral proteins for the ELISA. The purpose of testing and the information garnered from the results of any rabies serological assay should be considered when determining which to choose2.
IgM is the first to respond, increasing until class switching is observed at around day 28, at which point IgG becomes the predominant circulating antibody3. Hence, IgM would only be expected for a limited amount of time following exposure to rabies virus or vaccination. Testing both serum and cerebrospinal fluid (CSF) can indicate if the exposure was through vaccination, in which antibodies would be seen only in sera, or from a viral infection, which would potentially show antibodies in CSF1.
It has been established that rabies antibodies persist for several years following pre-exposure prophylaxis (PrEP)4. The IFA test can be a useful tool to demonstrate this at different time points following vaccination or exposure.

Autor em destaque: Detecção de isotipos de anticorpos específicos para raiva em soros ou líquido cefalorraquidiano usando um teste IFA 

Detecção de anticorpos IgG e IgM antirrábicos pelo teste de imunofluorescência indireta da raiva

Todas as amostras de soro foram coletadas dos pacientes aproximadamente nos mesmos períodos de tempo após a PrEP. As amostras foram testadas de cinco pacientes diferentes nos seguintes momentos: 2 semanas após a inoculação final da vacina antirrábica, 6 meses após a série de vacinas antirrábicas e 18 meses após a série de vacinas antirrábicas. Cada amostra de soro foi diluída em série e graduada para presença de IgM e IgG, conforme descrito nas etapas 5.2 e 5.3 do protocolo. O valor de anticorpos atribuíd...

Watch this Scientific Journal Video about Rabies-Specific Antibody Isotypes Detection in Sera or Cerebral Spinal Fluid Using an IFA Test at JoVE.com

O objetivo deste artigo é examinar o uso do teste de imunofluorescência indireta da raiva para a detecção de anticorpos IgG e IgM específicos para raiva.

The rabies indirect fluorescent antibody (IFA) test was developed to detect various rabies-specific antibody isotypes in sera or cerebral spinal fluid. ...

O teste de RIFI avalia a resposta de anticorpos durante a infecção por raiva ou avalia a resposta imune das vacinas. Ele pode ser usado para estabelecer a presença de anticorpos em uma amostra e distinguir quais isotipos de anticorpos estão presentes. Os ensaios de anticorpos neutralizantes são o padrão-ouro para a detecção de anticorpos antirrábicos para avaliar o título de anticorpos em uma pessoa que recebeu profilaxia pré ou pós-exposição.Embora um teste de IFA possa produzir resultados diferentes de um ensaio de anticorpos neutralizantes, ele ainda pode fornecer informações valiosas quando usado como alternativa. Normalmente, ensaios que medem anticorpos neutralizantes da raiva avaliam a resposta imune. No entanto, esses testes levam vários dias, exigindo cultura de vírus e células vivas.O teste de IFA permite a preparação avançada de lâminas de antígeno para teste com resultados em poucas horas em comparação com dias. O uso dos testes de IFA em casos de raiva humana pode levar a mais respostas sobre como o sistema imunológico de um indivíduo responde à infecção por raiva. Há grande variação entre os casos, e esse exame pode fornecer resultados em tempo real durante a doença.

detection-rabies-igg-igm-antibodies-using-rabies-indirect-fluorescent

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Detection of Rabies IgG and IgM Antibodies Using the Rabies Indirect Fluorescent Antibody Test

1.4K visualizações.  New York State Department of Health. O teste de RIFI avalia a resposta de anticorpos durante a infecção por raiva ou avalia a resposta imune das vacinas. Ele pode ser usado para estabelecer a presença de anticorpos em uma amostra e distinguir quais isotipos de anticorpos estão presentes. Os ensaios de anticorpos neutralizantes são o padrão-ouro para a detecção de anticorpos antirrábicos para avaliar o título de anticorpos em uma pessoa que recebeu profilaxia pré ou pós-exposição.Embora um teste de IFA possa ...

Vídeo: Autor em destaque: Detecção de isotipos de anticorpos específicos para raiva em soros ou líquido cefalorraquidiano usando um teste IFA 

The rabies indirect fluorescent antibody (IFA) test was developed to detect various rabies-specific antibody isotypes in sera or cerebral spinal fluid. This test provides rapid results and can be used to detect rabies antibodies in several different scenarios. The rabies IFA test is especially useful for the quick and early detection of antibodies to evaluate the immune response in a patient who has developed rabies. Although other methods for antemortem rabies diagnosis take precedence, this test may be utilized to demonstrate recent rabies virus exposure through antibody detection. The IFA test does not provide a virus-neutralizing antibody (VNA) titer, but the pre-exposure prophylaxis (PrEP) response can be evaluated through positive or negative antibody presence. This test can be utilized in various situations and can provide results for a number of different targets. In this study, we used several paired serum samples from individuals who received PrEP and demonstrated their rabies antibody presence over time using the IFA test.

The aim of this manuscript is to examine the use of the rabies indirect fluorescent antibody test for the detection of rabies-specific IgG and IgM antibodies.