Imagem de cálcio vivo de monocamadas organoides intestinais humanas infectadas por vírus usando indicadores de cálcio codificados geneticamente

Através do nosso trabalho, pretendemos entender como os vírus interrompem a sinalização dentro do epitélio intestinal. Estamos particularmente interessados em entender as maneiras pelas quais as células infectadas por vírus desregulam as células vizinhas não infectadas para contribuir para a patogênese. Descobrimos recentemente que as células infectadas por rotavírus liberam pulsos de ADP, que desregula as células vizinhas não infectadas e facilita a disseminação viral e agrava a doença.

Embora a imagem do cálcio seja muito popular em campos como a neurociência, ela não tem sido amplamente usada para estudar a biologia epitelial ou virologia. Este protocolo oferece uma abordagem para adaptar tecnologias existentes e sistemas modelo para estudar a sinalização de cálcio e tecido epitelial vivo infectado por vírus. Através da engenharia de organoides para expressar indicadores de cálcio codificados geneticamente, nossa abordagem permite uma imagem consistente e reprodutível a longo prazo em um sistema modelo que recapitula a diversidade celular do epitélio intestinal humano.

Nosso objetivo é entender os efeitos da sinalização purinérgica parácrina induzida por vírus tanto para o hospedeiro quanto para o vírus. Nosso trabalho futuro também determinará se esse tipo de sinalização é amplamente conservado em outros vírus e se os efeitos são semelhantes.