Imaging del calcio vivo di monostrati di organoidi intestinali umani infettati da virus utilizzando indicatori di calcio geneticamente codificati

Attraverso il nostro lavoro, miriamo a capire come i virus interrompono la segnalazione all'interno dell'epitelio intestinale. Siamo particolarmente interessati a comprendere i modi in cui le cellule infettate da virus disregolano le cellule non infette vicine per contribuire alla patogenesi. Recentemente abbiamo scoperto che le cellule infettate da rotavirus rilasciano impulsi di ADP, che disregola le cellule non infette vicine e facilita la diffusione virale ed esacerba la malattia.

Sebbene l'imaging del calcio sia molto popolare in campi come le neuroscienze, non è stato ampiamente utilizzato per studiare la biologia epiteliale o la virologia. Questo protocollo offre un approccio per adattare le tecnologie esistenti e i sistemi modello per studiare la segnalazione del calcio e il tessuto epiteliale vivo infettato da virus. Ingegnerizzando organoidi per esprimere indicatori di calcio geneticamente codificati, il nostro approccio consente un imaging coerente e riproducibile a lungo termine in un sistema modello che ricapitola la diversità cellulare dell'epitelio intestinale umano.

Il nostro obiettivo è comprendere gli effetti della segnalazione purinergica paracrina indotta dal virus sia per l'ospite che per il virus. Il nostro lavoro futuro determinerà anche se questo tipo di segnalazione è ampiamente conservato in altri virus e se gli effetti sono simili.